国家自然科学基金(30970869)
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：大连大学附属中山医院大连大学中国科学院更多>>
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- PECAM-1 siRNA对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖与凋亡的影响
- 2013年
- 目的:探讨血小板内皮细胞黏附因子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)基因小分子RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖及凋亡的影响。方法:设计干扰RNA编码DNA特异性序列,合成siRNA片段,转染CNE1/R细胞,G418筛选出稳定转染细胞株。蛋白质印迹法检测PECAM-1 siRNA干扰后,细胞中PECAM-1蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖及流式细胞术检测细胞凋亡。结果:筛选出稳定转染细胞株,实验组PECAM-1蛋白表达较阴性组下调3.4倍,证实干扰有效。与阴性组及空白组相比,实验组细胞增殖能力下降,凋亡率升高。结论:PECAM-1基因siRNA可抑制CNE1/R细胞增殖,促进其凋亡。PECAM-1可能在鼻咽癌细胞辐射后生长凋亡中起作用。
- 魏继楼刘芳蒋中秀程红蕾罗素梅王月丽王若雨
- 关键词：RNA干扰鼻咽癌
- 外源基因转染细胞技术的研究进展被引量：19
- 2014年
- 细胞转染技术是分析细胞内基因及基因产物功能的重要工具。它不仅是基因功能研究、基因免疫的理论和技术基础,也是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。同时也是体内应用的重要过程,比如基因治疗、疫苗接种、药物开发等。在过去的40年里,已开发了多种外源基因转染细胞的方法。主要包括以病毒介导的外源基因转染细胞方法和非病毒介导的细胞转染方法。其具体可细分为三类:即生物学方法、化学方法、物理方法。这些方法的提出使外源分子如DNA、RNA等导入特定细胞并表达目的基因及产生特定功能的蛋白质分子得以实现。理想的细胞转染方法应该具有较好的生物降解性、稳定性、靶向性强、有助于基因的表达并能应用于基因方面疾病的治疗。但每种方法都有自己的优势和不足,应根据具体实验的设计和目的来选择最佳细胞转染方法.
- 王月丽魏继楼程红蕾刘芳罗素梅王若雨
- 关键词：细胞基因
- CNE-1细胞高剂量X线常规分割照射后MDR1与PECAM1表达情况观察被引量：5
- 2011年
- 本实验采用体外培养的人鼻咽癌CNE-1细胞系高剂量x线照射后，初步探讨高剂量照射引起血小板内皮细胞黏附分子-1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM1）改变与CNE-1细胞产生多药耐药（multiple drug resistance，MDR）的可能的相关性。
- 杜伟一杨方刘勇郭瑞娟王若雨
- 关键词：高剂量照射分割照射内皮细胞黏附分子X线
- 高剂量X射线照射对人鼻咽癌CNE-1细胞生物学特性影响的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:分别以照射前的人鼻咽鳞癌CNE-1细胞和高剂量X射线(50Gy)照射后的CNE-1细胞为研究对象,探讨高剂量X射线照射后的CNE-1细胞的某些生物学特性的变化。方法:采用细胞毒实验(SRB法)检测两组细胞在化疗药物作用下的IC50值,RT-PCR测两组细胞MDR-1基因,共聚焦显微镜测P-gp蛋白,对比两组细胞的耐药性;MTT法测定两组细胞生长曲线,共聚焦显微镜检测Ki-67蛋白,比较两组细胞的生长增殖能力;采用细胞黏附实验比较两组细胞的黏附性,RT-PCR检测两组细胞PECAM-1基因的表达,探讨PECAM-1和细胞黏附的相关性。结果:照射后CNE-1细胞在多柔比星作用下的IC50值是照射前细胞的1.8倍(P=0.004),在紫杉醇作用下的IC50值是照射前细胞的5.3倍(P=0.003),两组细胞MDR-1基因半定量值分别为0.17±0.01和0.34±0.04(P=0.002),照射后细胞P-gp蛋白高表达于照射前细胞;在对数生长期时,照射后细胞生长快于照射前细胞,且其Ki-67蛋白表达高于照射前细胞;照射后细胞在各时间点的黏附率都明显高于照射前细胞,两组数值比较差异有统计学意义,P<0.05;照射前后两组细胞PECAM-1基因的半定量值分别为0.40±0.02和0.51±0.01,P=0.002。结论:高剂量X射线照射后的CNE-1细胞产生耐药性;生长增殖能力及黏附特性高于照射前细胞,PECAM-1基因也高表达,Ki-67及PECAM-1均可能参与耐药。
- 宋学薇皇婷阙开乾王若雨王秀丽
- 关键词：鼻咽肿瘤KI-67PECAM-1
- siRNA干扰血小板内皮细胞黏附因子-1表达对人鼻咽癌耐药细胞CNE1/R多药耐药性的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨抑制血小板内皮细胞黏附因子-1(PECAM-1)表达对多药耐药基因1(MDR-1)及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的影响。方法设计并化学合成针对PECAM-1的三条siRNA序列,命名为si-PECAM1,2,3,脂质体转染法将其转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Westernblot方法检测并筛选出抑制效果最好的si-PECAM序列,将筛选出的si-PECAM转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Western blot方法检测抑制PECAM-1表达前后MDR-1及其编码产物P-gp的变化情况。结果 Semi-qRT-PCR的结果显示,设计三条si-PECAM序列均有效,以si-PECAM3干扰效果最明显(P<0.001),Western blot结果显示与Semi-qRT-PCR的结果一致;转染si-PECAM348h后做Semi-qRT-PCR的结果显示抑制PECAM-1表达后MDR-1表达明显下调(P<0.001),Western blot结果与Semi-qRT-PCR的结果一致,抑制PECAM-1表达后MDR-1编码产物P-gp的表达也明显下调(P<0.001)。结论抑制CNE1/R中PECAM-1表达后MDR-1及其编码产物P-gp的表达均明显下调,提示PECAM-1可能参与X射线辐射诱导人鼻咽癌细胞发生多药耐药。
- 蒋中秀李昕伦永志王若雨
- 关键词：鼻咽肿瘤
- 人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1真核表达载体的构建
- 2013年
- 通过TA克隆技术及二步克隆的方法构建人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1的真核表达载体。将已克隆至Pmd19-T Simple载体的PECAM-1基因片段使用Not/HindⅢ酶切,亚克隆至pcDNA3.1/myc-His(-)A载体并双酶切及测序鉴定。成功构建了人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1的真核表达载体,为下一步建立人鼻咽鳞癌PECAM1基因过表达细胞系奠定了基础。
- 王月丽魏继楼伦永志王若雨
- 关键词：鼻咽癌真核表达
- 血小板内皮细胞黏附分子-1与肿瘤
- 2014年
- 血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）是免疫球蛋白超家族中的一种黏附分子,高表达于内皮细胞.近年来研究发现,PECAM-1与肿瘤的发生、血管生成、细胞凋亡以及耐药均相关,可能对肿瘤的诊断与治疗产生重要影响.
- 刘芳贾晓艳王若雨
- 关键词：肿瘤细胞凋亡
- 一种新的突变型人血小板内皮细胞黏附因子1的基因克隆与序列分析被引量：1
- 2012年
- 目的克隆一种新的突变型人血小板内皮细胞黏附因子1(PECAM1)基因,并应用生物信息学方法进行序列分析。方法以提取的X射线辐射诱导的人鼻咽癌耐药细胞CNE1/R中的总RNA为模板,RT-PCR扩增获得PECAM1基因片段,克隆至pMD19-TSimple载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析PECAM1基因的序列同源性与结构特征。结果成功克隆了突变型人PECAM1基因,但与GenBank中的人PECAM1基因参考序列相比有三点不一致,分别位于1452、1688和2008nt处。与马、猪、牛、大鼠、小鼠的PECAM1基因具有高度同源性,同源性分别为82%、82%、79%、73%、73%。突变序列与参考序列相比,1688和2008nt翻译对应的氨基酸发生变化,即563、670aa分别由丝氨酸、精氨酸改变为天冬酰胺、甘氨酸。人PECAM1蛋白39～127aa、235～322aa、327～404aa、408～496aa和502～594aa均为Ig-2免疫球蛋白超家族结构域,而突变型人PECAM1基因编码的563aa突变刚好位于502～594aa的Ig-2免疫球蛋白超家族结构域中。结论突变型人PECAM1基因在基因水平相较人PECAM1基因参考序列有3个位点改变,应用生物信息学方法进行序列分析,发现在蛋白水平改变导致的563aa突变位于Ig-2免疫球蛋白超家族结构域,这为进一步研究其生物学功能及其在X线照射后人鼻咽癌细胞CNE1/R产生多药耐药中的作用提供了依据和线索。
- 李昕蒋中秀伦永志王若雨
- 关键词：抗原CD31鼻咽肿瘤计算生物学
