广东省中医药管理局基金(402024)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 耐拉米夫定乙型肝炎病毒变异株全基因组克隆及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:扩增并克隆耐拉米夫定乙型肝炎病毒(HBV)变异株全基因组DNA,为构建含双体HBV YMDDDNA质粒和HBV YMDD变异株细胞模型及研究药物筛选奠定基础。方法:从一名耐拉米夫定的慢性乙型肝炎病人血清中提取HBV病毒DNA,用错配PCR结合限制性片段长度多态性(RFLP)进行变异分析,然后采用PCR方法在HBV负链开环缺口处及基因组中单一酶切点(SpeⅠ)处,设计两对引物从两个方向分别扩增1.15 kb和2.05 kb的单链及双链DNA区,利用基因重组技术,将两片连接后克隆至质粒pcDNA3.1-中,再进行DNA序列测定。结果:错配PCR结合RFLP分析证实该病毒存在YVDD变异,通过两段法克隆出HBV全基因组,经序列分析所得为HBV YMDD变异株全基因组。结论:成功克隆出HBV YMDD变异株全基因组。
- 邓欣李辉欧璇刘钦蒋小玲伍欣星
- 关键词：YMDD拉米夫定多聚酶基因乙型肝炎病毒
- 表达乙肝病毒YVDD变异株肝癌细胞模型的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:建立能稳定表达乙肝病毒(HBV)YVDD变异株的细胞模型,为研究HBV YVDD变异株的生物学特性和进行抗病毒药物筛选提供细胞模型。方法:以pcDNA3·1-HBV-YVDD为模板设计两对引物,扩增带不同酶切位点的HBV全基因,扩增产物纯化后,经酶切、连接,得到pcDNA3·1-HBV-YVDD重组体。采用脂质体转染技术,将pcDNA3·1-HBV-YVDD重组体转染体外培养的HepG2细胞。细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的检测用酶联免疫吸附法(ELISA)法,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HBV多聚酶的表达。结果:建立了HBV-YVDD变异株体外感染的细胞模型HepG2-2HBV-YVDD。该细胞模型能表达较高水平的HBsAg和HBeAg,并能检测到多聚酶的表达。结论:成功构建了能较稳定表达HBV-YVDD变异株的细胞模型。
- 邓欣李辉蒋小玲吴其恺聂广刘钦
- 关键词：细胞模型基因转染
