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建立高效液相色谱-串联质谱检测细胞内腺苷酸浓度的方法及其应用被引量：1: 2013年; 细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器,建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响.用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞.采用超高效HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以8 mmol/L N,N-二甲基己胺(DMHA)水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式质谱检测,在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析.结果表明,AMP、ADP和ATP分别在(0.1814～14.5164)μmol/L、(0.2342～18.7354)μmol/L和(0.2003～16.0260)μmol/L线性范围内具有良好的线性关系,其相关系数分别为0.9984、0.9964和0.9990.AMP、ADP和ATP的检出限(LOD,S/N>3)分别为1.9291、1.8794和166.5 nmol/L,定量限(LOQ,S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L,且加标回收率为81.8%～107.8%,相对标准偏差小于7.55%.AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%,日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%.该方法快速、简单、灵敏,能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求.通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化,结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降,且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降,而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加.这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖.; 李宁张海涛罗辉张良滔熊勇贾振斌; 关键词：高效液相色谱-串联质谱腺苷酸能量代谢高良姜

麒麟菜中多肽的提取及多肽的抗血小板聚集和抗菌活性被引量：1: 2016年; 目的从天然活性物质中寻找新的抗血小板药物是筛选新型抗血小板聚集药物或药物前体的一个重要策略。文中建立从麒麟菜中纯化多肽的方法,并研究其抗血小板聚集、抗菌的活性。方法用酸处理和sephdex G-50凝胶层析法从麒麟菜中提纯小分子多肽,菌株用LB培养基培养,收集对数生长期的细菌,分别加入对照品(即样品中加入0μg/m L的多肽)、不同浓度的多肽(5、10、20、40μg/m L)、青霉素(64μg/m L)的样品在37℃培养24 h后取出。用比浊法检测对照品和多肽样品对大肠埃希菌(D1314)和金黄色葡萄球菌(s.agr+、RN4220)生长的影响,采用全血血小板聚集仪检测麒麟菜低分子多肽对凝血酶诱导的血小板聚集的影响。结果 50、100、150、200 g麒麟菜多肽提取得率分别为0.382%、0.405%、0.389%、0.389%。经凝胶层析纯化样品在SDS-PAGE中显示为单一蛋白质条带。相对分子质量约为3000。大肠埃希菌(D1314)、金黄色葡萄球菌(RN4220、s.agr+)对多肽样品及青霉素较敏感,且随多肽浓度增加,抑菌效果增强。与对照品血小板最大聚集率[(9.00±3.74)Ω]比较,2.5、5、10μg/m L多肽样品[(4.98±0.82)、(4.33±0.47)、(2.25±0.50)Ω]和血栓通[(5.08±1.21)Ω]明显减少(P<0.01),与血栓通比较,多肽样品对血小板最大聚集率减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。2.5、5、10μg/m L多肽样品、血栓通对血小板聚集的抑制率分别为44.7%、51.9%、75.0%。结论文中建立的方法可从麒麟菜中成功提取到纯化的麒麟菜低分子多肽,且能显著有效抑制血小板聚集及细菌的生长。提取的多肽是潜在的抗血小板药物。; 刘彬余华军伍俊崔运忠张海涛; 关键词：麒麟菜多肽血小板聚集抗菌

视神经蛋白在自噬中作用研究进展: 2017年; 视神经蛋白(optineurin,OPTN)的基因突变与正常眼压型青光眼有关。OPTN是一种典型选择性自噬受体,能将泛素化底物蛋白带到自噬体中降解;OPTN可通过非泛素化方式降解异常蛋白;OPTN突变或过表达时,其自身还能诱导自噬。OPTN通过自噬参与多种细胞功能。本文就OPTN在自噬中作用的研究进展作一综述。; 李晓才伍俊张海涛; 关键词：自噬泛素化

饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响被引量：5: 2017年; 目的研究饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响。方法用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(饱和脂肪酸)和DHA(不饱和脂肪酸)分别处理肺癌细胞A549,绘制细胞生长曲线并计算克隆形成率以检测细胞增殖。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞24h后,采用激光共聚焦显微镜从形态学方面观察细胞自噬情况。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,用Western blotting检测细胞自噬相关蛋白的表达。结果30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549细胞增殖的作用(P<0.05),硬脂酸、DHA处理A549细胞24h后均检测到细胞出现明显的自噬;Western blotting结果显示,硬脂酸、DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P<0.05)。结论饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸均有抑制肺癌细胞增殖、诱导肺癌细胞自噬的作用,其机制可能与p-m TOR(ser2481)信号通路有关。; 李慧敏伍俊吴尚余华军汪亚君熊禹真兰柳波张海涛; 关键词：A549细胞细胞增殖自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

高良姜素抗肿瘤作用被引量：2: 2014年; 高良姜素是一种从高良姜的根茎中提取的天然黄酮类化合物,是高良姜中重要的药用成分.大量研究表明,高良姜素具有多种生物活性,发现它有多种抗肿瘤机制,包括抗增殖、促凋亡、促自噬、以及抑制肿瘤细胞的转移等.; 苏丽娟张海涛伍俊; 关键词：高良姜素抗肿瘤细胞凋亡自噬

麒麟菜多肽对血小板聚集及角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成的影响被引量：10: 2018年; 目的探讨麒麟菜多肽抗血小板聚集的效果,以及其对角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成的影响。方法采用光学比浊法检测不同剂量的麒麟菜多肽对二磷酸腺苷(ADP)和凝血酶诱导的血小板聚集的影响,该体外实验分4组,采用生理盐水或麒麟菜多肽2.5、5.0、10.0μg/ml处理血小板,采用FLASH连续光谱荧光酶标仪动态监测血小板聚集情况,计算血小板最大聚集率(MAR)。体内实验以角叉菜胶腹腔注射复制小鼠尾部血栓模型,采用麒麟菜多肽15,30,60mg/kg和氯吡格雷100mg/kg灌胃处理,连续7d。于末次给药后1h采用角叉菜胶诱发血栓形成,24h后用游标卡尺测量小鼠尾部长度及尾部血栓形成长度,计算血栓长度占尾部总长度的百分比(%)。结果体外实验中,光学比浊法证实课题组研究提取的麒麟菜多肽可抑制ADP和凝血酶诱导的血小板聚集。ADP诱导的血小板MAR在生理盐水处理组为100%,在麒麟菜多肽低、中、高剂量组分别为61.84%、71.04%、60.95%,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.01);凝血酶诱导的血小板MAR在上述4组分别为100%、75.34%、69.96%、73.74%,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.01)。体内实验中,麒麟菜多肽低、中、高剂量组和氯吡格雷组对角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成的抑制率分别为36.89%、17.25%、22.99%、18.96%,与生理盐水组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论麒麟菜多肽可抑制角叉菜胶诱发的小鼠尾部血栓形成,具有防治血栓形成的潜在功能。; 余华军伍俊吴尚李慧敏黄慧张海涛; 关键词：麒麟菜多肽角叉菜胶血栓

镓咔咯PDT诱导肝癌细胞凋亡及其机制探究: <正>作为非常有前景且不断发展的新技术,光动力治疗PDT对肺癌、膀胱癌、尿道癌及各种眼科癌症等癌症治疗呈现出极高的药用可能[1]。自第一代PDT治疗药物Photofrin的上市,越来越多的工作开始集中在新型卟啉与金属卟啉...; 张召汪华华江怡雨张海涛刘海洋; 关键词：ROS 细胞凋亡; 文献传递

Case synthesis of a β-chloro bulky bis-pocket corrole:Crystallographic characterization and photophysical properties: 2018年; A new 2-chloro-5,10,15-tris(2,4,6-triphenylphenyl)-corrole was accidentally synthesized in an acceptable yield of 5.7% during the synthesis of its parent corrole, in which DDQ served as oxidant and chlorinating agent. The compound was well characterized by X-ray diffraction analysis, ~1 H NMR, mass spectroscopy and absorption spectroscopy. Photophysical properties tests revealed that the chlorination caused a sharp decrease in fluorescence intensity, fluorescence life time, and fluorescence quantum yield.Electrochemical investigation demonstrated the positive shift of redox potentials for chlorinated corrole as compared to non-chlorinated corrole.; Atif AliFan ChengWei-Hong WenXiao YingJaipal KANDhadiHui WangHai-Yang LiuChi-Kwong Chang; 关键词：CORROLE PHOTOPHYSICAL SINGLET

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国家自然科学基金(81273549)

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