湖南省卫生厅科研基金(B2010-047)
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
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- pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建pcDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Western blot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTT法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果 pcDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(+)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。
- 江青山肖桃源邓文蓉沈宝茗
- 关键词：PCDNA3CNE-2细胞转染增殖
- SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达及其对细胞生长、凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的观察血清淀粉样蛋白A(SAA)在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达及其对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对SAA基因的shRNA表达干扰载体,筛选出有效的小干扰RNA(siRNA)序列,利用siRNA技术和高表达载体分别沉默及过表达SAA,检测SAA表达对鼻咽癌CNE-2细胞的生长及凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-SAA1-homo-482和pCD3.1(+)-SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中可有效地沉默及过表达SAA基因的mRNA和蛋白,且与对照组比较差异具有统计学意义(P均<0.05);SAA增高可促进鼻咽癌CNE-2细胞生长,降低可促进鼻咽癌CNE-2细胞凋亡。结论在SAA基因的shRNA表达干扰载体中,只有pGPU6/GFP/Neo-SAA1-homo-482可有效沉默SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达;SAA增高可促进鼻咽癌CNE-2细胞生长,SAA沉默可促进鼻咽癌CNE-2细胞凋亡。
- 江青山邓文蓉肖桃源沈宝茗
- 关键词：鼻咽肿瘤血清淀粉样蛋白A
- SAA蛋白与BCL-2、Caspase-3及NF-κB关系的研究被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)的超表达和抑制表达对BCL-2、Caspase-3及NF-κB这3种信号分子蛋白表达的影响。方法:将课题组前期已构建成功的pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体采用脂质体法分别转染鼻咽癌CNE2细胞,建立SAA蛋白超表达的pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系和干扰SAA蛋白表达的p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系。pc DNA3.1(+)-SAACNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中SAA蛋白的表达量会逐渐减少,当SAA蛋白的表达量改变时,通过免疫印迹法检测BCL-2、Caspase-3及NF-κB在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中的表达。结果:SAA蛋白的表达在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系中明显增多(P<0.05),在p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系中显著减少(P<0.05),由此可知,pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体成功转染CEN2细胞。免疫印迹检测结果示:随着SAA蛋白表达的增多,BCL-2的表达增多(P<0.05)、Caspase-3及NF-κB的表达减少(P<0.05)。结论:SAA蛋白在人鼻咽癌CNE2细胞中的表达与抑制凋亡的BCL-2蛋白表达有协同作用,对凋亡调节分子Caspase-3及NF-κB蛋白的表达有抑制作用,可推测SAA蛋白可能有促进肿瘤生长、转移的作用。
- 张倩璐邓珊江青山谭俞佳沈宝茗
- 关键词：鼻咽癌BCL-2CASPASE-3NF-ΚB
- SAA对鼻咽癌CNE2细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2015年
- 目的观察血清淀粉样蛋白A(SAA)的超表达和抑制表达对鼻咽癌CNE2细胞生物学行为的影响。方法体外培养SAA高表达的pcDNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系和干扰SAA表达的pGPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系,两种细胞由课题组前期重组的SAA高表达pcDNA3.1(+)-SAA质粒及抑制SAA表达的pGPU6/GFP/Neo-SAA质粒分别转染构建。流式细胞仪分析以上两种细胞的细胞周期。平皿克隆实验检测细胞的增殖状况。结果流式细胞仪检测细胞周期显示SAA表达的增多可促进CNE2细胞分裂。平皿克隆实验显示SAA可使CEN2细胞的增殖能力增强。结论 SAA具有促进人鼻咽癌CNE2细胞增殖和体外迁移浸润的作用。
- 江青山邓珊沈宝茗
- 关键词：血清淀粉样蛋白A鼻咽肿瘤CNE2细胞
