福建省重点科技计划项目(2002Y032)
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
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- 相关机构：南京军区福州总医院福建省肿瘤医院第二军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 精子特异性透明质酸酶PH-20结构与功能被引量：7
- 2004年
- 精子表面特异性透明质酸酶(PH-20)是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子头部浆膜和顶体内膜,是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。
- 曾健郑德柱兰风华
- 关键词：PH-20免疫避孕
- 小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定
- 2004年
- 目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。 结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。 结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2
- 熊永忠郑德柱谢飞涂向东兰风华
- 关键词：精子小鼠PCRLDH同工酶避孕疫苗
- 小鼠乳酸脱氢酶C4在大肠杆菌中的可溶性表达与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建小鼠精子特异性乳酸脱氢酶C4(mLDHC4)的原核表达载体并进行重组蛋白的纯化。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,反转录合成cDNA。自行设计引物,PCR扩增mLDHC4的编码序列,产物经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,获得重组载体。将重组载体转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导mLDHC4表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和乳酸脱氢酶活性测定方法对重组mLDHC4进行鉴定,Ni+-NTA亲和层析法纯化mLDHC4,并将其与pVAX1-mLDHC4(小鼠mLDHC4的真核表达载体)免疫小鼠的抗血清进行免疫印迹反应。结果重组载体经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,可释放大小约1000bp的插入片段,序列分析表明,克隆的DNA片段与GenBank登录的mLDHC4编码序列完全一致,将此重组质粒命名为pET-28a(+)-mLDHC4。在IPTG的诱导下,重组菌可表达大小约35kD的蛋白质,且其裂解液具有很高的乳酸脱氢酶活性,经亲和层析纯化后在聚丙烯酰胺凝肢中仅显示单一蛋白区带,与抗血清反应后在硝酸纤维素膜上形成特异性条带。结论小鼠mLDHC4的全长编码序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,纯化后的蛋白特异性高、活性强。
- 张朵熊永忠陈平辛娜兰风华
- 关键词：乳酸脱氢酶类基因表达
- 精子特异性人乳酸脱氢酶的原核表达与鉴定
- 2008年
- 精子特异性乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase—C4。LDH-C4）特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸和精子细胞中，具有和其它同工酶不同的独特理化性质，与精子的生成、代谢、获能和受精有密切关系，为精子能量代谢的一个关键酶，其抗生育效果在多种哺乳动物，包括灵长类已得到证实。鉴于在分布上的特异性，LDH—C4一直被当作避孕疫苗的候选对象而受到重视。为了进一步研究LDH—C4的功能，制备针对LDH—C4的特异性抗体，我们构建了人精子特异性乳酸脱氢酶C（HLDH-C4）的原核表达载体，并进行原核表达和鉴定。
- 辛娜黄梁浒涂向东吴玉水兰风华
- 关键词：原核表达载体特异性抗体乳酸脱氢酶精子细胞哺乳动物能量代谢
- 精子特异性乳酸脱氢酶-C4的研究进展被引量：5
- 2003年
- LDH C4是避孕疫苗研制中最有特征性的精子特异性抗原之一。LDH C基因在生精细胞激活而在体细胞受抑制 ,存在LDH C启动子、多种转录因子、CpG岛甲基化等多种因素在转录水平上发挥基因调节作用。针对LDH C4的高水平抗体能有效阻断受精 ,而天然LDH C4经过化学修饰后显示高度免疫原性 ,能诱导同种异体免疫性不孕。
- 熊永忠兰风华
- 关键词：乳酸脱氢酶精子基因调节避孕疫苗
- 人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫效果的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗,并免疫雌雄两性BALB/c小鼠,以观察特异性抗体的产生。方法:采用分子克隆的方法构建pVAX1-hLDHC DNA疫苗。双酶切及正反向测序对该DNA疫苗进行鉴定。肌肉注射方法免疫雌雄两性BALB/c小鼠,ELISA和Western blot方法检测小鼠血清中的特异性抗体,常规病理学方法检测雄性实验小鼠的睾丸组织。结果:双酶切及正反向测序结果表明:插入片段的序列以及插入的位置和方向均正确。肌肉注射免疫BALB/c小鼠后可诱导明显的体液免疫反应,且在雄性实验小鼠中未观察到睾丸炎的发生。结论:成功构建了具有一定免疫效果的hLDHC DNA疫苗,为今后进行更深入的研究奠定了基础。
- 辛娜张朵陈平涂向东吴玉水兰风华
- 关键词：DNA疫苗基因免疫
- 精子特异性透明质酸酶PH-20研究进展
- 2004年
- 精子表面PH-20是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子表面浆膜和顶体内膜。它是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。
- 曾健郑德柱兰凤华
- 关键词：PH-20免疫避孕透明质酸酶
- 精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫避孕效果的实验研究被引量：3
- 2008年
- 精子特异性乳酸脱氢酶是精子能量代谢的一个关键酶,具有很强的组织特异性和免疫原性.在本研究中,将人和小鼠(Mus musculus)的精子特异性乳酸脱氢酶编码序列分别与真核表达载体pVAX1连接,构建了两个DNA疫苗:pVAX1-hLDHC和pVAX1-mLDHC.将这两个DNA疫苗通过黏膜表面滴注的方式分别免疫雌雄两性BALB/c小鼠,在实验小鼠的血清和雌性实验小鼠的阴道分泌液中均检测到特异性抗体的存在,滴度随免疫次数的增加而升高.交配实验中,实验组出生子代的数量明显减少,有的小鼠甚至未生育,与未免疫组和pVAX1空质粒免疫组在统计学上有显著性差异.精子凝集实验表明,实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液均可引起正常雄性小鼠的精子悬液发生凝集反应.免疫组化结果显示:实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液中的抗体与位于正常精子胞质、顶体外膜及顶体囊中的乳酸脱氢酶抗原发生特异性结合.本研究初步显示了人用避孕DNA疫苗免疫效果,为以后可能进行的临床实验奠定了基础.
- 陈勇张朵辛娜熊永忠陈平李博涂向东兰风华
- 关键词：DNA疫苗避孕疫苗黏膜免疫
- 男性不育的遗传学研究
- 不育症被定义为:未采取任何避孕措施、有正常夫妻生活的夫妇,女方一年以上未怀孕。据统计,希望有孩子的夫妇中,约10-15%受到不育的困扰,男方、女方因素各占50%。男性不育是一类复杂的疾病,能够有效治疗的仅仅是其中一小部分...
- 兰风华李博张朵曾健
- 关键词：男性不育基因突变
- 文献传递
- 人卵细胞ZP3蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定
- 2006年
- 目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-H is中,在E.co li BL 21-DE 3中诱导ZP 3融合蛋白的表达。结果在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为50 000的产物。结论人卵细胞ZP 3蛋白的全长编码序列已被克隆至ZP 3蛋白融合表达载体pET-H is,并在E.co li BL 21-DE 3中获得高表达。
- 李津谢飞涂向东郑德柱兰风华
- 关键词：克隆基因表达
