湖南省科技厅重点项目(2007SK2001)
- 作品数：3 被引量：17H指数：2
- 相关作者：孙虹吴雄辉黄利华邢晓为黄苏萍更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅三医院中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SOD1真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因真核表达载体,并在HeLa细胞中进行表达。方法:应用RT-PCR从人外周血中扩增SOD1基因开放阅读框(ORF),采用TA克隆技术,将目的片段插入到pUCm-T载体中进行鉴定,重组的质粒命名为pUCm-T-SOD1。随后,将SOD1进一步克隆到真核表达载体pTracer-CMV/Bsd中。用脂质体将经过测序、验证的重组pTracer-CMV/Bsd-SOD1质粒转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,转染HeLa细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选4周,用RT-PCR、Western blot检测SOD1的表达。结果:成功构建了pTracer-CMV/Bsd-SOD1真核表达质粒,转染HeLa细胞,发现转染成功的细胞均发绿色荧光;RT-PCR及Western blot检测结果表明,所转染的SOD1在HeLa细胞中成功表达。结论:成功构建了能够同时表达绿色荧光蛋白和SOD1的真核表达质粒pTracer-CMV/Bsd-SOD1,为进一步研究SOD1在基因治疗中的作用奠定了基础。
- 吴雄辉孙虹邢晓为黄利华
- 关键词：铜锌超氧化物歧化酶基因转染基因表达基因治疗
- 超氧化物歧化酶与氧化应激相关内耳疾病的研究进展被引量：11
- 2010年
- 超氧化物歧化酶(SOD)作为细胞内氧自由基清除剂,能将O2-,催化生成O2和H2O2;与氧化应激相关的内耳疾病密切相关,对氧化应激引起的内耳毛细胞及听觉神经元损伤具有保护作用。本文从SOD的基因结构、一般理化特性、在内耳氧化损伤的作用、作为内耳基因治疗策略的应用前景进行综述。
- 吴雄辉孙虹
- 关键词：超氧化物歧化酶氧化应激内耳基因治疗
- 纳米羟基磷灰石表面修饰及其DNA结合性能的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的探讨纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nHA)的表面修饰对DNA结合能力的影响。方法采用化学共沉淀-水热合成法制备nHA;应用聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)对其进行表面修饰,对修饰及未修饰纳米粒进行透射电镜观察及Zeta电位检测;凝胶电泳检测纳米粒修饰前后在不同pH值、不同浓度下与DNA结合及保护DNA抗核酸酶消化的能力。结果经PEI表面修饰的nHA透射电镜下呈短棒状,粒径较均匀,分散程度良好;而未修饰的纳米粒较易团聚及分散性差。纳米粒经表面修饰后其Zeta电位为正,在不同pH值、不同浓度下与DNA具有较强的结合及抗核酸酶消化的能力;而未修饰的nHA表面带负电荷,与DNA结合及抗核酸酶消化的能力较差。在pH为7.0环境条件下经表面修饰的nHA浓度为250μg/ml时能更有效结合和保护DNA。结论 nHA经PEI表面修饰后可成为一种有效的DNA结合及转运载体。
- 吴雄辉孙虹邢晓为黄利华黄苏萍
- 关键词：羟基磷灰石表面修饰基因载体
