国家自然科学基金(30771549)
- 作品数：6 被引量：29H指数：4
- 相关作者：杨利国薛立群王水莲韩丽梁爱心更多>>
- 相关机构：华中农业大学湖南农业大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
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- 新型生长抑素原核表达质粒的构建及表达鉴定被引量：5
- 2008年
- 将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS-PAGE和Western blotting技术分离并检测融合蛋白在宿主菌中的表达活性。结果表明,本试验构建的非抗性筛选生长抑素原核表达质粒可以在宿主菌C500中稳定、正确表达。此研究为开发新型、高效、安全的促生长疫苗提供了可靠的研究材料。
- 梁爱心冯细钢韩丽滑国华桑雷刘兴斌刘耘杨利国
- 关键词：生长抑素原核表达
- 抑制素pCIS基因免疫对黄牛卵泡发育和生殖激素的影响被引量：7
- 2009年
- 分别用0(C)、0.75(T1)、1.50(T2)、2.25(T3)和3.0(T4)mg.头-1的抑制素pCIS基因疫苗免疫58头黄牛,以探讨抑制素pCIS基因免疫对卵泡发育和生殖激素的影响。结果表明,抑制素pCIS基因免疫组的大卵泡(d≥10 mm)数显著高于对照组(P<0.01),中卵泡(7 mm≤d<10 mm)数和小卵泡(4 mm≤d<7 mm)数与对照组均没有显著差异(P>0.05)。T1组左右两侧成熟卵泡大小与对照组差异不显著(P>0.05),其它3组两侧成熟卵泡均显著大于对照组(P<0.05)。抑制素pCIS基因免疫黄牛的促卵泡素(FSH)平均含量高于对照组,且在加强免疫阶段差异显著(P<0.05);加强免疫后雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均显著增加,且均与对照组差异显著(P<0.05)。这些结果表明,抑制素pCIS基因免疫可促进FSH分泌,进而影响黄牛卵泡发育和成熟。
- 王水莲薛立群陈小军杨利国
- 关键词：抑制素基因免疫卵泡发育生殖激素黄牛
- 含抑制素重组质粒的减毒猪霍乱沙门氏菌C500遗传稳定性研究被引量：4
- 2009年
- 为了分析研究含抑制素重组质粒pVAX-IS-asd(以下简写为pXAIS)的crp(cAMP受体蛋白)和asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因双缺失猪霍乱沙门氏菌C500菌株的遗传稳定性。方法:将现有的无抗性抑制素重组表达质粒pXAIS转化入crp和asd基因双缺失猪霍乱沙门氏菌C500菌株(简称"空质粒株")中,得"含质粒株"。将"含质粒株"细菌在无选择压力条件下传代培养50代,利用酶切鉴定方法,分析"含质粒株"细菌中抑制素pXAIS质粒的稳定性;利用PCR方法扩增菌株("含质粒株"和"空质粒株")保守序列中invA基因,分析各代细菌的invA基因稳定性;通过比较传代培养后各代细菌的生长图型,分析"含质粒株"细菌传代后的生长规律。结果表明,"含质粒株"细菌连续传代50次后,仍能检出pXAIS质粒和invA基因,而且生长规律与"空质粒株"没有明显差异。说明含pXAIS质粒的猪霍乱沙门氏菌crp和asd基因双缺失株具有良好的遗传稳定性。
- 甄艳红韩丽梁爱心王庆玲杨利国
- 关键词：减毒沙门氏菌基因重组基因免疫
- 双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响被引量：10
- 2010年
- 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组,每组肉牛分别注射0.75(T1)、1.5(T2)、2.25(T3)、3.0mg/头(T4)pcISI质粒、3.0mg/头pcMV-S空质粒(C1)和3mL/头生理盐水(C2),初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著(P<0.05);T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05);T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著(P<0.05);T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著(P<0.05)。加强免疫后10d(BM10)抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著(r=0.629,P<0.05),与黄体大小相关极显著(r=0.651,P<0.01)。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。
- 王水莲薛立群邓立新崔先利杨利国
- 关键词：抑制素基因免疫卵泡肉牛
- 影响生长抑素重组质粒pEGS／2SS转染HeLa细胞效果的因素研究被引量：4
- 2010年
- 旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)转染效果的影响因素,探讨最佳转染条件,为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞,探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数:质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法,在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计算转染率。结果:在六孔细胞培养板上,当DNA/脂质体剂量为1μg/6μg时,转染效率最高,在转染后72 h达到34.02%;当用Plasmid Maxi Kit试剂盒提取质粒,转染时间为48 h,转染效率最高,达到17.88%。重组质粒pEGS/2SS转染He-La细胞条件是:采用试剂盒(Plasmid Maxi Kit)提取的质粒,DNA和脂质体的剂量分别为1μg与6μg,转染时间48 h,此时的转染效率最高,达17.88%。
- 何晓红曹少先茆达干杨利国
- 关键词：脂质体HELA细胞
