江苏省自然科学基金(BK2010276)
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
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- 多基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞被引量：1
- 2013年
- 目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程的iPS细胞。以重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合感染小鼠iPS细胞,体外培养后以RT-PCR检测胰岛B细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;ELISA检测不同糖浓度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰岛素的分泌量。结果起源于MEFs的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织,显示MEFs被成功地重编程为iPS细胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛类B细胞,RT-PCR结果显示其胰岛B细胞功能基因的表达与小鼠胰岛B细胞株MIN6相似。免疫荧光检测可见胰岛类B细胞内有胰岛素表达。ELISA检测结果显示胰岛类B细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。结论胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用,使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。
- 范向军王雷陆玉华朱铭岩钱海鑫王志伟
- 关键词：胰岛素分泌细胞转录因子细胞分化
- 细胞免疫荧光检测人胰腺癌干细胞Oct4、Nanog基因的表达被引量：2
- 2013年
- 目的:研究胚胎干细胞相关基因Oct4和Nanog在人胰腺癌肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞中表达的差异。方法:用流式细胞仪在人胰腺癌Panc-1细胞系中分选肿瘤干细胞,细胞免疫荧光法检测2种肿瘤干细胞和Panc-1细胞中Oct4、Nanog基因的表达情况。结果:Oct4及Nanog基因在2种分选出的细胞中表达均高于未分选细胞。结论:干细胞相关基因Oct4、Nanog在胰腺癌Panc-1肿瘤干细胞中的表达高于普通胰腺癌细胞。
- 陈锦鹏王志伟陆玉华陆俊杰钱海鑫
- 关键词：胰腺癌肿瘤干细胞NANOGOCT4
- Oct4和Nanog基因沉默对胰腺癌干细胞耐药性的影响
- 2014年
- 目的观察通过RNA干扰同时沉默Oct4和Nanog基因对胰腺癌干细胞(PCSCs)化疗药物耐药性的影响,探索提高胰腺癌化疗效果的新方法。方法通过流式细胞仪从人胰腺癌细胞系PANC-1中分离出CD44+CD24+ESA+的PCSCs,体外建株,通过构建特异性慢病毒shRNA-Oct4/Nanog载体同时沉默PCSCs的Oct4和Nanog基因,分选出基因沉默的PCSCs(PCSCs-shOct4+shNanog),通过CCK8细胞活性检测法观察其对化疗药物吉西他滨敏感性的变化,Real-Time RT-PCR和Western blotting检测耐药相关基因ABCG2的表达。结果 CD44+CD24+ESA+的PCSCs高度表达Oct4和Nanog基因,在体外表现为对吉西他滨的耐药性增强。Oct4和Nanog基因同时被沉默后PCSCs干性特征出现抑制,ABCG2表达下降,耐药性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Oct4和Nanog基因在保持PCSCs肿瘤干性特性方面发挥重要作用,沉默二者表达后PCSCs的耐药性受到抑制。
- 陆洋陆玉华朱慧单海燕陆俊杰钱海鑫王志伟
- 关键词：OCT4NANOG胰腺癌干细胞基因沉默
- Oct4和Nanog在胰腺癌干细胞中表达的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究Oct4和Nanog基因在人胰腺癌细胞系及干细胞中的表达情况。方法:用流式细胞仪,以CD44+CD24+和CD44+CD24+ESA+为表面标记,在胰腺癌Panc-1细胞中分选肿瘤干细胞,RT-PCR、定量PCR及免疫荧光法检测肿瘤干细胞中Oct4、Nanog基因的表达情况。结果:分选出的胰腺癌CD44+CD24+细胞约占细胞总量的1%～3%,CD44+CD24+ESA+约占细胞总量的0.1%～0.8%,Oct4及Nanog基因在两种分选出的细胞中表达均高于未分选细胞,在CD44+CD24+ESA+细胞中的表达高于CD44+CD24+细胞。结论:干细胞相关基因Oct4、Nanog高表达于胰腺癌干细胞中,其表达量与干细胞纯度成正相关。
- 陆俊杰陆玉华朱慧李晓红朱铭岩范向军朱沙俊王志伟
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤干细胞OCT4NANOG基因表达
- 胰体尾癌86例诊治与预后分析被引量：1
- 2011年
- 目的：分析胰体尾癌的临床特点,经影像学资料评估肿瘤根治的可能,总结治疗体会提高治疗效果。方法：根据患者探查情况选择扩大根治术、根治性切除术、姑息性切除术或剖腹探查术等不同术式。经手术标本、组织活检和穿刺细胞学检查获得病理证实。结果：（1）胰体尾癌86例中手术74例,手术切除58例（78.4%）,其中扩大根治14例,根治性切除28例,姑息性切除16例,剖腹探查16例。血管侵犯：脾动静脉28例（37.8%）,腹腔干及肠系膜上动脉8例（10.8%）,门静脉4例（5.4%）。肿瘤大小：直径1.3~15 cm,平均8.3 cm;其中手术切除组肿瘤直径1.3~10.1 cm,平均5.2 cm。术后并发腹腔出血3例,胰瘘2例,腹腔感染4例,肠瘘1例。（2）病理证实81例中,高分化腺癌13例,中分化腺癌36例,低分化腺癌19例,粘液癌6例,囊腺癌、腺鳞癌各3例,肉瘤样癌变1例。（3）获随访72例（83.7%）,平均15个月。中位生存时间：扩大根治术25个月,根治性切除术20个月,姑息切除组10个月,未切除肿瘤组3.8个月。结论：早期诊断、早期手术是延长胰体尾癌患者生存期的最佳选择,根治术和扩大根治术是延长患者生存期的有效方法。
- 陆玉华王志伟朱铭岩王尧范向军朱沙俊郭青松陈玉泉
- 关键词：胰体尾癌B超检查磁共振检查电子计算机断层扫描术胰腺癌根治术
- 胚胎干性相关基因在胰腺癌干细胞中的表达变化被引量：3
- 2011年
- 目的观察胚胎干性相关基因Oct4和Nanog在胰腺癌干细胞中的表达变化及意义。方法将人胰腺癌细胞株PANC-1制备成单细胞悬液，予以CD24、CIM4抗体孵育，经流式细胞分选仪分选出CD24＋CD44＋的胰腺癌干细胞，显微镜下观察干细胞球形成率；以含10％胎牛血清（FBS）培养液诱导干细胞球细胞分化，流式检测CD24和CIM4的表达；将细胞分成双阳性干细胞组和未分选组，反转录-PCR和定量PCR检测胚胎干性相关基因Oct4和NanogmRNA在胰腺癌干细胞中的转录差异；免疫荧光法检测Oct4和Nanog的表达情况；用CCK8法检测上述两组细胞在体外对化疗药物耐受的差异。结果在人胰腺癌细胞株PANC-1中成功分离出1％-3％CD24＋CD44＋的胰腺癌干细胞，在干细胞培养基中呈悬浮球状生长，且与未分选组（93±5）％。相比具有较高的干细胞球形成率[（122±6）‰，P〈0．05]，经过血清诱导分化，细胞逐渐恢复原代细胞形态，且CD24、CD44表达下降；胚胎干性相关基因Oct4和Nanog在双阳性干细胞组中高表达；CD24＋CD44＋干细胞具有更强的化疗耐受能力（P〈0．05）。结论CD24＋CD44＋细胞具有胰腺癌干细胞特性及高耐药性，胚胎干性相关基因Oct4和Nanog在胰腺癌干细胞中高表达且与胰腺癌干细胞干性的维持及高耐药性可能存在高度相关性。
- 陆玉华朱慧王志伟范向军朱沙俊李晓红王尧陆俊杰朱铭岩
- 关键词：胰腺肿瘤干细胞
- 小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较
- 2013年
- 目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BMMNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。
- 王尧王雷陆玉华范向军朱铭岩朱沙俊王志伟
- 关键词：诱导性多潜能干细胞骨髓间充质干细胞骨髓单核细胞小鼠胚胎成纤维细胞
- 人胰腺癌肿瘤干细胞体外增殖及耐药的研究被引量：4
- 2013年
- 目的研究胰腺癌肿瘤干细胞体外增殖能力及其对化疗药吉西他滨的耐受性。方法以CD44+CD24+ESA+为表面标记,用流式细胞仪在人胰腺癌Panc-1细胞系中分选肿瘤干细胞,接种在96孔板中,用CCK8法检测其体外增殖能力,描制生长曲线。用吉西他滨分别干预普通肿瘤细胞和肿瘤干细胞,分析化疗药刺激对两种细胞生长的影响,并计算IC50值。结果 CD44+CD24+ESA+阳性细胞生长速度明显慢于Panc-1细胞。吉西他滨抑制48h,Panc-1细胞IC50值为982μg/ml,CD44+CD24+ESA+细胞IC50值为1981μg/ml;抑制72h,Panc-1细胞IC50值为670μg/ml,CD44+CD24+ESA+细胞IC50值为1484μg/ml。结论肿瘤干细胞在体外培养中表现缓慢生长和对化疗药物耐受的特性。
- 陈锦鹏王志伟陆玉华陆俊杰钱海鑫
- 关键词：吉西他滨
- 沉默Oct4和Nanog基因抑制胰腺癌干细胞的生物学特征被引量：2
- 2013年
- 目的探讨特异短发夹RNA(shRNA)沉默胰腺癌PANC-1肿瘤干细胞(PCSCs)生物学特征的变化及其机制。方法从PANC-1细胞株中分离出CD44+CD24+上皮特异性抗原(ESA)+PCSCs,检测Oct4和Nanog蛋白表达。用慢病毒载体介导的shRNA沉默PCSCs中Oct4和Nanog表达,用荧光定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。通过单克隆形成实验、Transwell小室模型、细胞计数试剂盒8(CCK8)检测Oct4和Nanog对PCSCs增殖、迁移、侵袭和药物敏感性的影响。NOD/SCID小鼠致瘤实验观察Oct4和Nanog对PCSCs致瘤性的影响。结果 PANC-1细胞株中PCSCs占0.1%-0.8%,Oct4和Nanog在PCSCs中呈高表达(P<0.05);慢病毒载体介导的shRNA降低PCSCs中Oct4和Nanog的表达(P<0.05)。沉默Oct4、Nanog后,PCSCs的单克隆形成、增殖、迁移、侵袭能力下降,药物敏感性增强并诱导凋亡(P<0.05)。致瘤实验表明,沉默Oct4和Nanog后,PCSCs致瘤能力下降(P<0.05)。结论 Oct4和Nanog在PCSCs中高表达,慢病毒介导的shRNA可沉默PCSCs中Oct4、Nanog的表达。沉默PCSCs中Oct4和Nanog的表达可抑制PCSCs相关生物学特征,增强其药物敏感性并诱导细胞凋亡。
- 范向军陆玉华王雷朱铭岩钱海鑫王志伟
- 关键词：胰腺癌基因沉默
