国家自然科学基金(81374021)
- 作品数：6 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：齐齐哈尔医学院黑龙江中医药大学更多>>
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- 稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立被引量：3
- 2014年
- 目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。
- 韩翠翠岳丽玲杨莹简白羽马立威刘吉成
- 关键词：慢病毒表达载体MDA-MB-231细胞
- 没食子酸乙酯通过线粒体通路诱导人结肠癌Lovo细胞凋亡的机制研究被引量：9
- 2016年
- 目的研究没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人结肠癌细胞Lovo凋亡的影响并探讨相关机制。方法以体外培养的Lovo细胞作为研究对象,采用倒置显微镜观察细胞生长的变化、Annexin V-FITC/PI双染法和DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳法检测没食子酸乙酯的凋亡诱导作用;采用免疫细胞化学法检测cleaved caspase-3,cleaved caspase-9蛋白的表达。结果没食子酸乙酯可明显抑制Lovo细胞生长,倒置显微镜下观察到细胞密度明显降低:各用药组的细胞凋亡率随着药物浓度升高而升高:DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显DNA梯状条带:各用药组细胞cleaved caspase-3,cleaved caspase-9基因蛋白阳性表达率明显升高。结论没食子酸乙酯可通过上调cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白的表达,激活线粒体通路从而促进Lovo细胞凋亡,这是没食子酸乙酯发挥其抗癌作用的重要机制之一。
- 简白羽岳丽玲韩翠艳韩翠翠张昊刘吉成
- 关键词：人结肠癌细胞LOVO
- 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF表达的影响及其相关机制被引量：6
- 2015年
- 目的：观察狼毒大戟根部提取物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12-deoxyphorbol 13-palmitate,DP）对MCF-7细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,及其是否通过Von Hippel-Lindau蛋白（VHL）/低氧诱导因子（HIr-1α）信号通路进行调节.方法：实验分为常氧空白组、常氧实验组（10,20,40 μmol·L^-1DP）、乏氧空白组和乏氧实验组（10,20,40 μmol·L^-1DP）,其中乏氧空白组和乏氧实验组用150 μmol·L^-1CoCl2预处理细胞.当细胞密度达70％ ～80％时进行药物处理;MTT法检测DP对MCF-7细胞在6,12,24 h细胞存活率的影响;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测DP对MCF-7细胞分泌VEGF的影响;实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测DP对VEGF mRNA表达的影响;Western blot检测DP对MCF-7细胞中VEGF,HIF-1α和VHL蛋白表达;细胞免疫荧光法（IF）检测DP对HIF-1α表达及其在细胞中分布的影响.结果：MTT法结果显示,乏氧状态下细胞存活率在12,24 h且DP浓度为20,40 μmol·L^-1时与对照组相比有显著性差异（P＜0.05）;乏氧条件下,VEGF和HIF-1α的表达较常氧条件下升高,与乏氧组相比,DP能降低VEGF（P ＜0.05）和HIF-1α（P＜0.05）的表达;乏氧条件下VHL表达较常氧条件下降低,当药物处理后,相较于乏氧组,VHL浓度明显上升（P＜0.05）.结论：DP可能通过调节VHL/HIF-1α信号通路从而下调MCF-7细胞VEGF表达.
- 杨莹刘吉成丛欢韩翠翠马立威简白羽
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞
- 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯诱导K562细胞凋亡的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562细胞凋亡的影响。方法将不同浓度的12D-13P作用于K562细胞,继续培养12 h;采用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡情况;采用磷脂结合蛋白V(Annexin V)+碘化丙啶(PI)双染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学变化。结果各浓度组的12D-13P对K562细胞凋亡率与对照组比差异有统计学意义(P<0.05),且随12D-13P浓度的增加坏死细胞逐渐增多。结论 12D-13P能诱导K562细胞凋亡。
- 马立威简白羽许惠玉韩翠翠宋阳刘吉成
- 关键词：细胞凋亡
- 肿瘤血管生成的分子机制及治疗策略被引量：9
- 2015年
- 血管生成在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中起重要作用,以肿瘤血管生成为治疗靶点已经成为肿瘤治疗的重要策略。肿瘤血管生成的分子机制十分复杂,很多生长因子及其信号通路在肿瘤血管生成中起重要作用。
- 韩翠翠杨莹马立威简白羽岳丽玲刘吉成
- 关键词：肿瘤血管生成抗血管生成
- 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对K562细胞增殖的抑制作用被引量：2
- 2014年
- 目的:观察12-去氧佛波醇13-棕榈酸酯(12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度的12D-13P处理的K562细胞,光镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用,甲基纤维素克隆形成实验分析细胞克隆能力。结果:MTT法和甲基纤维素克隆形成实验均显示12D-13P对K562细胞增殖具有较明显的抑制作用。结论:12D-13P能抑制体外培养的K562细胞的增殖,且呈一定的量效和时效关系。
- 马立威宋阳简白羽韩翠翠杨莹王明许惠玉刘吉成
- 关键词：K562细胞细胞增殖
