国家自然科学基金(30870874)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：马国诏付庆喜高建新张镛任晓燕更多>>
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- Aβ1-42对胆碱能神经元KATP通道离子流影响的研究
- 目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)对胆碱能神经元ATP敏感钾离子通道(KATP)通道离子流的影响。方法原代培养出生24h内的乳鼠皮层和海马胆碱能神经元,应用膜片钳全细胞记录技术记录Aβ1-42对单个胆碱能神经元KAT...
- 谭淑慧任晓燕马国诏
- 关键词：AΒ1-42KATP通道全细胞膜片钳技术
- 文献传递
- 阿尔茨海默病免疫机制及免疫治疗研究进展被引量：2
- 2010年
- 阿尔茨海默病（AD）是老年人大脑皮质和海马区神经变性疾病，严重影响老年人的生活质量，给社会和家庭带来极大负担。随着我国社会人口的老龄化，阿尔茨海默病发病率明显升高，而临床上尚缺乏有效的防治药物及措施。
- 马国诏
- 关键词：阿尔茨海默病免疫疗法
- 鼠Kir6.2基因真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中表达的研究
- 目的克隆ATP敏感性钾离子通道亚基Kir6.2基因(ATP-sensitive K+channel subunit Kir6.2),并构建真核表达载体pcDNA3.0/Kir6.2,将重组质粒转染HEK293细胞获得高表...
- 任晓燕谭淑慧马国诏杜怡峰
- 关键词：KIR6.2基因质粒HEK293细胞阿尔茨海默病
- 文献传递
- Aβ_(1~42)诱导K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达的信号转导通路研究
- 2021年
- 目的分析探讨β-淀粉样蛋白_(1~42)(Aβ_(1~42))诱导ATP敏感性钾离子通道(K_(ATP))亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达上调的潜在信号转导机制。方法采用免疫细胞化学法鉴定原代培养的大鼠皮质和海马神经元,实验组分别加入0.50μmol/L核因子-κB(NF-κB)抑制剂SN50、2μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580或者2μmol/L蛋白激酶C(PKC)抑制剂CTC,于30 min后分别加入2μmol/L Aβ_(1~42),培养72 h后采用Western blotting法检测K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的相对表达量。结果(1)NF-κB抑制剂SN50:SN50+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白表达量低于对照组(t=6.237,P=0.010;t=7.136,P=0.004)和Aβ_(1~42)组(t=12.620,P=0.000;t=18.580,P=0.000),SN50组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=12.240,P=0.000;t=4.906,P=0.034)、Aβ_(1~42)组(t=18.620,P=0.000;t=16.350,P=0.000)和SN50+Aβ_(1~42)组(t=6.002,P=0.012)。(2)p38 MAPK抑制剂SB203580:SB203580+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于Aβ_(1~42)组(t=13.010,P=0.000;t=8.506,P=0.001),仅Kir6.2蛋白相对表达量高于对照组(t=7.537,P=0.003);SB203580组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=8.089,P=0.002;t=19.380,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=18.870,P=0.000;t=35.430,P=0.000)和SB203580+Aβ_(1~42)组(t=5.869,P=0.014;t=26.920,P=0.000)。(3)PKC抑制剂CTC:CTC+Aβ_(1~42)组SUR1蛋白相对表达量高于对照组(t=4.756,P=0.040)、但低于Aβ_(1~42)组(t=15.170,P=0.000),CTC组SUR1蛋白相对表达量低于对照组(t=24.000,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=43.930,P=0.000)和CTC+Aβ_(1~42)组(t=28.760,P=0.000);CTC+Aβ_(1~42)组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=15.000,P=0.000)和Aβ_(1~42)组(t=24.140,P=0.000),CTC组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=9.429,P=0.001)和Aβ_(1~42)组(t=18.570,P=0.000)、但高于CTC+Aβ_(1~42)组(t=5.571,P=0.018)。结论NF-κB、p38 MAPK和PKC信号转导通路参与Aβ_(1~42)上调大鼠皮质和海马神经元K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的表达。
- 李艳菊张戈王晓静邢孝民马国诏
- 关键词：钾通道P38丝裂原活化蛋白激酶类印迹法
- 二氮嗪预处理对Aβ_(1-42)作用神经元K_(ATP)各亚基表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨ATP敏感的钾离子(KATP)通道开放药物二氮嗪防治A1-42细胞毒性作用的分子机制。方法采用细胞原代培养的方法,培养大鼠皮层神经元并进行鉴定。将原代培养的细胞随机分为对照组、单纯Aβ1-42干预组、二氮嗪预处理1 h后Aβ1-42干预组、单纯二氮嗪预处理组和单纯Aβ42-1干预组(Aβ1-42反序列对照),各组又分为24、72 h两个亚组。采用免疫荧光双染及免疫印迹法,观察干预后不同培养时间(24、72 h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,单纯A1-42处理24 h组Kir6.1、SUR2显著升高(P<0.05),二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞24 h组各亚基表达均无明显变化;二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞72 h组与单纯A1-42处理72 h组KATP通道各亚基表达均明显升高(P<0.05),而二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞72 h组与单纯A1-42处理72 h组相比Kir6.1、Kir6.2、SUR2表达显著下调(P<0.05)。结论二氮嗪预处理可完全逆转A1-42作用神经元24 h所引起的Kir6.2及SUR1的表达上调,只能部分逆转A1-42作用神经元72 h所引起的Kir6.1、Kir6.2、SUR2的表达增加,可能会维持神经细胞正常生理功能,起到防治A1-42细胞毒性作用。
- 付庆喜马国诏车峰远高乃永高建新张镛
- 关键词：淀粉样Β蛋白细胞毒素类二氮嗪
- 大鼠Kir6.2基因真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2011年
- 目的克隆Kir6.2基因,构建真核表达载体pcDNA3.0/Kir6.2,将重组质粒转染HEK293细胞获得高表达Kir6.2基因的细胞克隆。方法从SD大鼠脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得Kir6.2基因的全长cDNA,插入T1-simple克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pcDNA3.0,利用脂质体将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,采用RT-PCR和Western blot方法,鉴定Kir6.2基因在HEK293细胞中的过表达。结果经PCR和DNA序列测定证实,目的基因已插入重组质粒,RT-PCR和West-ern blot证明,经G418筛选得到的转基因HEK293细胞克隆中存在Kir6.2基因的表达。结论成功构建Kir6.2基因的真核表达载体,获得稳定表达Kir6.2基因的HEK293细胞克隆。
- 任晓燕谭淑慧马国诏杜怡峰
- 关键词：阿尔茨海默病质粒HEK293细胞
- 二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1-42致胆碱能神经元凋亡的研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2μmol/L的Aβ1-42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病(AD)细胞凋亡模型;采用500μmol/L二氮嗪(预处理1 h)、20μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间(24、72 h)后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,Wes-tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果①Aβ1-42作用胆碱能神经元72 h后,Bcl-2表达量降低(P<0.01),细胞色素C、Caspase-3、Cleaved caspase-3的表达量增加(P<0.01,P<0.001,P<0.01),Bax未见明显变化,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01),细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低(P<0.001);②二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24 h后Bcl-2的表达增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01),作用72h能明显增加Bcl-2的表达(P<0.05,P<0.01,P<0.01),并提升Bc-2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase-3、Cleaved caspase-3表达量(P<0.05,P<0.01,P<0.001),细胞存活率均增高(P<0.01,P<0.001)。结论Aβ1-42作用胆碱能神经元72 h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1-42致细胞凋亡作用。
- 蒋亮亮付庆喜王瑞霞马国诏高建新刘克敬张镛
- 关键词：淀粉样Β蛋白二氮嗪环孢菌素胆碱能神经元ATP敏感性钾离子通道
- Aβ_(1-42)对胆碱能神经元K_(ATP)通道离子流影响的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究β淀粉样蛋白(Aβ1-42)对胆碱能神经元ATP敏感钾离子(KATP)通道离子流的影响。方法原代培养出生24 h内的乳鼠皮层和海马胆碱能神经元,采用膜片钳全细胞记录技术记录Aβ1-42对单个胆碱能神经元KATP通道离子流的影响。结果与对照组比较,给予Aβ1-42后胆碱能神经元外向电流显著减少(P<0.05),再给予ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪后此减小的外向电流无显著变化(P>0.05)。结论 Aβ1-42对神经元KATP通道具有抑制作用。
- 谭淑慧任晓燕李景新姚伟马国诏
- 关键词：淀粉样Β蛋白钾通道膜片钳术
