国家高技术研究发展计划(2008AA02Z436)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 相关作者：王进秦正红李凯肖莉何晓辉更多>>
- 相关机构：苏州大学苏州大学附属第二医院南华大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金苏州市社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 全血AS-PCR方法检测Wilson病ATP7B基因四个突变被引量：1
- 2014年
- 目的研究肝豆状核变性ATP7B基因高频突变位点，探索全血等位基因特异性-PCR（allelespecificPCR，AS-PCR）技术在该基因4个常见突变检测中的应用。方法针对ATP7B基因4个突变位点（G2333T、C2850T、G2855A、G2975T）设计等位基因特异性弓I物，应用高保真酶对人抗凝全血样本进行聚合酶链反应，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳以判断待检样本有无基因突变及其等位基因型。PCR扩增人基因组ATP7B基因第8、12、13外显子，扩增产物直接进行基因序列测定。结果全血AS-PCR法检测ATP7B基因4个基因突变，各位点检测结果与基因序列测定完全相符。27份健康对照血样分型结果G2333T、C2850T和G2975T等3个位点没有出现突变，而G2855A位点突变率则达到了51．8％。22份患者血液样本分型结果显示除G2855A位点外，其余3个位点共检出11例含有突变，阳性率达到50％。结论建立了全血AS-PCR检测肝豆状核变性ATP7B基因4个基因突变的方法，为该病的早期诊断和及早治疗提供了有效的手段。
- 孙玮管俊杰王进秦正红
- 关键词：WILSON病ATP7B基因
- 乳腺癌PIK3CA基因热点突变的研究被引量：3
- 2013年
- 目的:采用突变敏感性分子开关技术,检测乳腺癌组织中PIK3CA基因热点突变的突变频率,并分析乳腺癌PIK3CA基因热点突变与乳腺癌临床病理特征之间的关系。方法:用突变敏感性分子开关技术对90例乳腺癌组织和10例乳腺纤维腺瘤组织DNA进行检测,并利用基因测序进一步验证。结果:在90例乳腺癌患者中检测出18例PIK3CA基因热点突变(突变率20%,18/90),包含A3140G突变14例(突变率15.6%,14/90)、G1633A突变3例(突变率3.3%,3/90)、G1624A突变2例(突变率2.2%,2/90),其中1例患者同时发生A3140G和G1624A突变。10例乳腺纤维腺瘤中未发现以上热点突变。PIK3CA基因突变与HER-2表达有关(χ2=4.119,P=0.048),过表达者中PIK3CA基因突变率低,而与年龄分布(χ2=0.238,P=0.602)、肿瘤大小(P=1.000)、淋巴结状态(χ2=3.689,P=0.056)及ER(χ2=0.957,P=0.328)、PR(χ2=0.012,P=0.914)和EGFR(χ2=0.011,P=0.916)是否表达无相关性。结论:PIK3CA基因热点突变与患者的HER-2过表达呈负相关。
- 陈营朱旬肖莉李凯邢春根邹汉青
- 关键词：乳腺肿瘤PIK3CA基因突变分子开关
- 持续静水压对细胞增殖的影响
- 2011年
- 背景:血管平滑肌细胞在静水压替代血清培养的条件下能良好生长。目的:探讨无血清水平状态下,持续性静水压对细胞增殖的影响。方法:采用自行研制的压力可调细胞培养箱在0,12,16,20,24和28kPa条件下培养血管平滑肌细胞A10与血管内皮细胞HUVEC-12。结果与结论:A10细胞在16kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强;HUVEC-12细胞在20kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强。说明一定范围内的静水压可促进体外培养的A10与HUVEC-12细胞增殖、使其活性增加。
- 郭紫芬冯勇李凯廖端芳
- 关键词：增殖
- Taq RecA蛋白的克隆表达及其在SNP基因分型中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的研究克隆表达的Taq RecA蛋白作为一种添加剂在单核苷酸多态性(SNP)基因型分析中的作用。方法构建pET-28a-Taq RecA表达质粒,在BL21(DE3)菌株中诱导表达,用热变性和饱和硫酸铵沉淀法去除部分杂蛋白,再经Ni-NTA亲和层析柱纯化分离Taq RecA蛋白;用PCR和等位基因特异性PCR(AS-PCR)方法研究其增强特异性和在SNP基因分型中提高分型准确性的作用。结果成功构建了表达质粒,表达纯化得到较高纯度蛋白,用于SNP基因分型中减少了非特异性产物,提高了分型准确性。结论 Taq RecA蛋白作为一种PCR中的添加剂,在ATP辅助作用下,适量添加能提高AS-PCR介导的SNP基因分型的准确度。
- 陈曹鑫何晓辉秦正红王进
- 关键词：单核苷酸多态性
- 慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合类型的研究及其临床意义被引量：5
- 2012年
- 目的研究不同类型的BCR-ABL融合基因在慢性粒细胞白血病(CML)患者中所占比例及其与治疗效果和预后的关系。方法采用RT-PCR方法检测46例CML患者BCR-ABL融合基因的类型,并用巢式PCR方法扩增伊马替尼耐药患者的Abl激酶区约864bp碱基片段,对扩增产物进行纯化、双向测序并分析。结果 46例CML患者中,M-BCR占33例,其中b3a2型19例,b2a2型6例,而b3a2/b2a2共表达者8例。一些少见类型如e20a2、b2a2/e20a2及b3a2/e20a2占的比例较低。随访6例伴Abl激酶区突变的伊马替尼耐药CML患者中,b3a2/b2a2型4例。结论典型CML患者的BCR/ABL融合基因类型以M-BCR占绝大多数,另外也可见一些其他类型;而伊马替尼耐药并检测出Abl激酶区点突变的患者中BCR/ABL融合基因类型以b3a2/b2a2居多。
- 谷红丽王进秦正红张日
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因伊马替尼耐药点突变
- 苏南地区脊髓小脑共济失调临床和基因诊断及CAG突变分析被引量：3
- 2010年
- 目的研究苏南地区脊髓小脑共济失调(SCA)的临床表现、影像学及基因诊断,并探讨SCA3的ATXN3基因中CAG重复突变的特征。方法对9个脊髓小脑共济失调家系及1个散发病例进行临床、影像及基因突变总结分析。结果 9个家系共41例作过SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA17及齿状核红核苍白球路易体萎缩(DRPLA)各亚型(CAG)n三核苷酸重复扩增检测的患者及家系成员中,SCA3有6个家系,患者24例,症状前患者4例;余下的3个家系和1个散发病例,共9例受检者(7例发病)上述SCA 7个亚型基因检测未见异常。结论 SCA3是苏南地区最多见的SCA亚型,其确诊有赖于基因检测;但在此地区也存在其他未知亚型,有待进一步确诊。
- 俞立强方琪何晓辉王进秦正红王达鹏董万利
- 关键词：脊髓小脑性共济失调
- 血中游离DNA与肿瘤被引量：5
- 2013年
- 血中游离DNA指血中游离于细胞之外的一类DNA,简称循环核酸,于1947年由Mandel和Metais发现。肿瘤患者外周血DNA水平高于正常人且血中游离DNA具有肿瘤细胞DNA的特征,如肿瘤相关基因的突变、微卫星改变、甲基化异常和线粒体DNA突变等。随着肿瘤分子生物学的深入研究,血中游离DNA定性定量分析已开始应用于肿瘤的早期诊断、个体化治疗和预后判断等。血中游离DNA结合各类分子生物学检测技术,有望成为具有一定敏感性及高特异性的临床诊断方法。此外,血中游离DNA还有可能成为非细胞形式的肿瘤转移的新途径。
- 王庆琳张荣肖莉王伟大孙爱娟李凯顾振纶
- 关键词：游离DNA肿瘤基因突变肿瘤转移肿瘤检测线粒体DNA
- 突变敏感性分子开关快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变被引量：3
- 2011年
- 目的利用高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关联合琼脂糖凝胶电泳,建立对肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变进行快速筛查的技术平台。方法应用PCR反应扩增包含MYH7基因Ala26Val突变区域的基因序列,通过基因克隆技术与反向PCR体外定点突变技术,分别得到MYH7基因Ala26Val突变的野生模板与突变模板,并通过基因测序分析进行确证。设计与Ala26Val突变位点配对及三末端不配对的3′硫化修饰正向引物,在其下游设计一条反向引物,分别构成野生引物对与突变引物对,进行高保真DNA聚合酶介导的双向引物延伸反应,利用凝胶成像系统对其PCR结果进行分析。结果当突变引物对与突变模板配对时,引物被延伸,有PCR产物;与野生模板不配对时,引物却不能被延伸,无PCR产物。同样,野生引物对只有与野生模板匹配时得以延伸,而与突变模板不匹配时则不能延伸。结论高保真DNA聚合酶偶联硫化修饰引物构成的突变敏感性分子开关能够快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变,达到非此即彼的二元化效果,该分子开关在肥厚性心肌病基因筛查中具有巨大的潜在应用价值。
- 郭紫芬兰芬周翠兰李凯廖端芳
- 鲑鱼精DNA提高人工突变质粒模板中单核苷酸多态性位点识别的特异性及其应用
- 2011年
- 目的探讨等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测单核苷酸多态性(SNP)的方法,研究鲑鱼精DNA对优化等位基因特异性引物的作用。方法对鲑鱼精DNA设一系列浓度梯度,分别进行AS-PCR后观察电泳结果。结果鲑鱼精DNA能显著提高识别基因SNP位点的特异性,在25μl的质粒检测系统中加入50 ng的鲑鱼精DNA结果最佳。结论鲑鱼精DNA加入到质粒检测系统中可有效测试所设计的检测引物的特异性,达到模拟基因组DNA的目的 。
- 刘二平韩立影方琪秦正红王进
- 关键词：单核苷酸多态性等位基因特异性聚合酶链反应
