国家教育部博士点基金(20124433120002)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：娄海波张哲欢王俊洁蓝开健李长征更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省教育厅育苗工程项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库被引量：2
- 2013年
- 目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库)。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10^(11)[(1.7×10~6×70%)×(3.1×10~5×90%)]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10~5。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10^(11),二级抗体库库容量达到9×10~5,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。
- 蓝开健张哲欢梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰
- 关键词：膀胱癌流式细胞仪检测
