吉林省科技厅科研基金(200505200)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：胡林森常明李红杰张磊侯澍更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院天津市人民医院武警吉林省总队医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制诱导的PC12细胞帕金森病模型被引量：3
- 2006年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂对PC12细胞的作用以及用该药物制作帕金森病（PD）模型的可能性。方法用不同浓度蛋白酶体抑制剂PSI作用于PC12细胞24、48、72h后，以MTT法检测细胞活性，荧光染色检测凋亡细胞百分率，HE染色观察细胞形态变化，透射电镜观察细胞超微结构变化。结果不同浓度PSI作用于PC12细胞24h时，细胞存活率无变化；作用48-72h时，1～20μmol／LPSI使细胞存活率分别降至47．03％～58．98％和19．58％～34．72％；凋亡细胞由1．15％升至5．27％。HE染色显示经PSI处理的PC12细胞胞浆内有嗜酸性包涵体出现，透射电镜下细胞呈凋亡的超微结构特点。结论PC12细胞蛋白酶体受抑模拟了PD的两大病理特点，蛋白酶体功能异常可能是PD的发病因素之一，短期抑制PC12细胞的蛋白酶体功能可作为PD的细胞模型。
- 张磊常明李红杰侯澍胡林森
- 关键词：PC12细胞帕金森病
- PSI诱导PC12细胞胞浆内胞核旁嗜酸性包涵体的形成及其演变过程
- 2007年
- 目的研究蛋白酶体抑制剂PSI诱导PC12细胞胞浆内嗜酸性包涵体的形成及演变过程。方法取进入对数生长期的PC12细胞。孵育24h后,加入PSI(终浓度10μmol/L),分别于给药后3、6、9、12、24、48、72、96、120h取出细胞并甩片固定,行HE染色及α-synuclein免疫组织化学染色,光镜下观察形态变化。结果HE染色:PSI作用6h后,PC12细胞胞浆呈现嗜伊红染色,胞体变大;至12h可见明显的嗜伊红聚集的核心;24h后,几乎所有的细胞都形成了核旁嗜伊红球状包涵体;其后,胞核及胞浆逐渐缺失,于120h仅余聚集的嗜伊红球状包涵体。免疫组化染色:PSI作用3h后,可见到散在于整个胞浆的α-synuclein免疫反应阳性颗粒;6h后,细胞明显增大,胞浆中颗粒增多;12h后,颗粒聚集更加明显,形成明显的聚集中心;24h后,几乎所有的细胞都形成了α-synuclein免疫反应阳性的球状包涵体;随时间延长,胞核及胞浆逐渐缺失,至120h仅见固缩的α-synuclein免疫反应阳性球状包涵体。结论PSI作用于PC12细胞,早期出现散在于胞浆中的嗜酸性和α-synuclein免疫反应阳性的点状颗粒,然后这些颗粒进一步在核旁聚集,形成聚集中心,最后形成固缩的包涵体,细胞外包涵体可独立存在。这种包涵体形成和演变过程与以人类PD为代表的神经变性疾病中的包涵体非常相似,可以作为研究包涵体相关问题的有力工具。
- 胡轶虹常明张瑜王秋艳张颖韩威胡林森
- 关键词：蛋白酶体PC12细胞神经变性
- 多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中GRP78的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨神经毒素多巴胺(DA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)细胞模型中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法:建立多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型,实验组加入DA(溶解于0.2%维生素C,DA终浓度为200μmol.L-1),对照组加入等体积的0.2%维生素C,分别孵育24h,台盼蓝染色检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡。分别提取实验组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达,应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)鉴定差异蛋白质。结果:实验组细胞存活率为53.2%,与对照组细胞存活率(100%)比较显著下降(P<0.05)。荧光染色,实验组可见细胞核呈固缩状或碎裂状,呈典型的凋亡形态学改变;对照组可见细胞胞核着均匀一致蓝色。DIGE分析,实验组表达增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GRP78。结论:多巴胺能够诱导SH-SY5Y细胞凋亡,凋亡过程中GRP78表达增高,提示GRP78增高可能与PD的发病机制有关。
- 田明秀常明朱本清解洪荣王丹平张春光胡林森
- 关键词：SH-SY5Y细胞多巴胺GRP78
- PC12细胞蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:建立PC12细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示PC12细胞的蛋白质表达谱。方法:提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的鉴定。结果:成功构建出PC12细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出19种PC12细胞的蛋白质,分属于以下6类:分子伴侣及相关功能蛋白、细胞结构/骨架蛋白、代谢相关蛋白、凋亡相关蛋白、激素结合相关蛋白和神经内分泌相关蛋白。结论:PC12细胞样品的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了PC12细胞的蛋白质组学研究技术,证明以PC12细胞为模型的神经系统疾病蛋白质组学研究的可行性。
- 张磊常明徐卉侯澍李红杰朴燕洁胡林森
- 关键词：PC12细胞双向电泳蛋白质组学
