北京市科委重大项目(D09050703560908)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王琦成军张锦前刘顺爱高萍更多>>
- 相关机构：北京地坛医院北京老年医院沈阳医学院更多>>
- 发文基金：北京市科委重大项目北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HCVcore/NS3/NS5A对内源性IFN-β表达影响及其调控机制初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)core、NS3、NS5A对内源性IFN-β表达的影响及其调控机制。方法将HCVcore、NS3、NS5A表达载体pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A转染至HepG2细胞,验证蛋白表达之后,采用实时荧光定量PCR和Westernblot及ELISA方法观察3种蛋白对IFN-βmRNA及蛋白水平表达的影响。构建IFN-β全长启动子报告基因表达载体,借助双萤虫素酶活性检测,探讨HCVcore、NS3、NS5A对IFN-β转录水平的调控机制。结果 pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A在HepG2细胞中成功表达,与转染pcDNA3.1/myc-His空载体相比,pcDNA3.1/myc-His-NS3/NS5A过表达时,在mRNA及蛋白水平均能抑制HepG2细胞内IFN-β的表达,与转染空载体的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。双萤虫素酶活性检测显示,转染IFN-β全长启动子报告基因表达质粒后,与对照组相比,双萤虫素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1/myc-His-core过表达时对IFN-β的表达无明显影响。结论 HCVNS3/NS5A在mRNA及蛋白水平能抑制IFN-β表达,并通过其转录水平影响IFN-β表达,core对IFN-β的表达无明显影响。其具体调控机制有待进一步研究。
- 董金玲高萍刘顺爱王琦张锦前成军
- 关键词：核心蛋白病毒非结构蛋白质类干扰素Β
- HCV NS3对IFN-λⅠ表达的影响及其调控机制
- 2013年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)NS3对干扰素-λⅠ(IFN-λⅠ/IL-29)表达的影响及其调控机制。方法将HCV NS3表达载体pcDNA3.1/myc-His-NS3转染至HepG2细胞,验证HCV NS3蛋白表达之后,采用实时荧光定量PCR、Westernblot和ELISA法观察HCV NS3对IFN-λⅠmRNA及其蛋白表达水平的影响。构建IFN-λⅠ全长启动子报告基因表达载体和3’-非翻译区(3’-UTR)报告基因表达载体,借助双萤光素酶活性检测,探索HCV NS3对IFN-λⅠ转录水平的调控机制。结果 pcDNA3.1/myc-His-NS3在HepG2细胞中成功表达,与转染pcDNA3.1/myc-His空载体相比,pcDNA 3.1/myc-His-NS3过表达时在mRNA和蛋白水平均能抑制HepG2细胞内IFN-λⅠ的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。双萤光素酶活性检测结果显示,与对照组相比,转染IFN-λⅠ全长启动子和3’-非翻译区报告基因表达质粒后,双萤光素酶活性变化无统计学意义(P>0.05)。结论 HCV NS3在mRNA及蛋白水平能抑制IFN-λⅠ的表达,但其转录水平不受影响,具体调控机制尚有待进一步研究。
- 高萍董金玲刘顺爱王琦张锦前成军
- NS2TP基因启动子报告基因载体的构建及其活性验证
- 2013年
- 目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因(NS2TP)的转录调节机制。方法应用PCR方法扩增NS2TP的启动子,克隆入pGL4.10载体,构建萤虫素酶报告基因载体,转染HepG2细胞,检测双萤虫素酶活性,验证其转录活性;通过缺失突变法构建系列截短的NS2TP基因启动子报告基因载体。结果成功构建了系列截短的NS2TP基因启动子报告基因载体,分别命名为N1、N2、N3和N4,并确定了N3为NS2TP基因的核心启动子。结论构建NS2TP基因启动子的系列截短报告基因载体,确定了其最小转录活性区域,为进一步研究NS2TP基因的转录活性调节机制奠定理论基础。
- 高学松杨彪王琦李炜成军
- 关键词：启动子
