国家自然科学基金(31272387)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：孙兆增刘慧芳王新曾林殷慧慧更多>>
- 相关机构：军事医学科学院青岛农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 肿瘤细胞外泌体中融合基因的检测
- 2017年
- 目的:探究肿瘤细胞分泌的外泌体中是否可以检测到来源于源细胞的融合基因m RNA。方法:培养人非小细胞肺癌NCI-H3122细胞,采用外泌体试剂盒提取细胞上清中的外泌体,并用Western Blot实验验证外泌体是否提取成功。分别提取外泌体以及H3122细胞中的总RNA,将RNA反转录为c DNA,通过PCR反应扩增v1型EML4-ALK融合基因片段,经琼脂糖凝胶电泳确定目的条带后,将两种PCR产物送公司进行基因测序,最后对测序结果进行比对分析。结果:从H3122细胞上清中成功提取了外泌体,并且在外泌体中检测到来源于H3122细胞的m RNA;从H3122细胞外泌体中检测到EML4-ALK融合基因,并发现外泌体中的EML4-ALK融合基因的融合形式为V1,与在H3122细胞中检测到的EML4-ALK融合基因的融合形式完全相同。结论:肿瘤细胞分泌的外泌体中可以检测到肿瘤细胞来源的m RNA,并且外泌体中的m RNA可以反映肿瘤细胞m RNA的基因融合情况等生物学特性。
- 殷慧慧郗永义吴晓洁谭招丽崔琮邵勇高丽华法云智胡显文王友亮孙兆增
- 关键词：外泌体EML4-ALK基因融合MRNA
- Frizzled 3、Frizzled 4基因对黑线仓鼠A:CHA白化性状产生影响的初步分析
- 2017年
- 为了比较Wnt通路重要结合受体Frizzled家族的Frizzled 3、Frizzled 4受体蛋白基因在黑线仓鼠及其白化突变系(A:CHA)皮肤组织的表达差异,分析这两种基因对白化性状产生的影响,试验提取黑线仓鼠和A:CHA的皮肤组织总RNA,利用普通PCR方法筛选引物,通过实时荧光定量PCR技术比较黑线仓鼠和A:CHA皮肤组织Frizzled 3、Frizzled 4基因表达量的差异。结果表明:黑线仓鼠皮肤中的Frizzled 3、Frizzled 4基因mRNA的相对表达量分别是A:CHA组织中的4倍、5倍。Frizzled 3、Frizzled 4基因在A:CHA皮肤组织中的表达量下调。说明Frizzled 3、Frizzled 4基因与A:CHA白化性状的产生存在一定关联。
- 王新刘慧芳易思萌殷慧慧孙兆增
- 关键词：黑线仓鼠FRIZZLEDFRIZZLED实时荧光定量PCR
- 黑线仓鼠白化突变系抑制差减文库的构建及初步分析被引量：2
- 2013年
- 目的构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库，分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段，并进行初步分析。方法以黑线仓鼠作为实验组（tester），以其白化突变系作为驱动组（driver），采用抑制差减杂交技术构建差减文库（SSH）。对阳性克隆进行测序并分析。结果共获得126个有生物学意义的表达序列标签（ESTs），包括21个骨架蛋白，42个转录因子，24个代谢酶基因，25个转运分子及其调节蛋白和4个未知基因。差异基因中没有发现常见的白化疾病相关基因，发现多种与溶酶体的形成及内吞作用相关的基因，推测黑线仓鼠白化突变性状的产生可能与黑色素的运输障碍有关。结论成功构建了黑线仓鼠白化突变的抑制差减文库，获得126个白化突变的相关基因，为进一步寻找白化突变相关基因，揭示其分子机制奠定了基础。
- 李爱学曾林尚世臣王鹏姚晓兰孙兆增
- 关键词：黑线仓鼠差减杂交
- 猕猴B病毒囊膜蛋白gD基因真核细胞表达载体的构建及表达
- 2015年
- 目的构建猕猴B病毒囊膜蛋白gD的真核表达载体,并且检测其在293T细胞内的表达情况。方法首先通过基因合成手段获得含B病毒gD蛋白的基因片段,在经由PstⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体,随后将构建的pEGFP-N3-GD重组质粒转染到人胚胎肾上皮细胞系293T细胞。再用Western blot检测所提蛋白其在细胞内的表达情况,并用激光共聚焦分析其在细胞内的表达定位情况。结果成功获得携带gD基因的阳性重组质粒pEGFP-N3-GD,且pEGFP-N3-GD重组质粒能在293T细胞的表面正常表达。结论利用真核表达系统,既能够在细胞表面产生B病毒gD蛋白的特异性重组抗原,而且可用于B检测抗原的制备。
- 王新易思萌刘慧芳马凯范君文马雨楠游颖孙兆增
- 关键词：真核表达
- SLC24A5,SLC39A9基因在黑线仓鼠及其A：CHA品系表达水平的比较分析
- 2014年
- 目的 比较可溶性物质运输蛋白SLC24A5（solute carrier family 24,member5,SLC24A5）和SLC39A9（solute carrier family 39,member9,SLC39A9）在黑线仓鼠及其白化突变系（A：CHA）皮肤组织的基因表达差异,分析这两种基因对白化性状产生的影响.方法 提取黑线仓鼠和A：CHA的皮肤组织总RNA,利用普通PCR的方法筛选引物,利用实时荧光定量PCR技术,比较分析黑线仓鼠和A：CHA皮肤组织SLC24A5、SLC39A9表达量的异同.结果 黑线仓鼠皮肤中的SLC24A5、SLC39A9基因mRNA的相对表达量分别是A：CHA组织中的2倍和3.8倍.结论 SLC24A5、SLC39A9基因在A：CHA皮肤组织的表达量下调,说明SLC24A5和SLC39A9基因与A：CHA白化性状的产生存在一定的关联性.
- 刘慧芳孙书芳曾林曹玉华严翔范君文孙兆增王新
- 关键词：黑线仓鼠实时荧光定量PCR
