陕西省卫生厅科学研究基金(08E04)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
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- 结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测被引量：3
- 2011年
- 目的在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,非变性条件下镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白pET-DnaA,并用Western blot检测和鉴定重组蛋白,用纯化得到的重组蛋白制备特异性免疫血清。结果成功构建了结核杆菌pET-DnaA重组质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达;用分离纯化后的重组蛋白免疫动物,获得高效价的特异性免疫血清。结论结核杆菌DnaA蛋白及其特异性抗体的成功制备,为进一步研究该蛋白在结核菌DNA复制机制中的作用奠定了基础。
- 周爱萍韩蕾王娟段艳吴晓康徐纪茹
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 结核杆菌DnaA蛋白在耻垢分枝杆菌中的同源表达被引量：2
- 2010年
- 目的:在耻垢分枝杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白并对表达产物进行鉴定。方法:用PCR的方法扩增结核杆菌dnaA基因并克隆至表达载体pMF406中,构建重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMF-dnaA。经双酶切及测序鉴定后,用电转化的方法将重组质粒转至耻垢分枝杆菌mc2155中。用0.02%乙酰胺诱导重组耻垢分枝杆菌,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测和鉴定。结果:重组耻垢分枝杆菌构建成功,SDS-PAGE及Western blotting结果显示该重组耻垢杆菌可以实现结核杆菌DnaA蛋白的同源高效表达。结论:结核杆菌DnaA蛋白的同源表达为结核杆菌DNA复制机制的研究奠定了基础。
- 周爱萍陈艳炯李薇张旭燕徐纪茹
- 关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌
