国家科技重大专项(2012ZX09301003-001-006)
- 作品数：3 被引量：28H指数：2
- 相关作者：张永祥周文霞肖智勇王黎谢剑炜更多>>
- 相关机构：军事医学科学院军事科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 依赖于靶点稳定性的药物亲和反应实验条件探索被引量：4
- 2016年
- 目的对依赖于靶点稳定性的药物亲和反应（DARTS）这一靶标发现新技术进行主要影响因素的探索,获得DARTS更适宜的实验条件。方法采用不同浓度的链霉蛋白酶（酶与蛋白质量比1∶100~1∶10 000）对Jurkat细胞提取的蛋白混合物进行室温酶解,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和考马斯亮蓝染色,观察不同浓度链霉蛋白酶对蛋白混合物酶解的程度,以确定DARTS适宜的酶解浓度范围。在此基础上,以α-酮戊二酸为研究对象,采用DARTS联合SDS-PAGE,考察不同链霉蛋白酶浓度（酶与蛋白质量比为1∶500~1∶5000）和不同酶解时长（5~30 min）对DARTS结果的影响,获得适宜的酶解条件。选用靶标已知的麦考酚酸,采用上述实验所得的最适酶解条件进行DARTS,验证其可行性。结果采用不同浓度链酶蛋白酶对蛋白混合物进行酶解时,浓度为1∶100的条件下蛋白完全被水解,酶浓度为1∶10 000对蛋白混合物无明显水解,酶浓度为1∶500~1∶5000较温和,约可水解蛋白混合物的30%~60%。链霉蛋白酶浓度为1∶1000时,α-酮戊二酸的DARTS中受保护的蛋白条带呈现效果最好;在该酶浓度条件下,适宜的酶解时长为15 min。将以上酶解条件（链霉蛋白酶浓度1∶1000、酶解15 min）运用于麦考酸的DARTS,在4~7×10~4处可见明显的保护条带,Western免疫印迹法验证结果显示,保护条带中含有麦考酚酸靶蛋白IMPDH 1。结论以α-酮戊二酸为研究对象,获得了蛋白混合物DARTS更适宜的实验条件。
- 王黎肖智勇周文霞谢剑炜张永祥
- 4-羟基喹啉-3-甲酰胺衍生物Y27治疗自身免疫性肾炎的实验药理学研究及其对CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的影响
- 2015年
- 目的CD4＋CD25＋调节性T细胞居于外周免疫耐受的中心环节,其数目/功能的失调在系统性红斑狼疮等多种自身免疫性疾病的发病中发挥重要作用.新结构4-羟基喹啉-3-甲酰胺衍生物Y27体外应用显著抑制调节性T细胞的活性,但对T细胞、B细胞及巨噬细胞活化等均无明显影响.本研究旨在研究Y27对两种狼疮性肾炎模型的治疗作用,并探讨其对CD4＋CD25＋调节性T细胞数目和功能的影响.方法采用自发性狼疮模型小鼠MRL/lpr小鼠和诱导性狼疮模型--慢性移植物抗宿主病（chronicgraft-vervus-hostdisease,cGVHD）病理模型,评价Y27对肾炎症状（包括动物死亡率、尿蛋白发生率、尿蛋白水平、血清尿素氮、甘油三酯等）的改善作用,同时观察Y27对小鼠血清免疫学指标（抗双链DNA抗体、IgG1、IgG2a）和组织病理学改变的影响.在此基础上,采用流式细胞术检测小鼠外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的百分比,采用混合淋巴细胞培养检测CD4＋CD25＋调节性T细胞的的抑制功能,并采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清中的细胞因子TGF-β和IL-10水平.结果Y27对MRL/lpr和cGVHD两种实验性自身免疫性肾炎小鼠均有良好的治疗作用,可明显降低肾炎小鼠死亡率,改善尿蛋白、尿素氮、甘油三酯等水平的异常,并减轻其肾脏病理损害程度.Y27对小鼠CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的数目没有明显的影响,但是可明显增强调节性T细胞的抑制功能,并伴有TGF-β和IL-10水平的明显升高.结论Y27对两种实验性自身免疫性肾炎均具有明显的保护作用,这一作用可能与改善CD4＋CD25＋调节性T细胞功能有关.
- 肖智勇陈少辉周文霞张永祥程军平杨日芳恽榴红
- 关键词：MRL/LPR慢性移植物抗宿主病
- 快速起效抗抑郁药研发策略:单胺(5-HT)-非单胺(Glu/GABA)长反馈神经环路候选假说的提出被引量：24
- 2019年
- 抑郁症已成为全球性严重的公共卫生问题,目前临床一线抗抑郁剂大多是基于经典的“单胺假说(策略)”研发的,这些药物普遍存在起效缓慢、有效率不高、损伤认知和致自杀倾向等缺陷,因此,突破经典单胺策略框架,发展快速起效、兼可增强认知和低毒副作用抗抑郁药物是目前全球性重大需求和方向。2019年,S-氯胺酮和别孕烯醇酮(brexanolone)等快速起效抗抑郁药的上市为基于N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)和γ-氨基丁酸A(GABAA)等受体的非单胺策略开辟了全新的前景。目前快速起效抗抑郁药研发总体趋势主要有二:即基于优化多靶标的单胺策略(现代单胺策略)和基于谷氨酸(Glu)-GABA平衡调控的非单胺策略。根据本实验室和国外同行的研究,我们提出单胺-非单胺即“5-羟色胺(5-HT)-Glu/GABA长反馈神经环路”候选假说,认为脑内单胺调控机制(如5-HT神经元,位于中缝核)与非单胺调节机制(Glu/GABA神经元,位于前额皮质等脑区)均是快速起效抗抑郁药机制的一部分,二者共同组成长反馈神经环路,介导前额皮质和海马等效应脑区快速增强的突触可塑性。基于该环路提出5个方面抗抑郁快速起效的候选策略:①通过解除GABA中间神经元对Glu锥体神经元的抑制或直接激活Glu锥体神经元,实现快速兴奋/抑制(E/I)平衡;②借助5-HT1A等受体同时调控5-HT神经元活性和兴奋/抑制平衡(同时增强单胺-非单胺环节);③直接激活哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白复合物1(mTORC1),快速增强脑源性神经营养因子(BDNF)-mTOR通路;④刺激脑内BDNF的快速释放。⑤正向变构调节GABAA受体。希望这些思路和策略为进一步发现快速抗抑郁候选靶标提供有益的借鉴。
- 李云峰
- 关键词：抗抑郁药
