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上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响被引量：7: 2012年; 目的探讨上调microRNA-150(miR-150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染)。采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(P<0.01)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36%±1.78%)与阴性对照组(5.12%±0.54%)及空白对照组(4.68%±0.35%)相比明显增加(P<0.01)。结论上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因。; 张俊罗娜王勃李少林朱辉; 关键词：肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡微RNAS

人结肠癌细胞株CW-2干细胞生物学特性研究被引量：1: 2010年; 目的从人结肠癌细胞株CW-2中分离癌干细胞,并观察其生物学特性。方法采用多重联合法分离人结肠癌干细胞,应用流式细胞仪检测分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量;细胞周期检测、体外侵袭实验、体内成瘤实验对癌干细胞进行生物学特性研究。结果分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量为89.57%;CD44+EpCAM+癌干细胞的增殖能力、侵袭能力、致瘤能力均强于非癌干细胞,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD44+EpCAM+癌干细胞具有低增殖性、高侵袭性、高致瘤性,并可通过多重联合分离获得。; 刘美艾亮陈宓龙浩李少林; 关键词：癌干细胞结肠癌流式细胞技术细胞分离

Na^+-K^+-ATP酶表达对结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响被引量：1: 2012年; 目的:探讨Na^+-K^+ATP酶α亚单位表达对人结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响,及哇巴因治疗结直肠癌的可能机制。方法:以SW480和SW620细胞为研究对象,予生理浓度的哇巴因(1 nM)干预,应用MTT法、Transwell侵袭小室、生化酶学、实时定量PCR及蛋白免疫印迹等方法检测细胞的增殖及侵袭力,Na^+-K^+-ATP酶活性及其亚单位(α_1、α_2及α_3)表达水平。结果:与SW480细胞比较,SW620细胞增殖及侵袭力明显增加(P均<0.05),Na^+-K^+-ATP酶活性下降,Na^+-K^+-ATP酶α_1亚单位mRNA表达上调(P均<0.001):而SW480细胞Na^+-K^+-ATP酶α_3亚单位mRNA表达上调(P<0.001);且均与蛋白表达水平一致;哇巴因在24、48及72h均能显著抑制两种细胞的增殖活力,以48 h效应最强,减弱其侵袭力,并下调两种细胞Na^+-K^+-ATP酶α_1亚单位蛋白表达,增加SW620细胞Na^+-K^+-ATP酶活性,而对两种细胞Na^+-K^+-ATP酶α-2和α_1亚单位蛋白表达及SW480细胞Na^+-K^+-ATP酶活性无影响。结论:Na^+-K^+-ATP酶活性下降部分源于α_3亚单位表达下调及α_1亚单位表达上调,可能共同参与结直肠癌的转移;哇巴因抑制结直肠癌细胞的增殖及侵袭力的机制,可能部分与下调Na^+-K^+-ATP酶α_1亚单位蛋白表达有关。; 张贵海文坤明张先平王轶胡敏李少林; 关键词：结直肠癌腺苷三磷酸酶哇巴因

结肠腺癌中结肠癌干细胞的分离、鉴定被引量：1: 2011年; 目的从人结肠腺癌组织中分离、鉴定结肠癌干细胞,并初步观察其生物学特性。方法利用新鲜结肠腺癌组织,无血清悬浮成球培养,流式细胞检测ESA、CD44表达情况,体外观察其诱导分化及CK20、Muc表这情况,Balb/C小鼠移植观察其成瘤情况。结果从人原代结肠腺癌中分离、纯化EpCAM^(high)CD44^+结肠癌干细胞,结肠癌原代细胞中EpCAM^(high)CD44^+细胞比例为1.7%～38%(平均5.4%)。单克隆形成实验证实结肠癌组织中存在肿瘤干细胞,其比例为(2.07±0.11)%,分离获得的EpCAM^(high)CD44^+细胞能在无血清培养基中"成球",在血清诱导下能贴壁分化;将EpCAM^(high)CD44^+细胞移植在Balb/C裸鼠体内,表现出很强的致瘤性,移植瘤中EpCAM^(high)CD44^+细胞比例为3.6%～43.2%(平均15.2%),所有的移植瘤经组织学测定,均形成腺管样结构,表达结肠特异性分化标志物CK-20、中性上皮粘蛋白(neutral epithelial mucins,Muc)。结论人结肠腺癌组织中存在EpCAM^(high)CD44^+细胞群,具有和普通干细胞相类似的无限增殖、自我更新和分化能力。; 艾亮刘美陈宓李少林; 关键词：结肠腺癌结肠癌干细胞

Influence on Biological Behavior of Colon Cancer Stem Cells after RNA Interfering CD133: 2010年; Liang AI Mei LIU Mi CHEN Shao-lin LI; 关键词：干细胞培养生物学行为流式细胞仪 CD44 RNAI技术

肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群的分离及其特性的研究: 2011年; 目的研究CD133在人肝癌细胞系Hep3B中的表达以及CD133^+细胞的体外增殖、自我更新及体内成瘤能力,初步探讨肝癌中CD133^+细胞亚群的干细胞特性。方法流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中CD133^+细胞表达情况;免疫磁珠分选技术纯化CD133^+肿瘤细胞;MTT法检测CD133^+细胞体外增殖能力;无血清培养纯化的CD133^+肿瘤细胞,观察其生长分化情况及非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)接种实验观察其体内成瘤能力。结果流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中有9.13%的细胞呈CD133^+表达;免疫磁珠富集的CD133^+肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,且在1,3,5,7天的紫外吸光度(A)值均高于相同条件下未分选细胞及CD133^-细胞(P<0.05);CD133^+肿瘤细胞的体内成瘤能力明显高于CD133^-细胞及未分选细胞。结论肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群比其他细胞亚群具有较强的增殖,分化和成瘤能力,是具有肝癌干细胞特性的细胞亚群。; 李小青曹辉龙浩李少林; 关键词：肝癌细胞 CD133 免疫磁珠分选

哇巴因抑制结直肠癌多药耐药细胞增殖及侵袭力的研究被引量：2: 2012年; 目的:探讨结直肠癌耐药细胞增殖及侵袭力与Na^+,K^+-ATP酶活性及其β1亚单位和P糖蛋白(P-gp)表达的关系,及哇巴因增加化疗敏感性的可能机制。方法:以人结直肠癌亲本细胞(SW480)和耐奥沙利铂细胞(SW480/OxR)为研究对象,采用MTS法、Transwell小室、生化酶学、实时定量PCR(Real time quantitative,RT-PCR)及流式细胞技术等方法比较SW480细胞与SW480/OxR细胞的增殖及侵袭力、Na^+,K^+-ATP酶活性及其β_1亚单位和P-gp表达的差异,观察哇巴因对SW480/OxR细胞上述指标的影响。结果:与SW480细胞比较,SW480/OxR细胞增殖活力无明显变化(P>0.05),而细胞侵袭力却显著增加,Na^+,K^+-ATP酶活性下降,β_1亚单位表达下调,P-gp表达上调(P均<0.01);哇巴因能显著抑制SW480/OxR细胞增殖活力,减弱其侵袭力,下调SW480/OxR细胞P-gp蛋白表达,上调SW480/OxR细胞β_1亚单位蛋白表达,增加SW480/OxR细胞Na^+,K^+-ATP酶活性(P均<0.01)。结论:Na^+,K^+-ATP酶活性下降可能源于β_1亚单位表达下调,并参与结直肠癌的耐药;哇巴因能部分逆转结直肠癌耐药细胞MDR,可能与增加Na^+,K^+-ATP酶活性及下调P-gp表达有关。; 张贵海张先平文坤明胡敏王轶藏春宝李少林; 关键词：结直肠癌腺苷三磷酸酶 P-糖蛋白化疗抵抗哇巴因

多肽修饰载紫杉醇脂质体靶向A549肺癌干细胞的研究被引量：5: 2014年; 目的制备与肺癌干细胞标志物CD133具有高度亲和力的多肽修饰载紫杉醇脂质体(CD133 specific-binding peptide conjugated paclitaxel loaded liposome,TLP-PTX),考察TLP-PTX与A549肺癌干细胞的结合能力及其对A549肺癌干细胞和肺癌干细胞移植瘤的抑制作用。方法采用薄膜分散法制备TLP-PTX,观察其粒径,电位及紫杉醇的包封率等理化性质。采用细胞摄取实验和肿瘤球穿透实验考察TLP-PTX与A549肺癌干细胞的亲和力。通过MTT实验和肺癌干细胞肿瘤球抑制实验观察TLP-PTX对肺癌干细胞的抑制效果。结果制备得到的TLP-PTX粒径为(115.8±8.3)nm,紫杉醇的包封率为88.5%。经过CD133特异性多肽修饰后能够明显增强肺癌干细胞和肿瘤球对脂质体的摄取能力,A549肺癌干细胞对TLP的摄取效率是LP的2.6倍,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果表明TLP-PTX对A549肺癌干细胞的毒性显著强于LP-PTX和紫杉醇溶液(P<0.05);A549肺癌干细胞肿瘤球抑制实验表明TLP-PTX具有良好的抗肿瘤效果。结论 TLP-PTX能够特异识别A549肺癌干细胞表面的CD133,介导脂质体进入细胞,抑制肺癌干细胞增殖。TLP-PTX是一种有效的A549肺癌干细胞靶向给药系统。; 蔡华荣江跃全; 关键词：紫杉醇脂质体 CD133 肿瘤干细胞

表柔比星联合紫杉醇治疗三阴性乳腺癌的效果分析被引量：26: 2014年; 目的研究分析应用表柔比星联合紫杉醇的新辅助化疗方法治疗三阴性乳腺癌的效果。方法经筛选将昆明医科大学第三附属医院40例三阴性乳腺癌患者做为研究对象,采用应用表柔比星联合紫杉醇的新辅助化疗法进行治疗,分别测定其治疗前后叉头框蛋白A1(fork box protein A1,FOXA1)、乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)蛋白表达水平、肿瘤直径大小。结果治疗后,患者的FOXA1、BRCA1蛋白表达水平降低,与治疗前相比差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,患者肿瘤直径减小,与治疗前相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论采用应用表柔比星联合紫杉醇的新辅助化疗,对三阴性乳腺癌患者进行治疗,治疗后疗效显著,FOXA1、BRCA1水平改善,肿瘤直径减小。; 杨庄青邹天宁刘德权李梅王茂华李少林; 关键词：三阴性乳腺癌新辅助化疗表柔比星紫杉醇

靶向CD133的RNA干扰对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用: 2011年; 目的利用RNA干扰技术下调SMMC-7721肝癌细胞中CD133的表达,观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。方法构建CD133特异性的siRNA真核表达载体,转染SMMC-7721肝癌细胞并筛选出稳定表达siRNA的转染克隆;应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果成功构建表达质粒PGPH1/GFP/Neo-shGAPDH、PGPH1/GFP/Neo-shNC、PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2,并转染SMMC-7721肝癌细胞。筛选后得到稳定的细胞克隆。RT-PCR和Western blot检测显示转染PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2后CD133 mRNA和蛋白表达均受到显著抑制,mRNA抑制率分别为42.98%和63.16%;蛋白表达抑制率分别为49.46%和59.15%。与未转染组和PGPH1/GFP/Neo-shNC组相比,PGPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);PCPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制(P<0.05)。结论靶向CD133的RNA干扰能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞中的CD133表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。; 龙浩曹辉李小青李少林; 关键词：RNA干扰凋亡

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