黑龙江省卫生厅科研项目(2007-062)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：高春阳李罡金莲锦韩冬梅孙革更多>>
- 相关机构：牡丹江医学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 异种脱蛋白松质骨支架与经诱导骨髓间充质干细胞的生物相容性被引量：8
- 2009年
- 背景:研究证明脱蛋白松质骨具有良好的孔隙结构、生物可降解性和力学特性,但是应用于临床还要考虑其安全性。目的:观察异种脱蛋白松质骨支架与经诱导骨髓间充质干细胞的相容性以及对其生物学行为的影响。设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。材料:取成年猪新鲜股骨远端松质部分,初制为3cm×0.5cm×0.5cm大小。抽取山羊髂骨骨髓,梯度密度离心法分离提纯骨髓间充质干细胞,传至第2代时换含1×10-7mol/L地塞米松、1×10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠、100mg/L维生素C的培养液进行成骨诱导。方法:无菌条件下将支架材料置入6孔板内,每孔1块,重复3孔。调整细胞悬液浓度为2×109L-1,向每块支架滴加细胞悬液1mL,培养5h后将骨块翻面后沿6孔板内壁缓慢加入诱导培养液10mL。另3孔接种相同数量细胞单纯培养做对照分析。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞贴附及基质分泌情况,MTT法分析种子细胞与支架复合培养1,3,5,7d后的存活和增殖能力,复合培养1,3,5,7d后检测碱性磷酸酶活性,流式细胞仪分析复合培养7d后细胞周期、DNA倍体水平及细胞凋亡率。结果:复合培养3d时接种于支架上的细胞在孔隙内表面贴壁生长,并分泌较多的细胞外基质,复合培养5,7d,细胞基质分泌旺盛,几乎充满支架孔隙。在各个时间点复合材料组骨髓间充质干细胞增殖峰值高于单纯培养组,但差异无显著性意义(P>0.05)。复合材料组倍增时间为3d,单纯培养组为3.15d。各时间点两组碱性磷酸酶活性差异无显著性意义(P>0.05)。两组细胞周期大致相同,未见异倍体细胞。结论:异种脱蛋白松质骨与骨髓间充质干细胞有良好的细胞相容性并促进细胞生长分化。
- 李罡高春阳金莲锦
- 关键词：异种脱蛋白松质骨细胞相容性
- 异种脱蛋白松质骨支架构建组织工程骨用于脊柱横突间融合(英文)被引量：2
- 2009年
- 背景:异种脱蛋白松质骨来源广泛且具有独特的生物学特性,若能解决其免疫原问题,将有望利用异种脱蛋白松质骨开发出一种新型植骨材料。目的:探讨异种脱蛋白松质骨作为骨组织工程支架的性能,及其在山羊脊柱横突间融合中的作用。设计、时间及地点:细胞-支架学体内实验,于2008-02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。材料:6～8月龄健康雄性山羊12只,由牡丹江医学院动物中心提供。方法:取成年猪股骨远端松质部分,通过理化方法制成脱蛋白松质骨支架,对其形态结构、组成成分、生物力学特性以及材料对种子细胞生物学行为的影响进行检测分析。羊髂骨穿刺取骨髓,梯度密度离心法分离获得第3代骨髓间充质干细胞。将支架材料复合一定量的自体骨髓间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2构建组织工程骨。12只羊建立L3、4双侧横突间植骨模型,修复组于左侧植入组织工程骨,对照组于右侧植入相同体积的自体髂骨。主要观察指标:分别于植入后4,8,12周行X射线片和组织学观察对比分析。结果:采用脱蛋白处理后的松质骨可见大小不等、相互交通、开放孔隙的网架结构,孔径200～500μm,孔隙率60%左右,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为胶原,力学性能保存良好,细胞相容性良好。X射线片结果显示:植入第4周,横突桥接处部分区域模糊,以内侧明显,此时修复组材料密度略低于对照组;第8周上下桥接部间隙变小,大量连续骨痂生成;12周后完全融合,两组材料密度接近。移植区组织学观察结果显示:修复组植入后第4周以多点方式形成新骨,第8周岛状生成的骨组织贯穿整个移植材料,12周编织骨交错排列,髓腔形成,成骨活性接近自体髂骨移植;对照组植入后4周有较多新骨形成,8周时出现大量胶原纤维,周边成骨明显,至12周纤维组织减少,成骨活跃。结论:以异种�
- 李罡高春阳金莲锦
- 关键词：组织工程骨异种脱蛋白松质骨
- 异种骨支架材料的研制及相关表征被引量：4
- 2009年
- 背景:异种脱蛋白松质骨因其来源广泛和独特的生物学特性使其有望成为较好的骨组织工程支架,不同处理方法可使其免疫原性和力学性能产生差异。目的:对异种脱蛋白松质骨的制备工艺及免疫学和力学性能进行论证。设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。材料:取成年猪新鲜股骨远端松质部分,所截取骨块内不含软骨及皮质骨成分,初制为3cm×0.5cm×0.5cm大小,其长轴与所取松质骨骨小梁排列方向一致,取材各骨块的表观孔隙密度基本相同。方法:骨块于1∶1氯仿甲醇液脱脂24h,50℃蒸馏水震荡冲洗,体积分数为0.2的H2O2浸渍24h。反复3次。将处理后的骨块蒸馏水于室温下浸泡透析24h,烘干。主要观察指标:大体形态结构和组织学特点,氨基酸含量,生物力学性能。结果:经脱蛋白处理的松质骨立体空间结构并无大的破坏,由羟基磷灰石和胶原网架构成大小不等、相互交通、开放的孔隙和高度的孔隙间连接。材料中胶原类氨基酸与新鲜松质骨无明显差异,而芳香族氨基酸如酪氨酸、蛋氨酸波峰消失。脱蛋白松质骨弹性模量高于新鲜松质骨(P<0.05)。结论:异种脱蛋白松质骨具有良好的孔隙与孔隙率,低免疫原情况下可以保持良好的力学性能。
- 髙春阳孙革韩冬梅
- 关键词：异种脱蛋白松质骨组织工程骨
- 异种脱蛋白松质骨复合自体MSCs横突间成骨融合的作用被引量：5
- 2009年
- [目的]探讨异种脱蛋白松质骨(deproteinization bone,DPB)作为骨组织工程支架性能及其成骨作用。[方法]采用脱蛋白法制备异种松质骨支架,复合一定数量的自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)构建个体化组织工程骨。24只6～8个月龄雄性青山羊为受体制作脊柱L3、4横突间植骨模型。实验根据不同植入物分为3组:异种DPB复合一定数量的自体MSCs构建组织工程骨;单纯DPB;自体髂骨。各时间段通过手检、影像学、组织学以及机械性能测试并对比分析来评价其成骨性能。[结果]异种DPB保持了天然网架结构,与山羊MSCs具有良好的生物相容性。各组材料脊柱横突间融合情况:组织工程骨植入横突间组织学表现为多点成骨,融合效果良好,不同时间段影像学与自体髂骨组基本一致。单纯DPB植入组随时间推移大部材料吸收,仅桥接骨床部有少量骨痂生成。12周后各组融合强度组织工程骨组优于单纯DPB组而接近自体髂骨组。[结论]以异种DPB为支架复合一定数量自体MSCs构建组织工程骨,其成骨能力接近于自体骨。单纯DPB成骨能力差,不能作为骨移植材料。
- 高春阳孙革韩冬梅李罡周斌
- 关键词：组织工程骨异种脱蛋白松质骨横突间融合
