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国家自然科学基金(31272369)

作品数：5 被引量：6H指数：2
相关作者：崔玉宝黄思怡俞黎黎卞勇华史卫红更多>>
相关机构：盐城市第三人民医院江苏医药职业学院无锡市儿童医院更多>>
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文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生

主题

  • 5篇粉尘螨
  • 5篇尘螨
  • 3篇蛋白
  • 2篇蛋白基因
  • 2篇生物信息
  • 2篇生物信息学
  • 2篇螨变应原
  • 2篇克隆
  • 2篇基因
  • 2篇分子
  • 2篇粉尘螨变应原
  • 2篇变应原
  • 2篇尘螨变应原
  • 1篇动力学
  • 1篇动力学模拟
  • 1篇原核表达
  • 1篇原核表达质粒
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体

机构

  • 2篇南京医科大学
  • 2篇盐城市第三人...
  • 2篇无锡市儿童医...
  • 2篇江苏医药职业...
  • 1篇南京医科大学...
  • 1篇无锡市人民医...
  • 1篇盐城卫生职业...

作者

  • 2篇崔玉宝
  • 1篇史卫红
  • 1篇卞勇华
  • 1篇俞黎黎
  • 1篇黄思怡

传媒

  • 2篇中国病原生物...
  • 1篇广西医学
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇中国媒介生物...

年份

  • 1篇2023
  • 1篇2020
  • 1篇2019
  • 2篇2017
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
粉尘螨长链脂肪酸转运蛋白基因克隆及序列分析被引量：2
2020年
目的获得粉尘螨长链脂肪酸转运蛋白(long-chain fatty acid transport protein,FATP)编码基因及其分子特征。方法根据粉尘螨转录组基因测序结果,获得FATP编码序列片段,据此设计引物,用反转录-聚合酶链式反应从粉尘螨总RNA中扩增全长基因片段,构建原核表达质粒pET28a(+)-FATP。成功获取FATP序列后,利用Expasy、SingaIP 5.0、GOR4和TMpred等软件进行氨基酸序列结构和功能分析,最后利用Clustal Omega及MEGA-X软件进行同源性分析。结果基因编码序列全长1071 bp,编码的蛋白质由356个氨基酸组成,其亲水性指数为-0.39,此蛋白为可溶性蛋白,结构稳定,二级结构包括α-螺旋(25.56%)、延伸主链(23.04%)和无规则卷曲(51.40%)。该蛋白存在两处较明显的跨膜区段,由外向内的跨膜区位于1~20位氨基酸,由内向外的跨膜区在100~116位氨基酸。同源氨基酸序列构建的分子进化树中发现与家蚕聚成一簇。结论获得了粉尘螨FATP编码基因全长及其分子特征,为探讨粉尘螨生理现象、开发粉尘螨控制措施奠定基础。
朱晗婷吴美丽周鹰吴冰崔玉宝
关键词：粉尘螨分子克隆生物信息学
应用短肽阵列筛选哮喘患儿血清粉尘螨变应原特异性IgE抗体的结合表位被引量：4
2017年
目的筛选粉尘螨(Der f)主要和中等效价变应原(Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Der f7)可能具有的线性表位。方法根据Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Der f7活性部位氨基酸序列,各合成含8个氨基酸的短肽,相互之间重叠7个氨基酸,将这些短肽点到芯片上构建微阵列,将此微阵列芯片与人血清Ig E进行免疫标记反应,扫描芯片并分析数据。结果合成了5组变应原共1128个短肽,并构建微阵列芯片。将6份对粉尘螨过敏的儿童血清混合并加样到微阵列芯片上,进行扫描和数据分析,最终得到Der f1的4个表位(第46~53位氨基酸、第71~78位氨基酸、第99~110位氨基酸和第179~186位氨基酸),Der f2的3个表位(第15~22位氨基酸、第80~89位氨基酸和第106~113位氨基酸),Der f4的6个表位(第69~82位氨基酸、第107~116位氨基酸、第225~232位氨基酸、第261~268位氨基酸、第355~365位氨基酸和第483~496位氨基酸),Der f5的1个表位(第102~109位氨基酸)和Der f7的3个表位(第32~39位氨基酸,第52~64位氨基酸和第100~107位氨基酸)。结论确定了粉尘螨变应原Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Der f7线性表位。
滕飞翔孙金霞王楠俞黎黎崔玉宝
关键词：尘螨变应原
粉尘螨变应原第2组分真核表达载体的构建及其在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达被引量：1
2017年
目的构建含粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)基因真核表达载体,并观察其在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达。方法提取粉尘螨总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法扩增Der f 2基因,测序鉴定后将Der f 2基因克隆入pcDNA3.0质粒中,构建真核表达载体pcDNA3.0-Der f 2。将小鼠BMSCs分3组进行实验,包括pcDNA3.0-Der f2转染组、pcDNA3.0空质粒转染组及未转染组,分别利用RT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Der f 2基因及蛋白在3组BMSCs中的表达。结果扩增的Der f 2基因序列与Gen Bank的参考序列完全一致,Der f 2基因正确克隆至真核表达载体pcDNA3.0中。转染BMSCs 48 h后,RT-PCR、Western blot检测结果显示,未转染组和pcDNA3.0空质粒转染组未检测到Der f 2基因表达,pcDNA3.0-Der f 2转染组检测到特异性条带,且大小与预期相符。结论 pcDNA3.0-Der f 2真核表达载体构建成功,Der f 2的mRNA和蛋白能在小鼠BMSCs中正确表达。
卞勇华俞黎黎黄思怡史卫红崔玉宝
关键词：粉尘螨变应原骨髓间充质干细胞真核表达载体
粉尘螨水通道蛋白DerfAQP2分子模拟和自由能计算
2019年
目的探讨粉尘螨水通道蛋白DerfAQP2的工作机制。方法用SWISS-MOEL软件对DerfAQP2进行同源建模,用VMD软件建立分子模拟体系,用NAMD2.9软件包进行动力学模拟并对体系进行优化,等温等压系综环境下计算水分子通过时的吉布斯自由能。结果以大肠埃希菌水甘油通道蛋白(PDB code:1LDF)晶体结构作为模板构建DerfAQP2蛋白质空间构像,使用VMD软件生成psf文件,将DerfAQP2蛋白单聚体放置于80×80×100?~3大小的盒子中,加入TIP3型水分子、55个钠离子、53个氯离子,最终体系共计60 184个原子。经过20 ns的分子动力学模拟,DerfAQP2蛋白结构趋于稳定。取dcd文件进行结构分析,发现8个水分子在通道内构成单列水,当水分子进入的通道外前庭时,DerfAQP2的通道残基由Arg203、Tyr44和Ile188残基构成;在通道的中间部分,可见NPA结构的Asn200和Asn64;在细胞质与通道交界附近,水分子与周边的His62以及Ala61、Ile63、Ser52残基间相互作用。将单列水起始位置的能量定义为0,绘制自由能曲线,可见水分子通过通道的能量屏障约为2.0 kcal/mol。结论成功建立了粉尘螨水通道蛋白DerfAQP2的三维空间结构和分子模拟体系,解析了其运输水分子的关键氨基酸。
周鹰吴美丽俞黎黎滕飞翔崔玉宝
关键词：粉尘螨水通道蛋白分子动力学模拟自由能
粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白基因原核表达质粒的构建及结构分析
2023年
目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入E.coil BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的结构等生物学特征。结果获得的粉尘螨Grx1编码基因全长315bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-Grx1转化入大肠埃希菌感受态细胞后经IPTG诱导,表达相对分子质量为25.9×10^(3)的重组蛋白。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由104个氨基酸组成,主要分布于细胞核(占87.0%)。该蛋白含有11个潜在磷酸化位点(4个苏氨酸,6个丝氨酸和1个酪氨酸),二级结构为α-螺旋(45.19%)、无规则卷曲(31.73%)、延伸链(14.42%)和β-转角(8.65%)。将该基因推导出的编码氨基酸序列进行Blast获得同源基因与屋尘螨谷胱甘肽样C8样蛋白(Dermatophagoides pteronyssinus glutaredoxin-C8-like)同源性最高(83.52%)。结论获得了粉尘螨Grx1的编码基因及其原核表达质粒,生物信息学分析该蛋白含有潜在的磷酸化位点且主要分布于细胞核,可为该基因的生理功能研究及粉尘螨的防制提供参考。
任雅宁周鹰袁存银周冬梅廖媛芬强士豪罗金丹崔玉宝
关键词：粉尘螨生物信息学基因克隆
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