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脂质体介导外源基因体外转染牦牛乳腺上皮细胞条件的优化(英文): 2010年; [目的]优化脂质体介导外源基因体外转染牦牛乳腺上皮细胞的条件。[方法]通过胶原酶消化法和组织块贴壁法,体外分离培养得到牦牛乳腺上皮细胞。采用免疫细胞化学技术检测细胞角蛋白在细胞内的表达。以绿色荧光蛋白为报告基因,通过脂质体介导外源基因转染牦牛乳腺上皮细胞,统计在不同细胞融合度、脂质体浓度、脂质体与质粒的比例、转染时间下的转染效率,寻求最佳转染条件。[结果]采用胶原酶消化法,24h内细胞团块贴壁生长,纤维样细胞沿着细胞团块生长,后上皮样细胞爬出。上皮细胞与纤维细胞界限明显,细胞呈椭圆形,排列紧密,岛屿状生长。纯化至5代左右可得到较纯的上皮样细胞。采用组织块贴壁法,6d左右组织块周围出现细胞晕,有少量纤维样细胞生长;8d左右,上皮样细胞长出,并往外不断铺展。在荧光显微镜下观察,试验组细胞角蛋白检测呈阳性,细胞质呈绿色,细胞核复染呈红色。牦牛乳腺上皮细胞在细胞融合度为81%～90%,脂质体的量为1.8μl,脂质体与质粒比例为2∶1,转染时间为4h时,转染效率最高。[结论]该研究可为乳腺生物反应器构建提供试验依据。; 田甜李键王中乾; 关键词：免疫细胞化学转染

小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展被引量：5: 2010年; 综述了有关于小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法的研究进展,阐述了乳腺细胞培养的意义,介绍了乳腺组织原代培养的过程,并分析了所取得的研究成果。; 毕琳李键王中乾; 关键词：小鼠乳腺上皮细胞原代培养细胞工程

牦牛乳腺上皮细胞-小鼠骨髓瘤细胞化学融合方法的研究: 2011年; 采用化学诱导的方法,选择不同分子量的PEG作为诱导剂,成功实现了牦牛乳腺上皮细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的融合,确定了PEG分子量为6000,浓度为50%,作用时间为90s的最佳融合条件.; 李键田甜; 关键词：乳腺上皮细胞小鼠骨髓瘤细胞细胞融合牦牛

种养结合模式下基于R平台的土壤养分SOM神经网络分析被引量：2: 2011年; 试验在双流县实施种养结合循环利用模式3年以上的吞拿养猪场进行,试验区土壤为油菜—水稻土,面积610000 m2,分为处理区(T区,405000 m2),和对照区(C区,205000 m2).T区连续灌溉沼液3年以上,不施用化肥;C区以施用化肥为主兼施少量农家肥.T区和C区均不施用化学农药.网格法取0-20 cm表层土样,采用电位法测定土壤pH,碱解扩散法测定土壤碱解氮(SAN),分别按国家相关标准测定土壤有机质(SOM),全氮(STN)有效磷(SAP),有效钾(SAK),并进行全磷(STP),全钾(STK)测定的样品前处理.再采用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-OES)测定STP、STK;应用自组织映射(SOM)神经网络法基于R平台进行数据的神经网络聚类.结果表明:当输出神经元取4时结果较佳,此时全部数据被明显的聚为两类,聚类结果与试验分组数据吻合,准确度达到了87.09%与87.23%,表明,实施种养结合模式,使土壤养分构成产生了显著变化.还表明,在R平台上进行SOM神经网络分析具有易实现、易识别、可靠性强等优点.; 文勇立李学东王永马力章杰陈世忠杨克美; 关键词：种养结合 SOM神经网络聚类分析

激素和生长因子对牦牛乳腺上皮细胞生长的影响: 实验通过胶原酶消化法,分离培养获得牦牛乳腺上皮。为观察激素和生长因子对牦牛乳腺上皮细胞生长影响,添加一定浓度的胎牛血清、胰岛素、胰岛样生长因子-1、氢化可低松,转铁蛋白-硒钠。倒置显微镜观察细胞形态,通过细胞计数绘制牦牛...; 田甜李键毕琳梁天宇王中乾; 关键词：激素; 文献传递

绿色荧光蛋白基因在牦牛乳腺上皮细胞中表达的研究被引量：2: 2009年; 从牦牛乳腺采集组织,并通过胶原酶消化法和胰蛋白酶消化法相结合在体外成功分离、纯化到了牦牛乳腺上皮细胞.通过观察,具有明显的上皮细胞特征,而且符合一般细胞的生长规律.通过脂质体介导法将携带有绿色荧光蛋白的外源基因转染进乳腺上皮细胞中,在荧光显微镜下检测到了绿色荧光蛋白基因的表达.; 杨栎李键吴媛媛田甜毕琳梁天宇; 关键词：乳腺上皮细胞牦牛转染绿色荧光蛋白

脂质体介导外源基因体外转染牦牛乳腺上皮细胞条件的优化被引量：3: 2010年; [目的]优化脂质体介导外源基因体外转染牦牛乳腺上皮细胞的条件。[方法]通过胶原酶消化法和组织块贴壁法,体外分离培养得到牦牛乳腺上皮细胞。采用免疫细胞化学技术检测细胞角蛋白在细胞内的表达。以绿色荧光蛋白为报告基因,通过脂质体介导外源基因转染牦牛乳腺上皮细胞,统计在不同细胞融合度、脂质体浓度、脂质体与质粒的比例、转染时间下的转染效率,寻求最佳转染条件。[结果]牦牛乳腺上皮细胞在细胞融合度为81%～90%,脂质体的量为1.8μl,脂质体与质粒比例为2∶1,转染时间为4h时,转染效率最高。[结论]该研究可为乳腺生物反应器构建提供试验依据。; 田甜李键王中乾; 关键词：免疫细胞化学转染

牦牛乳腺上皮细胞的体外培养的研究被引量：1: 2009年; 采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牦牛乳腺上皮细胞.形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征.染色体数目分析表明,细胞核型稳定,在离体培养条件下不发生转化.牦牛乳腺上皮细胞染色体数目为60,染色体组型为2n=60.; 吴媛媛李键杨栎毕琳田甜; 关键词：细胞培养乳腺上皮细胞牦牛

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国家自然科学基金(30771550)