山东省高等学校科技计划项目(J11LF58)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 微小RNA-7对人神经母细胞瘤侵袭和转移能力的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探讨微小RNA-7（miR-7）对神经母细胞瘤侵袭和转移能力的影响。方法将化学合成的miR-？在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人神经母细胞瘤细胞株，实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测细胞中miR-7表达水平；黏附实验和Transwell小室实验检测体外癌细胞游走和侵袭能力；裸鼠转移模型检测体内癌细胞转移能力。结果化学合成miR-7转染神经母细胞瘤后，miR-7表达上调1128．3倍（P〈0．01），细胞黏附能力下降51．3％（P〈0．01），细胞侵袭能力下降52．9％（P〈0．01），裸鼠体内转移能力下降。结论miR-7转染细胞后能抑制瘤细胞的侵袭和转移能力。
- 张桓瑜鹿洪亭董蒨杨传民郝希伟苏南
- 关键词：神经母细胞瘤
- CXCL12及AMD3100对神经母细胞瘤细胞增殖及转移的影响
- 2013年
- 目的探讨CXCL12（SDF-1，基质细胞衍生因子-1）对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞体外增殖及迁移的影响及CXCL12受体拮抗剂AMD3100对其阻断作用。方法用浓度为100ng／mlCXCL12刺激人神经母细胞瘤细胞系QDDQ-NM、SK—N-SH、SH—SY5Y三组细胞，MTT法检测CXCL12对神经母细胞瘤细胞增殖的促进作用。用不同浓度的CXCL12（0、30、50、100ng／m1）诱导三组细胞，Transwell体外趋化迁移实验检测三组神经母细胞瘤细胞迁移能力，再用100ng／mlAMD3100孵育三组细胞后应用CXCLl2诱导，Transwell体外趋化迁移实验检测三组神经母细胞瘤细胞迁移能力的变化。结果MTT结果示在一定时间范围内，CXCL12可促进QDDQ-NM、SH—SY5Y神经母细胞瘤细胞增殖，效果随着时间的延长而增强，在48h时，促进增殖效应达最大，与空白调零组及空白对照组比较有明显差异（P〈0．05）。Transwell体外趋化侵袭实验表明：CXCL12可促进QDDQ-NM、SHSY5Y神经母细胞瘤细胞的迁移能力，迁移细胞数明显高于对照组（P〈0．05），在一定范围内，CXCLl2为50g／ml时作用最强（P％0．01）；且AMD3100均可抑制三组细胞迁移能力（P〈O．05）。结论CXCR4-CXCLl2生物学轴在神经母细胞瘤细胞增殖及嗜器官特异性转移侵袭过程中发挥了重要作用，而AMD3100可阻断神经母细胞瘤的增殖、侵袭能力。
- 姜忠关鸽陈鑫王莉张虹江布先董蒨
- 关键词：趋化因子CXCL12神经母细胞瘤肿瘤转移
- miR-338—3p对神经母细胞瘤增殖和侵袭的抑制作用被引量：5
- 2013年
- 目的探讨microRNA-338—3p（miR-338—3p）对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-N-MC增殖、侵袭和迁移能力的影响，miR靶基因的确定及靶基因功能的研究。方法miRNA芯片结果发现miR在神经母细胞瘤中低表达，利用实时定量PCR验证其结果。利用脂质体Lipofectamine TM2000将miR-338—3pmimics和miR-338—3p的反义寡核苷酸链（ASO）以及对照质粒分别瞬时转染SK-N-SH和SK-N-MC两种细胞系，MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学技术预测miR-338—3p的靶基因，并应用EGFP荧光报告载体实验，实时荧光定量P（’R和Westernblot实验对靶基因进行验证。并利用实时定量PCR检测神经母细胞瘤中靶基因的表达。最后，将靶基因的敲降质粒和过表达质粒以及对照空质粒分别瞬时转染细胞，MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验来检测细胞的体外侵袭和迁移能力。结果实时定量PCR显示与癌旁正常组织相比，miR-338-3p在神经母细胞瘤细胞中低表达（P〈0．01）；癌细胞转染miR-338-3pmimics后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是减弱的（P〈0．01），而在转染了miR-338-3p的AS（3封闭miR-338—3p的表达后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是增强的（P〈0．01）。利用生物信息学方法将RAB14基因作为miR-338—3p的候选靶基因，EGFP荧光报告载体实验显示过表达miR-338—3p可以抑制含有miR-338-3p结合位点的报告载体的荧光量（P〈0．01），而将结合位点的碱基进行突变后miR-338-3p对靶基因3’UTR的抑制作用则消失。实时荧光定量PCR和Westernblot结果表明过表达miR-338-3p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制RAB14的表达（P〈0．01），而用ASO抑制miR-338—3p的表达后RAB14的水平升高（P〈0．01）。实时定量PCR
- 鹿洪亭董蒨陈鑫张虹郝希伟韩芦芦
- 关键词：神经母细胞瘤细胞增殖微RNAS
- 神经母细胞瘤不同侵袭能力细胞株的建立及研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立同一患儿神经母细胞瘤（NB，neuroblastoma）细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株，探讨CXCR4（趋化因子受体4）的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。方法采用有限稀释法，从人神经母细胞瘤细胞系（QDDQ-NM）中获得5株CXCR4表达水平不同的单克隆细胞株，应用免疫组化和Rrr_PCR检测细胞株CXCR4蛋白和CXCR4mRNA的表达水平，Tran—swell体外趋化侵袭实验检测5株细胞株趋化侵袭能力的差异。结果CXCR4在细胞株QDDQ-NM1中的表达（94．20±4．19）明显高于细胞株QDDQ-NM5（79．58±5．10），P〈0．05；CXCIⅥmRNA在QDDNM1中的表达（2．26±0．23）明显高于细胞株QDDKvNM5（1．83±0．08），Pd0．05。QD—NM1的体外趋化侵袭能力（54±4）明显强于QDDQ-NM5（45±1．58），P〈0．05，其与CXCR4蛋白和CXCR4mRNA表达水平呈正相关。结论同一患儿神经母细胞瘤细胞系中的细胞具有异质性，不同细胞株的侵袭能力不同，神经母细胞瘤细胞株高度的体外侵袭能力与CXCR4的高表达呈高度相关性。
- 陈鑫董蒨于倩倩鹿洪亭杨传民张虹
- 关键词：CXCR4受体趋化因子神经母细胞瘤肿瘤转移
- 微小RNA-335通过靶定人类表皮生长因子3调控乳腺癌细胞的侵袭被引量：4
- 2015年
- 目的 观察微小RNA（miR）-335在乳腺癌细胞侵袭中的作用.方法 分别在Basallike类型正永用生化细胞MCF10A和Luminal A乳腺癌细胞MCF7中抑制和过表达miR-335的含量,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;利用生物信息学网站预测miR-335靶基因,并用荧光报告基因检测实验验证;应用miR-335抑制剂及靶基因siRNA单转染和共转染,验证miR-335是否通过靶基因执行功能.最后利用实时荧光定量聚合酶链反应检测在35例原发性乳腺癌组织中miR-335的表达水平.结果 在MCF10A内敲减miR-335,细胞发生侵袭的数目由对照组51个增加到实验组的67个,促进细胞侵袭的能力（P＜0.05）.在MCF7中过表达miR-335后,由对照组侵袭数目51个降至实验组43个,抑制细胞侵袭的能力（P＜0.05）.miR-335能够靶向结合人类表皮生长因子3（ERBB3）的mRNA的3＇-非翻译区（3＇-UTR）,抑制ERBB3 mRNA及蛋白水平表达（P＜0.05）.敲减ERBB3后能够恢复miR-335低表达造成的细胞侵袭能力的降低（P＜0.05）.miR-335在原发性乳腺癌组织中表达为正常组织的0.75,呈显著低表达（P＜0.01）.结论 在原发性乳腺癌组织样本中,miR-335低表达,并且通过靶向ERBB3影响细胞的侵袭能力.
- 刘志洋刘伟伟贾萍陈鑫董蒨
- 关键词：乳腺癌
- miRNAs的表达在神经母细胞瘤转移过程中的作用及意义被引量：2
- 2013年
- 目的检测荷瘤鼠的神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）原发瘤与转移瘤中微小RNA（miRNA）的表达差异情况，探讨异常表达的miRNA参与神经母细胞瘤发生侵袭和转移的可能分子机制。方法建立神经母细胞瘤原发瘤和转移瘤的裸鼠模型，获取原发瘤和转移瘤的组织，分别提取总RNA和小分子RNA，在miRNA微阵列芯片中杂交检测，通过芯片扫描和数据分析并通过实时荧光定量Rrr_PCR验证，获得神经母细胞瘤原发瘤与转移瘤异常miRNAs表达谱。结果筛选出54个可能与神经母细胞瘤侵袭和转移的相关的miRNAs，表达上调35个，下调19个。其中，miR-483—3p、miR-99b、miR-145、miR602、miR-26b、miR125a-3p、let-7f在神经母细胞瘤原发瘤中与转移瘤中的表达的差异倍数分别为9．9583、3．2086、4．9442、4．4085、0．1380、0．1463和0．2864，基因芯片显著性分析指数分别为26．8754、22．8393、22．2147、8．5906、-24．5380、-10．5580和-12．6103，差异有统计学意义（P〈O．01）。结论筛选出的在神经母细胞瘤原发瘤与转移瘤中表达有差异的miRNAs可能在神经母细胞瘤的侵袭和转移过程中发挥着重要作用，为研究神经母细胞瘤的转移和治疗提供了新的靶点。
- 鹿洪亭李富江康晓宁丁玉虎陈鑫张桓瑜苏南董蒨
- 关键词：神经母细胞瘤肿瘤转移聚合酶链反应
