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江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(CX07S-039Z)
作品数:
2
被引量:5
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相关作者:
徐开林
陈翀
李振宇
曾令宇
潘秀英
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相关机构:
徐州医学院附属医院
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发文基金:
江苏省普通高校研究生科研创新计划项目
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2009
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携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体的构建及表达
被引量:5
2009年
目的构建携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体,并研究其在CD4+CD25-T细胞中的表达。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体。采用脂染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转导效率,通过RT-PCR及Western Blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测Foxp3的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP/pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/mL。以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞基因转导效率达55.95%,并且存在Foxp3 mRNA和蛋白水平的高表达。结论成功构建了携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体;该系统可有效的介导Foxp3基因在CD4+CD25-T细胞中表达。
曹江
陈翀
徐开林
潘秀英
李振宇
曾令宇
关键词:
慢病毒
FOXP3
调节性T细胞
自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞的制备和特性研究
被引量:4
2009年
目的制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞(Treg细胞),检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4^+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达,CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES—GFP、pXZ208·Foxp3-IRES—GFP,包装的重组慢病毒滴度达10^6IU/ml。以pXZ208-IRES—GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4^+CD25-γ细胞,实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高。在抗CD3e单抗、抗原呈递细胞存在条件下,实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组(P〈0.01);且该细胞可显著抑制CI)4^+CD25-T细胞的增殖。结论成功构建了自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程Treg细胞;基因工程Treg细胞具有与CD4^+ CD25^+ Treg细胞相似的表型及低增殖性和免疫抑制性。
曹江
陈翀
曾令宇
李振宇
程海
潘秀英
徐开林
关键词:
慢病毒
转录因子FOXP3
T淋巴细胞
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