国家自然科学基金(39870200)
- 作品数：13 被引量：17H指数：2
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- ^(99)Tc^m-ASON的制备及其生物分布被引量：4
- 2001年
- 合成了 NHS- MAG3 ,使其与 c- myc m RNA互补的 15个碱基的 5’末端氨基修饰的反义寡核苷酸 (ASON)偶联 ,然后进行 99Tcm标记 ,通过 Sephadex G2 5(φ0 .5cm× 30 cm)分离纯化 99Tcm- ASON,评价其稳定性。结果显示平均标记率为 6 8.4 % ,纯化后 99Tcm- ASON在室温 4 h内放化纯度大于94 % ;与人血清孵育后 ,放化纯度无明显降低 ,与血清蛋白结合较少。荷瘤 BALB/ c裸鼠体内分布研究显示 2 h时肿瘤摄取 99Tcm- ASON达最高值 (6 .2 2 % ID/ g)。以 NHS- MAG3 为螯合剂得到的 99Tcm-ASON具有良好的稳定性 ,在肿瘤部位高浓聚 。
- 张春谭天秩李云春赵可清
- 关键词：放射性核素生物分布反义寡核苷酸
- ^(99)Tc^m-VIP-ASON对结肠腺癌HT29细胞的反义抑制研究被引量：4
- 2003年
- 目的 评价99Tcm 标记血管活性肠肽 (VIP)受体介导的C mycmRNA反义寡核苷酸复合物 (99Tcm VIP ASON)对结肠腺癌HT2 9细胞的反义抑制作用。方法 用99Tcm 标记长度为 15个碱基互补于C mycmRNA的反义寡核苷酸 (ASON) ,在一定条件下与VIP形成99Tcm VIP ASON复合物 ,测定HT2 9细胞对99Tcm VIP ASON的摄取率以及99Tcm VIP ASON对HT2 9细胞生长和C myc癌蛋白质表达的影响。结果 摄取研究显示 ,各时间点HT2 9细胞对99Tcm VIP ASON的摄取均高于99Tcm ASON(P <0 .0 5 ) ,摄取率在 12 0min达最高 ,为 2 7.39%。噻唑蓝 (MTT)比色试验中 ,99Tcm VIP ASON组在各剂量下吸光度值均明显低于99Tcm ASON和99Tcm 正义寡核苷酸 (SON)、99Tcm 无义寡核苷酸 (MON)、VIP 多聚赖氨酸结合物 (VIP PL)及空白对照组 ,流式细胞仪测定99Tcm VIP ASON组C myc癌蛋白质的荧光强度为 0 6 33± 0 0 38,显著低于其他各组 (P <0 .0 1)。结论 VIP受体介导途径能显著增加99Tcm ASON的转染效率 ,明显抑制HT2 9细胞的生长和C myc癌蛋白质的表达 ,增强反义抑制作用效果。
- 张春谭天秩匡安仁梁正路李云春郑建国潘卫民
- 关键词：结肠腺癌HT29细胞MRNA
- VIP-^(125)I-ASON的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布被引量：1
- 2005年
- 目的通过制备VIP-^(125)I-ASON(反义寡核苷酸)并观察其在荷瘤裸鼠体内的分布,探讨以血管活性肠肽(VIP)作为载体进行肿瘤放射性反义治疗的可行性。方法以三氯化铊作为氧化剂,将与C-mycmRNA互补的15个碱基的ASON进行125I标记。碘化的ASON与血管活性肠肽-多聚赖氨酸(VIP-PL)通过静电作用结合形成放射性反义复合物。荷瘤BALB/c裸鼠尾静脉注射VIP-^(125)I-ASON或^(125)I-ASON后,于不同时相观察各脏器及肿瘤组织的放射性分布情况。结果125I-ASON主要浓聚在肝、肾,另外肺、脾、胃、肠也有较少浓聚,而其它组织放射性分布极少。除肝、脾、骨外,其余组织的清除速度较快。VIP-^(125)I-ASON在体内的分布以肝为最高,其次为肺、脾、肾脏,其它组织放射性分布较少,各组织中放射性清除较125I-ASON为慢。VIP-^(125)I-ASON在肿瘤组织中摄取增高,2h达最大,为5.89%ID/g,明显高于未经VIP受体介导的125I-ASON肿瘤组织的摄取,其最大值仅为1.98%ID/g。肿瘤/血液及肿瘤/肌肉的放射性比值在4h达最大。结论VIP与125I-ASON偶联后,使其经肾脏排泄减少,血液及组织内清除速度有所减慢,在肿瘤组织摄取增高,可望用于肿瘤的显像诊断与治疗。
- 欧晓红谭天秩李云春
- 关键词：寡核苷酸反义治疗
- VIP-^(131)I-ASON抑制HT29细胞的生长及癌蛋白的表达
- 2006年
- 将互补于C-m yc mRNA的反义寡核苷酸(A SON)进行放射性碘(131I,125I)标记,通过多聚赖氨酸与血管活性肠肽(V IP)偶联形成放射性反义复合物(V IP1-31I-A SON,V IP1-25I-A SON)。以正义(SON)和无义链(M ON)作为对照,比较HT 29结肠癌细胞对125I-A SON和V IP1-25I-A SON的摄取率;利用M TT法和流式细胞计数仪检测C-m yc癌蛋白方法,研究131I-A SON和V IP1-31I-A SON对HT 29结肠癌细胞的作用。实验结果表明,与V IP结合后,125I-A SON在结肠腺癌HT 29细胞中的摄取率大大提高,与未结合125I-A SON摄取率相比差异显著(P<0.05)。V IP1-31I-A SON对HT 29细胞生长抑制作用呈剂量依赖型,且抑制作用显著强于其它各对照组(P<0.05)。流式细胞计数表明,与V IP1-31I-A SON组和131I-A SON组荧光强度明显低于其它各组(P<0.05),而V IP1-31I-A SON组的荧光强度又比131I-A SON组低(P<0.01),表明V IP作为载体,能有效将A SON导入结肠癌细胞,明显抑制HT 29结肠癌细胞的生长和C-m yc癌蛋白的表达。
- 欧晓红谭天秩李云春
- 关键词：放射性碘标记血管活性肠肽受体反义治疗
- ^(131)I-VIP-ASON在荷结肠腺癌裸鼠体内的抑瘤作用被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨1 31 I标记血管活性肠肽 (VIP)受体介导的C mycmRNA反义寡核苷酸复合物(1 31 I VIP ASON)对荷瘤裸鼠结肠腺癌的抑制效果。方法 以TlCl3为氧化剂 ,将1 31 I标记于互补于C mycmRNA的ASON。VIP与1 31 I ASON通过多聚赖氨酸偶联形成放射性反义复合物 (1 31 I VIP ASON) ;通过荷瘤裸鼠体内分布实验观察其在肿瘤中的浓集情况 ;以1 31 I ASON和1 31 I标记的正义寡核苷酸 (SON)、无义寡核苷酸 (MON)为对照 ,观察1 31 I VIP ASON对活体肿瘤的治疗效果。组织切片观察肿瘤组织形态学变化 ,Envision免疫组织染色法观察反义治疗对C myc癌蛋白表达的影响。结果 注射后 2h ,1 31 I VIP ASON在肿瘤部位浓聚显著高于1 31 I ASON (t=7 79,P <0 0 1) ,肿瘤 肌肉放射性比值于 4h达到最高。 7 4MBq1 31 I VIP ASON组能有效抑制肿瘤生长 ,肿瘤生长终点抑制时间为 2 5 4d ,效果明显优于 3 7MBq组 (q=4 2 6 1,P <0 0 1) ,未见明显副作用。组织形态学和免疫组织化学染色观察示 ,注射1 31 I VIP ASON后 ,肿瘤出现大片坏死区和脂肪变性。1 31 I VIP ASON组C myc蛋白表达得分值明显低于其他组 (q =5 5 1,P <0 0 1)。结论 1 31 I VIP ASON可明显抑制荷瘤裸鼠结肠腺癌肿瘤生长及癌蛋白表达 ,可望为肿瘤的诊断和治?
- 欧晓红谭天秩李云春匡安仁
- 关键词：^131I结肠腺癌荷瘤裸鼠
- SHNH法和NHS-MAG_3法标记的^(99m)Tc-寡聚核苷酸的比较
- 2008年
- 比较研究采用联肼尼克酰胺(Hydrazino Nicotinamide Derivative,SHNH)法和N-羟基琥珀酰胺基S-乙酰巯基乙酰三氨基乙酸(N-hydroxysuccinimidyl S-acetylmercaptoacetyltriglycline,NHS-MAG3)法以99mTc标记反义寡聚核苷酸(Antisense Oligonucleotide,ASON)的标记物的放射化学和生物学特性。合成SHNH和NHS-MAG3后,分别以SHNH和NHS-MAG3为双功能络(螯)合剂,用99mTc标记ASON;比较标记物99mTc-SHNH ASON和99mTc-MAG3-ASON的体内外稳定性、兔血浆蛋白结合、正常BALB/C小鼠体内分布及结肠腺癌HT29细胞摄取的情况。结果显示,采用NHS-MAG3法标记的标记物99mTc-MAG3-ASON的标记率和稳定性明显高于SHNH法标记的标记物99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)、血浆蛋白结合率显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON在血液、心脏、胃、肠的分布显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05),而在肝、脾的分布略低于99mTc-SHNH-ASON(P>0.05),但在肾的分布显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON的HT29细胞摄取率显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)。因此,采用NHS-MAG3法的标记物99mTc-MAG3-ASON的放射化学和生物学特性明显优于SHNH法的标记物99mTc-SHNH-ASON。
- 李云春谭天秩郑建国张春
- 关键词：反义寡聚核苷酸
- 制备脂质体包裹的^(99m)锝标记c-myc mRNA反义寡聚核苷酸的研究被引量：2
- 2003年
- 探讨脂质体包裹的 99m-锝标记 c- myc m RNA反义寡聚核苷酸的制备方法 ,为反义显像和反义治疗的实验研究奠定基础。合成 15 bp的反义寡聚核苷酸 (DNA)和双功能螯合剂 -联肼尼克酰胺衍生物 ,DNA与双功能螯合剂偶联后 ,用 99m锝标记 ,然后用 C1 8Sep- Pak反相柱进行纯化 ,根据纯化结果 ,绘制淋洗曲线 ,计算标记率。再用阳离子脂质体对纯化产物进行包裹 ,获得脂质体包裹的 99m锝 - DNA。用纸层析测定脂质体包裹的 99m锝 - DNA的放射性化学纯度及与水、血清孵育后的稳定性。结果 ,不同放射性活度的 99m Tc O4 - 标记时的标记率为 :14 80 MBq时为 6 3.37%± 3.5 1% ,74 0 MBq时为 6 2 .5 2 %± 3.6 9% ,5 92 MBq时为 5 9.82 %± 5 .12 % ,经 χ2检验无显著性差异。脂质体包裹 99m Tc- DNA的放射化学纯度 =96 .4 7%± 3.0 1% ,与水、血清孵育后脱落的 99m Tc极少 ,可见 99m Tc- DNA的稳定性极好。由此可见 ,以脂质体作载体 ,联肼尼克酰胺衍生物作为双功能螯合剂 ,可制备脂质体包裹的
- 郑建国谭天秩张春李云春梁正路涂巨光
- 关键词：脂质体包裹^99M锝标记反义寡聚核苷酸
- 受体介导的反义治疗研究
- 2000年
- 受体介导的反义治疗是利用受体与配体高特异性、高亲和力结合的特点 ,通过受体介导的内吞作用 ,将配体与反义寡核苷酸 (ASON)形成的转运复合物靶向运送到特定的细胞 ,使细胞内的 ASON达到足够高的浓度 ,从而有效发挥反义抑制作用。本文简要综述对受体介导的反义治疗日前常用的受体、转运复合物的形成。
- 张春
- 关键词：受体反义治疗反义寡核苷酸ASON
- 脂质体介导的^(99m)Tc标记c-myc mRNA反义寡核苷酸的反义作用效果的研究
- 2003年
- 目的 探讨脂质体介导的 99m Tc标记癌基因 c- m yc m RNA的反义寡核苷酸能否抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表达。方法 合成 15 bp的癌基因 c- m yc m RNA的反义、正义及无义寡核苷酸 ,用 99m Tc标记后 (简称 99m Tc- DNA) ,一部分用脂质体包裹 ,以不同放射性强度的 99m Tc- DNA及脂质体包裹的 99m Tc- DNA转染细胞 ,于转染后不同时间测定细胞摄取率 ,在转染后 18h测定细胞返流比率 ,用四唑盐比色实验检测反义抑制细胞的生长状况 ,用流式细胞术测定癌蛋白的表达。结果 在 1～ 5 h内 ,细胞的摄取率随时间的延长而增加 ,脂质体包裹的 99m Tc- DNA的细胞摄取率明显高于未用脂质体包裹的 99m Tc- DNA。四唑盐比色实验 ,随着脂质体介导的 99m Tc-反义 DNA剂量的增加 ,细胞数量逐渐减少 ,而正义、无义寡聚核苷酸组 ,细胞数量则没有减少的趋势。细胞的返流比率 ,反义、正义、无义寡核苷酸分别为 3 9.5 1%、44 .12 %、63 .92 %。测定癌蛋白的荧光强度 ,反义寡核苷酸组 2 .9860± 0 .3 73 3、正义寡核苷酸组 4.2 60 0± 0 .2 2 18、无义寡核苷酸组 5 .2 62 0± 0 .85 62 ,反义寡聚核苷酸组的荧光强度明显低于正义和无义寡聚核苷酸组。结论 脂质体介导的99m Tc标记的反义寡核苷酸能抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表?
- 郑建国谭天秩潘卫民张春
- 关键词：脂质体介导^99MTC标记反义寡核苷酸癌基因
- 脂质体介导的^(99)Tc^m标记c-mycmRNA反义寡核苷酸的初步研究被引量：1
- 2001年
- 在 99Tcm 标记 DNA的基础上 ,采用阳离子脂质体对其进行包裹 ,获得了脂质体介导的 99Tcm-DNA。包裹后的标记物反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、无义寡核苷酸的放化纯度分别为 ( 96.5±3.5) %、( 95.3± 3.2 ) %、( 94 .9± 4 .5) % ;比活度分别为 2 .0± 0 .5、1.0± 0 .2、1.4± 0 .3GBq· g-1;介导后的寡核苷酸与水、血清孵育后 ,只有极小量 99Tcm脱落 ,表明其稳定性较好。
- 郑建国谭天秩梁正路李云春匡安仁潘卫民
- 关键词：脂质体介导锝99标记放射性治疗
