深圳市科技计划项目(200701020)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究
- 2013年
- 目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础。方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GV期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量。同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态。结果 RB1在小鼠GV期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GV期的2倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化。GV期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化。结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GV～MⅡ)中尚未发生甲基化。
- 黄品秀李蓉林洪波赵善飞刘波澜
- 关键词：胚胎植入卵母细胞RB1甲基化
- 小鼠单个不同阶段卵母细胞新抑癌印迹基因RB1的表达被引量：1
- 2012年
- 目的研究新抑癌印迹基因RB1在小鼠单个不同阶段卵母细胞中的表达。方法采用改良单细胞RT-PCR方法检测RB1在单个不同阶段卵母细胞中的mRNA表达。结果 RB1在小鼠单个卵母细胞GⅤ、MⅠ、MⅡ均有检测到正常表达,不同卵母细胞的RB1表达量不同,其中8个MⅡ期卵母细胞,3个卵母细胞明显表达,1个表达较弱,其余4个无明显表达。结论 RB1在小鼠不同阶段卵细胞中均有表达,但是不同细胞RB1存在明显表达的差异。新印迹基因RB1的研究有助于研究卵母细胞成熟及胚胎生长发育,尤其使用单细胞进行研究,更有利于对表观遗传学深入研究探讨。
- 黄品秀李蓉王俊豪林洪波赵善飞郭梁洁
- 关键词：胚胎植入遗传学卵母细胞
