湖南省卫生厅资助项目(C2006-033)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 相关作者：谢荣华张琼舒衡平蒋立平谭逵更多>>
- 相关机构：湖南环境生物职业技术学院中南大学襄樊市中心医院更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅资助项目湖南省教育厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 匹多莫德增强弓形虫GRA1蛋白免疫效果的动物实验评价被引量：11
- 2011年
- 目的:探讨匹多莫德增强弓形虫GRA1蛋白刺激机体产生免疫应答和保护免疫的效果。方法:匹多莫德和毕赤酵母菌表达的弓形虫GRA1蛋白混合皮下注射免疫小鼠,以PBS作对照,检测其细胞免疫和体液免疫,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存情况。结果:匹多莫德能辅助GRA1蛋白刺激宿主产生较高的细胞免疫和体液免疫,并能提供较好的免疫保护力。GRA1蛋白加匹多莫德组、GRA1蛋白加弗氏完全佐剂组小鼠IFNγ-、特异性IgG显著高于对照组(P<0.01)和GRA1蛋白组(P<0.01);各免疫组CD8+T细胞数量显著高于对照组(P<0.01);GRA1蛋白加匹多莫德组CD4+T细胞数量(P<0.01)、CD4+/CD8+比值显著高于其它免疫组(P<0.05)。各免疫组T细胞增殖活性与PBS对照组比较明显增强(P<0.01),GRA1蛋白加匹多莫德组T细胞增殖活性最明显。小鼠攻击试验表明,GRA1蛋白加匹多莫德组和GRA1蛋白加弗氏完全佐剂组小鼠存活时间明显长于对照组和GRA1蛋白组。结论:匹多莫德与弗氏佐剂具有相似增强免疫应答和提高GRA1蛋白抗原的免疫原性作用,可望用于弓形虫亚单位疫苗的研制。
- 谢荣华
- 关键词：弓形虫匹多莫德毕赤酵母菌免疫效果
- 弓形虫GRA1基因在毕赤酵母菌中的表达、纯化与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的研究弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)在毕赤酵母菌中的表达,获得高效表达的具有生物学活性的目的蛋白。方法将已构建重组的pPIC9K-GRA1质粒转化入酵母菌GS115,筛选His+Muts表型转化子,摇瓶培养,1%甲醇诱导表达。表达产物经高效液相色谱法纯化后,测定其生物学活性。结果诱导4d的蛋白表达量达到2.5g/L。SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量单位为24ku,Westernblot鉴定表达产物具有抗原性。表达蛋白经高效液相色谱纯化产物后纯度达到90%以上。结论弓形虫GRA1基因在毕赤酵母中成功分泌表达目的蛋白,表达产物具有抗原性。
- 谢荣华舒衡平范久波蒋立平谭逵张琼吴翔
- 关键词：弓形虫毕赤酵母基因表达
- 几种化学合成免疫调节剂免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染研究被引量：3
- 2010年
- 目的观察不同剂量的几种化学免疫调节剂免疫小鼠诱导抗弓形虫感染作用。方法不同剂量匹多莫德、沙利度胺、匹多莫德加沙利度胺分别灌胃小鼠,共免疫14次,对照组用PBS灌胃,检测其免疫效果,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存情况。结果匹多莫德、匹多莫德加沙利度胺使小鼠IFN-r、CD4+细胞数量升高(P<0.01),CD4+与CD8+比值增加,各组均未检测到IL-4;沙利度胺使小鼠CD8+细胞数量明显增加(P<0.01),CD4+与CD8+比值减少,各组T细胞增殖活性与PBS对照组比较明显增强(P<0.05),且匹多莫德20mg加沙利度胺1.0mg组T细胞增殖活性最明显。小鼠攻击试验表明,20mg匹多莫德加1.0mg沙利度胺组小鼠存活时间明显长于匹多莫德、沙利度胺以及PBS对照组。结论匹多莫德20mg加沙利度胺1.0mg可诱导更有效的抗弓形虫感染保护作用。
- 谢荣华范久波
- 关键词：弓形虫免疫效果
- 匹多莫德增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗免疫小鼠的保护研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨匹多莫德增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗刺激机体产生免疫应答和保护免疫的效果。方法将昆明小鼠分成4组，分别用pcDNA3-W2b4a质粒、pcDNA3-W2b4a＋匹多莫德、pcDNA3及生理盐水肌注3次。ELISA法检测血清IgG抗体水平，取脾细胞用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群，末次免疫后第4周，小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个，观察小鼠生存时间。结果pcDNA3-W2b4a＋匹多莫德组、pcDNA3-W2b4a组小鼠血清IgG抗体水平显著高于pcDNA3组和生理盐水对照组（P〈0．05）；各免疫组小鼠CD4＋、CD8＋T淋巴细胞数量显著高于对照组（P〈0．05）；pcDNA3．W2b4a＋匹多莫德组CD4＋T细胞数量、CD4＋／CD8＋比值高于pcDNA3-W2b4a组（P〈0．05）。小鼠攻击试验表明，pcDNA3-W2b4a＋匹多莫德组小鼠存活时间明显长于对照组和pcDNA3-W2b4a组（P〈0．05）。结论匹多莫德可增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫。
- 谢荣华范久波
- 关键词：弓形虫匹多莫德表位疫苗保护力
- 重组人IL-2对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群及垂直传播的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究重组人IL-2对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群及垂直传播的影响。方法取BALB/C孕鼠90只,随机分为空白组、感染组、IL-2组。于妊娠第8d空白对照组腹腔注射0.2ml生理盐水,其余各组腹腔注射200个弓形虫速殖子,并于妊娠第7、8、9dIL-2组每只孕鼠腹腔注射1 000UIL-2,其余两组腹腔注射0.2ml生理盐水。妊娠第10、12、14、16d取妊娠鼠脾,流式细胞仪检测CD4^+及CD8^+水平,并在妊娠第12d解剖孕鼠,观察活胎率及胎仔脑组织弓形虫感染情况。结果与空白组相比,妊娠各期感染组的脾CD4^+T细胞水平显著降低,而CD8^+T细胞水平显著升高(第10、12、1 4d),二者比值明显倒置;IL-2组的CD4^+T细胞水平在妊娠第10、12、14d高于感染组,CD8^+T细胞水平在妊娠第10、12、14d低于感染组,CD4^+/CD8^+T细胞比值在妊娠第10、12、14d高于感染组。活胎率也明显升高,宫内胚胎弓形虫感染率明显降低。结论 IL-2可以改善感染弓形虫孕鼠的细胞免疫功能,提高孕鼠免疫力,减少垂直传播概率。
- 谢荣华
- 关键词：弓形虫IL-2T细胞亚群孕鼠
- 毕赤酵母表达系统及其在寄生虫学领域的应用进展
- 2009年
- 毕赤酵母表达系统是一种高效的重组蛋白表达系统,近年来被广泛应用于重组蛋白的表达,它具有真核生物表达系统的特点,能够对目的蛋白进行类似高等真核生物的信号肽剪切、二硫键形成、糖基化等过程的翻译后蛋白加工,其宿主甲醇酵母—巴斯德毕赤酵母具有高密度生长的特性,本文从宿主菌、表达载体、表达载体的转化及整合和培养条件几个方面概述毕赤酵母表达系统的特点,以及该系统在寄生虫学领域中的应用进展。
- 谢荣华
- 关键词：毕赤酵母菌寄生虫学
- 弓形虫酵母表达质粒pPIC9K-GRA1的构建及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础。方法PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9K的EcoRⅠ/NotⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的GRA1片段,大小为573 bp,扩增产物经双酶切后成功连接到pPIC9K中,经PCR,双酶切及序列测定证明重组质粒中含有GRA1读框。结论成功构建弓形虫GRA1酵母真核表达质粒。
- 谢荣华吴翔舒衡平蒋立平范久波谭逵张琼
- 关键词：刚地弓形虫
- HIV/AIDS患者B7-H1的表达与合并机会性感染关系的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨HIV/AIDS患者外周血髓样树突细胞(mDC)上B7-H1表达水平与合并机会性感染的关系。方法:采集2009年1月至2012年5月住院的42例未经抗逆转录病毒治疗(ART)的HIV/AIDS患者及42名健康对照组抗凝全血,用流式细胞仪检测外周血mDC上B7-H1表达水平,并分析其与疾病进展的相关性。结果:HIV/AIDS患者合并机会性感染B7-H1表达水平显著高于未合并机会性感染组(P<0.05),未合并机会性感染组显著高于健康对照组(P<0.05);B7-H1表达水平>30%合并机会性感染率显著高于B7-H1表达水平<10%的HIV/AIDS患者(P<0.05);HIV/AIDS患者mDC上B7-H1表达水平与CD4+T细胞数量显著负相关(r=-0.665,P<0.05),而与病毒载量显著正相关(r=0.604,P<0.05)。结论:HIV/AIDS患者mDC上B7-H1表达水平与合并机会性感染密切相关,是疾病进展的指标。
- 谢荣华欧阳珊珊
- 关键词：HIVB7-H1MDC机会性感染
- 毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白接种小鼠免疫效果被引量：1
- 2008年
- 目的观察毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白免疫效果。方法采用皮下注射法免疫接种小鼠,末次免疫后第2周用ELISA检测其特异性抗体水平;流式检测鼠脾淋巴细胞亚群,末次免疫后第3周,用弓形虫RH株速殖子分别攻击感染疫苗免疫组和对照组,观察小鼠感染情况及存活时间。结果ELISA结果表明,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白和GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组抗体水平高于佐剂组、NS对照组及GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组(P<0.05);流式结果显示,各组CD4+淋巴细胞细胞数量变化无显著性差异(P>0.05),而CD8+淋巴细胞数量则明显增多,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白、GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组、GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组及佐剂组明显高于NS组(P<0.05);小鼠攻击实验表明,与NS及GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组相比,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白和GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组小鼠存活时间显著延长(P<0.05)。结论毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白免疫小鼠后可诱导特异性抗体产生,CD4+淋巴细胞增殖不明显,而CD8+淋巴细胞则显著增殖及对弓形虫攻击感染有一定的保护作用。
- 谢荣华吴翔范久波舒衡平蒋立平谭逵张琼
- 关键词：弓形虫毕赤酵母菌接种免疫
- 佐剂在弓形虫疫苗中的应用
- 2009年
- 弓形虫病是人兽共患寄生虫病，对人类危害极大，尤其对孕妇，可影响胎儿的发育，严重者可致畸，致死。目前弓形虫病尚无理想的防治方法，弓形虫疫苗研究经历了灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗及核酸疫苗等多种探索，但均存在不同的问题，如免疫原性弱，安全性差，因此，研制弓形虫疫苗，除需优化抗原外，非常需要用佐剂来增强疫苗免疫原性和诱导产生免疫活性分子，调节免疫应答强度和类型，产生更有效和持久的保护性免疫。本文综述福氏佐剂、霍乱毒素、脂质体、拟菌颗粒、蜂胶、细胞因子、CpGDNA等佐剂在弓形虫疫苗中的应用。
- 贺勋谢荣华
- 关键词：福氏佐剂人兽共患寄生虫病疫苗免疫原性CPGDNA弓形虫病减毒活疫苗
