甘肃省科技重大专项计划(09ZNKDA025)
- 作品数：30 被引量：201H指数：8
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- 50Hz正弦交变电磁场促进体外培养成骨细胞分化成熟的双“强度窗”效应被引量：12
- 2011年
- 为研究频率为50 Hz不同强度正弦交变电磁场对体外培养成骨细胞分化及基因表达的影响,体外分离培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为15组,分别用频率50 Hz、强度为0 mT(对照)和0.9～4.8 mT(每组间隔0.3 mT)的正弦交变电磁场处理。发现:正弦交变电磁场处理3～5 d后,成骨细胞呈漩涡样分布;第9 d,1.8和3.6 mT组的碱性磷酸酶活性极显著高于对照组;第0、12、24和96 h,1.5、1.8、3.0和3.6 mT组碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白-2和Osterix基因表达水平显著高于对照组;第10 d,1.8和3.6 mT组钙化结节数明显多于对照组。说明50 Hz、0.9～4.8 mT的正弦交变电磁场能促进体外培养成骨细胞分化成熟,并且具有较明显的双强度"窗效应",其中1.8和3.6 mT作用最为明显。
- 周建陈克明葛宝丰程国政王嘉琪韦哲
- 关键词：成骨细胞碱性磷酸酶OSTERIX
- 蛇床子素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究蛇床子素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响。方法体外分离培养大鼠股骨组织,以雌二醇为阳性对照药物,筛选最佳的药物浓度分别为雌二醇(阳性对照)1×10-8mol/L和蛇床子素1×10-5mol/L,采用终浓度为1×10-5mol/L的蛇床子素对体外培养股骨组织进行药物干预;测定碱性磷酸酶活性、钙含量,实时荧光定量PCR检测骨保护素、核因子κB受体活化因子配体、人类相关转录基因-2以及骨形态发生蛋白-2 mRNA的表达情况。结果 1×10-5mol/L蛇床子素可提高体外培养大鼠股骨组织碱性磷酸酶活性,增加Ca含量,调节骨保护素、核因子κB受体活化因子配体、人类相关转录基因-2和骨形成蛋白-2 mRNA的表达。结论蛇床子素可显著提高体外培养大鼠股骨组织中钙含量、碱性磷酸酶活性以及调节骨代谢相关基因的表达。
- 周建葛宝丰甄平马小妮闫丽娟郭晓宇成魁高玉海石文贵陈克明
- 关键词：蛇床子素股骨代谢
- 金雀异黄酮对体外培养大鼠股骨组织骨代谢活性的影响被引量：2
- 2013年
- 金雀异黄酮（genistein）具有预防绝经后骨质疏松的雌激素样活性作用[l]，许多研究发现其表现一定的骨代谢活性作用，有研究报道其可促进骨髓间充质细胞的成骨性分化成熟[2]和促进成骨细胞的成熟矿似引，但是药物的体内作用过程是一个含有成骨细胞、骨髓间充质细胞、破骨细胞和骨细胞的一个复合群体。
- 周建葛宝丰陈克明马小妮成魁郭晓宇吕享
- 关键词：金雀异黄酮钙含量
- 50Hz PEMFs对BMSCs增殖与成骨性分化最佳参数的筛选
- 2022年
- 目的50Hz低频脉冲电磁场(Pulse Electromagnetic Fields,PEMFs)促进骨髓基质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的强度筛选研究。方法全骨髓法获得BMSCs,接种于10%胎牛血清的低糖培养基中,BMSCs融合到80-90%,传代培养,随机分成7组,分别为Control、0.6mT、1.2mT、1.8mT、2.4mT、3.0m T和3.6mT,分别观察细胞形态的变化,用四甲基偶氮唑蓝测定增殖,分别在6d、9d、12d测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性,磁场处理第10d、15d进行ALP染色和钙结节染色,计算其克隆数和面积。结果脉冲电磁场处理细胞从形态上观察,对骨髓基质干细胞的形态没有影响,0.6mT、1.8mT、2.4mT和3.6mT对BMSCs的增殖起到了显著的促进作用,其中2.4m T的促增殖效应最强(P<0.01);BMSCs内ALP活性随时间的延长,活性逐渐增加,到第9d达到峰值,之后慢慢开始回落。在磁场处理第6d,各磁场组均能提高ALP活性,在磁场处理第9d,0.6mT、2.4mT和3.6mT显著提高ALP活性,其中2.4mT始终处于最高水平(P<0.01)。2.4 mT组ALP染色、茜素红染色都极显著(P<0.01)高于其他处理组。结论2.4 mT 50 Hz脉冲电磁场是最佳的促进骨髓基质干细胞成骨性分化和矿化成熟强度参数,这可能为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了理想的治疗参数。
- 闫娟丽马慧萍高玉海陈克明
- 关键词：骨髓基质干细胞成骨性分化脉冲电磁场
- 不同强度50Hz脉冲电磁场促进大鼠颅骨成骨细胞矿化成熟最佳参数的筛选被引量：8
- 2014年
- 为研究不同强度脉冲电磁场（pulse electromagnetic fields,PEMFs）对大鼠颅骨成骨细胞（rat skull osteoblasts,OB）增殖及成熟矿化的影响,将大鼠颅骨成骨细胞随机分为7组.检测大鼠颅骨成骨细胞的增殖,细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性变化,细胞沉积钙盐的情况,组织化学染色以及成骨细胞内标志性分子表达量的改变.结果显示,0.6 mT组促细胞增殖作用最强（P〈0.01）;0.6mT、1.8 mT、3.0 mT和3.6 mT均能提高ALP活性,其中0.6 mT ALP活性最高（P〈0.01）;在磁场处理4-12 d时细胞沉积钙盐逐渐增加,6种强度的脉冲电磁场均能促进钙盐沉积,尤以0.6 mT水平最高;ALP染色、茜素红染色0.6 mT组均显著高于对照组（P〈0.01）;0.6 mT组Bmp-2和Collagen-1 mRNA的表达明显（P〈0.01）高于对照组,磁场处理组Rankl mRNA的表达均比对照组低.0.6 mT 50 Hz脉冲电磁场是促进成骨细胞增殖和矿化成熟的最佳参数,这为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了治疗参数的基础支持.
- 闫娟丽王鸣刚陈克明葛宝丰周建马小妮宋鹏成魁
- 关键词：脉冲电磁场成骨细胞骨质疏松成骨分化
- 淫羊藿苷通过OPG/RANKL信号途径调节骨吸收的机理研究被引量：21
- 2013年
- 目的探讨淫羊藿苷抑制骨吸收的机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质干细胞,流式检测细胞纯度。加入10-5M淫羊藿苷12 h、24 h、36 h、48 h后用Real-time-RT-PCR检测OPG和RANKL基因表达,Western blotting检测蛋白表达。结果第2代培养细胞的纯度达到95%以上。OPG基因和蛋白表达水平在24 h时明显升高,与对照相比有显著差异。OPG和RANKL的比值显著高于对照组。结论淫羊藿苷主要通过提高OPG及OPG和RANKL的比值来发挥抑制骨吸收的作用。
- 马小妮葛宝丰陈克明周建王嘉琪郭晓宇宋鹏吕享成魁
- 关键词：核因子ΚB受体活化因子配体骨保护素淫羊藿苷
- 淫羊藿苷对骨髓间充质成骨性活性强于金雀异黄酮被引量：2
- 2013年
- 目的:比较研究金雀异黄酮与淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞(rats bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质细胞,筛选最佳的药物浓度;采用终浓度为1×10-5mol.L-1的金雀异黄酮和淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞进行干预;在药物干预后的第3,6,9,12,15天后测定碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase,ALP)和3,6,9,12,15 d测定钙含量;第12天进行钙化结节茜素红染色;在药物干预后第12,24,48,72,96 h Real-time RT-PCR检测OXS,Runx-2,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和Collagen-I mRNA的表达水平。结果:浓度为1×10-5mol.L-1金雀异黄酮和淫羊藿苷可提高ALP活性最高,增加Ca含量,调节骨代谢活性Runx-2,OXS,BMP-2和Collagen-I mRNA的表达水平,淫羊藿苷比金雀异黄酮的成骨性作用更强一些。结论:在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化作用方面淫羊藿苷较强于金雀异黄酮。
- 周建陈克明葛宝丰马小妮郭晓宇成魁高玉海闫丽娟石文贵
- 关键词：淫羊藿苷金雀异黄酮
- 淫羊藿苷促进大鼠骨髓基质细胞成骨性分化过程中对p-AKT及eNOS、iNOS表达量的影响被引量：7
- 2013年
- 目的研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)的成骨性分化机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质细胞并用流式检测细胞纯度。骨髓基质细胞传代至第2代时分别用含有成骨性诱导剂的1×10-5mol/L ICA和LY294002处理24 h后用Real-time RT-PCR检测ALP、eNOS和iNOS的mRNA表达水平,Western blotting检测ALP、p-AKT、eNOS和iNOS的蛋白表达量。结果原代骨髓基质细胞体外培养传代至第2代时纯度可达95%以上。基因和蛋白质检测均显示ICA可极显著的促进碱性磷酸酶(ALP)的表达(P<0.01),PI3K的特异性抑制剂LY294002会抑制ICA对ALP的提高,ICA+LY294002组与CON组的表达差别不明显。p-AKT的蛋白表达变化与ALP相似。ICA可以提高eNOS表达(P<0.01),加抑制剂能使其降低(P<0.01),而iNOS的ICA组与ICA+LY294002组无明显差别。结论 ICA促进BMSCs成骨性分化过程涉及到PI3K/AKT通路,且AKT位于eNOS的上游;eNOS和iNOS共同作用,但iNOS起主要作用。
- 郭晓宇葛宝丰陈克明甄平周建马小妮
- 关键词：大鼠骨髓基质细胞淫羊藿苷
- 不同处理时间的静磁场对体外培养大鼠成骨细胞成熟分化及雌激素受体基因表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究静磁场(SMFs)的不同处理时间对体外培养大鼠成骨细胞成熟分化及雌激素受体(ER)基因表达的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,用磁场强度为3.9 mT的SMFs每天分别处理0(对照组)、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0 h。倒置相差显微镜下观察细胞形态;48 h后检测细胞增殖情况;第3、6、9和12天测定骨钙素含量。在SMFs处理0、24、48和72 h后,采用逆转录实时PCR检测ERα和ERβ的mRNA表达水平。结果与对照组相比,2.0、2.5和3.0 h组的细胞增殖显著增强(P<0.05)。SMFs处理第6、9和12天,2.5 h组的骨钙素含量始终高于对照组(P<0.05)。SMFs处理0 h和72 h后,提高了ERαmRNA表达量,降低了ERβmRNA表达量。结论不同时间SMFs处理均促进细胞增殖,增加骨钙素含量;改变ERα和ERβmRNA表达量,且ERα和ERβ的调控方向相反。
- 王嘉琪马小妮周建葛宝丰郭晓宇陈克明
- 关键词：成骨细胞静磁场分化雌激素受体
- 淫羊藿苷调节成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收的机制被引量：49
- 2013年
- 目的探讨淫羊藿苷(ICA)调节骨形成和骨吸收的机制。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,茜素红钙化结节染色,加入10-5mol/LICA12、24、36、48h后,用real-time RT-PCR检测骨源性分化的调节基因OSX、Runt相关基因2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达,Westernblotting检测OPG、RANKL和Ⅰ型胶原蛋白表达。加入10-5mol/LICA作用10～90min,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度。结果与对照组相比,ICA能明显促进骨形成,表现为OSX、Runx-2、ALP和Collagen Ⅰ基因表达量及Collagen Ⅰ蛋白表达量明显增加(P均<0.01),同时提高细胞内钙离子浓度。ICA也能明显抑制骨吸收,表现为提高OPG及OPG/RANKL基因和蛋白水平的表达量。结论 ICA可能是通过促进OSX、Runx-2、ALP和Collagen Ⅰ基因表达,提高CollagenⅠ蛋白表达量及细胞内钙离子浓度来促进成骨细胞骨形成;并通过促进OPG及OPG、RANKL基因和蛋白水平的表达量来抑制破骨细胞骨吸收。
- 马小妮葛宝丰陈克明周建石文贵谢艳芳郭晓宇吕享成魁高玉海
- 关键词：成骨细胞核因子ΚB受体活化因子配体骨保护素淫羊藿苷
