中国博士后科学基金(20080440328)
- 作品数：2 被引量：17H指数：2
- 相关作者：唐坤郭顺星李标张岗赵丽芳更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院重庆邮电大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 菌根真菌诱导的铁皮石斛根差减cDNA文库构建被引量：11
- 2012年
- 目的构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法采用SMARTer PCRcDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交(SSH)方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库。结果成功构建了受菌根真菌诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库,共获得1 975个阳性克隆。经检测,90%以上克隆能扩增出有效产物,其插入片段大小在150～1 000 bp之间。随机挑取了20个克隆菌液测序并进行了比对分析,大部分为植物应对环境胁迫防御性基因。结论该技术体系所构建的差减cDNA文库质量较好,操作方便,尤其适用于珍稀濒危的植物材料。
- 李标唐坤张岗郭顺星
- 关键词：铁皮石斛菌根真菌抑制消减杂交CDNA文库
- 与菌根真菌共生的兰科福建金线莲差异表达基因的筛选被引量：6
- 2012年
- 研究菌根真菌促进药用植物生长发育的分子作用机制在农业上有着十分重要的理论意义和实践意义.本研究从野生福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)根中分离出一株内生真菌AR-18,经鉴定为瘤菌属(Epulorhizasp.)真菌;将AR-18菌与福建金线莲组培苗接菌培养60天,发现其根中能形成内生菌根并能显著地促进福建金线莲苗的生长.为从与AR-18菌共生的福建金线莲中分离出差异表达基因,本实验采用差异显示PCR(DDRT-PCR)方法,使用3条锚定引物和5条随机引物设计15个引物对,从接菌组和对照组中共分离出52条差异显示条带,其中有9条带能通过双引物重扩增显现.再运用反式Northern点杂交进一步筛选,发现其中5条上调表达基因,包括:编码尿磷酸核苷转移酶基因(UPRTs;EC2.4.2.9)和1条假蛋白基因;1条下调表达基因,编码氨基酸跨膜转运子;1条在接菌组中特异表达基因,编码突变酶K(matK).同时,讨论了上述基因可能的功能,尤其是UPRTs基因和matK基因与菌根真菌互作的功能.本研究是福建金线莲植物在该领域的首次报道.
- 李标唐明娟唐坤赵丽芳郭顺星
- 关键词：基因筛选
