广东省自然科学基金(S2012020010886)
- 作品数：12 被引量：78H指数：7
- 相关作者：林丽珠孙玲玲李元滨陈昌明方若鸣更多>>
- 相关机构：广州中医药大学第一附属医院广州中医药大学中国中医科学院广安门医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 益气除痰方对BALB/c-nu裸小鼠A549肺癌转移的抑制作用及其机制探索被引量：13
- 2016年
- 目的研究益气除痰方对BALB/c-nu裸小鼠A549肺癌肿瘤生长及转移的抑制作用并初步探讨其作用机制。方法构建裸鼠A549肺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组和益气除痰方组(15.5 g·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃给药21 d,期间每3天测体质量和瘤体体积;21 d后脱颈处死小鼠,剥取瘤体测瘤质量,计算抑瘤率;摘取肺组织,固定后观察肺表面转移灶个数,计算肺转移抑制率;采用免疫组化法检测瘤体组织上皮间质转化(EMT)标志物及相关信号蛋白表达。结果与空白对照组比较,益气除痰方组小鼠的瘤体体积和瘤质量明显下降(P<0.05),抑瘤率为27.6%,提示益气除痰方对肿瘤的生长具有一定的抑制作用;益气除痰方组小鼠肺转移结节明显少于对照组(P<0.05),其转移抑制率为39.6%,提示益气除痰方在体内可抑制肺癌的转移;益气除痰方组瘤体组织的上皮标志蛋白E-cadherin较对照组升高(P<0.05),而EMT关键标志蛋白vimentin和fibronectin明显下降(P<0.05),提示益气除痰方可抑制EMT的发生,从而降低肿瘤细胞的侵袭转移能力;益气除痰方组的GRP78、smad2/3、SRC、P38、ERK、JNK的表达及其磷酸化激活程度均较对照组下降(P<0.05),提示益气除痰方抑制肿瘤生长及其抑制EMT的作用可能与其多靶点抑制GRP78、smad2/3、SRC、P38、ERK、JNK等信号蛋白有关。结论益气除痰方可抑制肺癌肿瘤细胞的生长并抑制肺癌的转移,其抑制肿瘤转移的机制与其抑制细胞EMT的发生有关。益气除痰方可能通过多靶点的抑制GRP78、smad2/3、SRC、MAPK(JNK、P38、ERK)等信号通路来实现对EMT的逆转作用。
- 陈昌明孙玲玲林丽珠
- 关键词：A549细胞肺癌转移
- 中药联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌随机对照试验的系统评价被引量：12
- 2015年
- 目的:评价中药联合靶向药物吉非替尼治疗非小细胞肺癌的疗效和安全性。方法:检索Pubmed数据库、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、万方数据库、中文科技期刊数据库,纳入中药联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的随机对照试验为研究对象,根据Cochrane协作网质量评价标准提取资料,并采用Revman 5.20对治疗有效率、1年生存率、生活质量和不良反应等结局指标进行Meta分析。结果:共纳入11篇文献689例非小细胞肺癌患者。11项研究显示中药联合吉非替尼组治疗有效率、5项研究显示中药联合吉非替尼组生活质量改善率、2项研究显示中药联合吉非替尼组患者1年生存率,均高于单药吉非替尼组(P<0.05);9项研究显示中药联合吉非替尼组皮疹发生率、6项研究显示中药联合吉非替尼组腹泻发生率,均低于单药吉非替尼组(P<0.01)。结论:中药联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌在有效率及1年生存率方面较单药吉非替尼存在优势,并能提高患者生活质量,减少不良反应。
- 陈昌明张永慧林丽珠
- 关键词：非小细胞肺癌中药吉非替尼随机对照试验
- P4HB基因真核表达质粒的构建及在人肺腺癌A549细胞中的表达
- 2014年
- 目的构建人P4HB基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法采用RT-PCR法从正常人肝细胞HL7702中扩增P4HB基因片段,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,在脂质体LipofectamineTM 2000介导下转染A549细胞,通过G418加压筛选,建立稳定转染细胞系,通过qPCR和Western blot法检测转染细胞中P4HB基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB经双酶切(BamHⅠ/EcoRⅠ)和测序证实构建正确;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB基因mRNA的水平为空载体转染的细胞和未转染细胞的102倍;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB蛋白的表达量(1.71)较未转染的A549细胞(1.11)明显升高。结论成功构建了P4HB基因真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,转染A549细胞后,P4HB基因在mRNA水平和蛋白水平均出现了较强的表达,表明P4HB基因已稳定转染入A549细胞中。本实验为进一步研究P4HB对人肺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响奠定了基础。
- 孙玲玲林丽珠周京旭
- 关键词：真核细胞A549细胞
- 益气除痰方调控内质网应激反应抑制H1650肺癌生长的研究被引量：7
- 2014年
- 【目的】探讨益气除痰方对肺腺癌H1650细胞的抑瘤作用及机制。【方法】细胞实验采用流式细胞术测定益气除痰方含药血清对H1650细胞凋亡的影响,Western blot法检测益气除痰方含药血清对H1650细胞生长阻滞和DNA损害诱导基因153(CHOP/GADD153)、生长阻滞和DNA损害诱导基因34(GADD34)表达的影响。动物实验通过复制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤模型,随机分为模型组、中药低剂量组(剂量为9.1 g·kg-1·d-1)、中药高剂量组(剂量为27.3 g·kg-1·d-1),测定各组瘤体体积与质量,Western blot法检测各组肺癌组织CHOP/GADD153、GADD34蛋白的表达。【结果】体积分数15%、30%含药血清组H1650细胞的凋亡率分别为(8.14±1.10)%、(18.21±3.07)%(P<0.05),30%含药血清组CHOP/GADD153、GADD34蛋白表达依次为空白对照组的1.46倍、1.53倍。中药低、高剂量组均可显著抑制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤瘤体生长(P<0.05),抑瘤率分别为19.54%、47.03%。中药高、低剂量组CHOP/GADD153蛋白表达分别为模型组的1.59倍、1.44倍(P<0.05),GADD34蛋白表达量分别为模型组的1.98倍、1.49倍(P<0.05)。【结论】益气除痰方可抑制肺腺癌H1650种植瘤瘤体增长,促进H1650肺腺癌细胞凋亡,其机制可能与其能调控CHOP/GADD153、GADD34在内的内质网应激反应相关。
- 孙玲玲方若鸣张景涛林丽珠
- 关键词：药理学肺癌中药疗法内质网应激反应裸鼠
- 中药多靶点逆转肺癌多药耐药机制研究被引量：11
- 2014年
- 通过对近年国内外相关文献的查阅、分析,对中药单体及复方逆转肺癌多药耐药机制的研究情况进行介绍。目前中药单体及复方主要从下调膜转运蛋白、降低肿瘤细胞解毒、修复功能、影响信号转导凋亡调控基因、影响细胞周期、影响肿瘤细胞外基质等方面实现逆转肺癌多药耐药的作用;结果表明中药单体及复方通过多途径、多层次逆转肺癌多药耐药,逆转作用机制广泛,体现了中医药高效、低毒、多靶点的优势。但目前研究大多集中在中药单体成分、体外研究,中药复方及临床研究明显不足,而中医临床辨证用药及疗效的发挥大多是以中药复方为手段实现的。因此,充分运用现代分子生物学技术,着力中药复方逆转剂的研究更具临床应用价值;中医药必将在逆转肿瘤耐药,防治复发转移、延长生存期、提高患者生存质量方面发挥重要作用,为中医药临床治疗肺癌耐药提供科研依据。
- 李元滨林丽珠
- 关键词：中药肺癌多药耐药
- 益气除痰方对耐顺铂肺癌移植瘤生长及下调UPR诱导细胞凋亡的研究被引量：11
- 2014年
- 目的:研究益气除痰方(以下简称中药)对耐顺铂肺癌移植瘤生长及内质网应激相关蛋白的影响。方法:建立耐顺铂肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、中药低、高剂量组;绘制各组移植瘤生长曲线,计算瘤重指数、抑瘤率;HE染色法、透射电镜观察各组瘤组织形态学,流式细胞术测定细胞凋亡率;免疫蛋白印迹法检测GRP78/Bip、PDI、PERK、p-PERK、e IF2α、p-e IF2α蛋白表达。结果:与模型组比较,中药高剂量组能明显抑制肿瘤生长,促进瘤细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),并可明显下调GRP78/Bip、PDI、p-PERK、p-e IF2α蛋白表达(P<0.01);而PERK、e IF2α各组表达无统计学差异。结论:益气除痰方浓度依赖性抑制耐顺铂肺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与其下调GRP78/Bip、PDI、p-PERK、p-e IF2α蛋白表达,弱化内质网未折叠蛋白反应,启动内质网凋亡通路有关。
- 李元滨林丽珠杨建猛方若鸣李佳殷张景涛杨文娟
- 关键词：肺癌移植瘤凋亡
- 益气除痰方对缺氧微环境下A549细胞上皮间质转化及P4HB表达的影响被引量：12
- 2013年
- 目的研究益气除痰方对缺氧条件下A549细胞上皮间质转化的影响并初步探讨其与脯氨酸4-羟化酶β亚基(P4HB)、波形蛋白(Vimentin)表达的相关性。方法将A549细胞分为3组培养:常氧对照组(常规培养),缺氧模型组(加入CoCl2培养模拟缺氧微环境诱导A549细胞上皮间质转化),益气除痰方含药血清组(在CoCl2培养基础上加入益气除痰方含药血清培养)。相差显微镜下观察3组A549细胞形态的变化;RT-PCR检测3组549细胞P4HB、Vimentin mRNA的表达含量。结果相差显微镜下常规培养的A549细胞呈不典型上皮细胞形态,经CoCl2刺激后,大部分细胞形态明显拉长,呈现明显的间质细胞形态。益气除痰方含药血清组与常氧对照组比较间质细胞形态的细胞增多,较缺氧模型组间质细胞形态的细胞明显减少。缺氧模型组A549细胞P4HB、Vimentin mRNA的表达量较常氧对照组明显上调,差异有统计学意义(P<0.01);益气除痰方含药血清组P4HB、Vimentin mRNA的表达量较缺氧模型组明显下调,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论益气除痰方可抑制缺氧诱导的上皮间质转化,可能与其下调P4HB mRNA表达相关。
- 孙玲玲林丽珠
- 关键词：上皮间质转化缺氧微环境
- 人葡萄糖调节蛋白78shRNA真核表达质粒的构建及其稳定转染A549细胞系的建立被引量：1
- 2016年
- 目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 k D,GRP78)shRNA真核表达质粒,并建立其稳定转染A549细胞系。方法根据Gen Bank中登录的人GRP78基因序列(3309)设计3对互补寡聚单链DNA干扰序列(GRP78-mi R-1、GRP78-mi R-2、GRP78-mi R-3)及1对阴性对照,分别插入至载体pc DNA6.2TM-GW/Em GFP,构建shRNA真核表达质粒。在Lipofectamine 3000介导下将各shRNA真核表达质粒分别转染A549细胞,并经Blasticidin S HCl加压筛选稳定的转染细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot法检测A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果各shRNA真核表达质粒经测序鉴定证明均构建正确。稳定转染shRNA真核表达质粒的A549细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与空白对照组比较,A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),阴性对照组无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了人GRP78的shRNA真核表达质粒,并建立了其稳定转染的A549细胞模型,为进一步研究GRP78在肺癌细胞的侵袭和转移中的作用机制奠定了基础。
- 陈昌明孙玲玲林丽珠
- 关键词：真核表达A549细胞
- 岭南肺癌辨治思路探析被引量：10
- 2014年
- 基于岭南人文地理环境的特殊性,本文对岭南肺癌的病因病机、治疗法则、整体观念、用药特点等方面做了初步探讨。岭南的人文地理环境决定了岭南人特殊的体质特点:脾虚痰湿,而成为岭南肺癌发病的前提基础;肺脾交虚兼痰湿内阻是岭南肺癌发病的主要病机,并有蕴久成毒、成瘀的特点;宏观把握的思想是岭南肺癌病机分析、治疗法则的建立及临床药物选择的重要理念;而益气除痰是岭南肺癌中医药干预的主要原则。
- 李元滨林丽珠
- 关键词：肺癌辨治思路岭南
- 林丽珠治疗肺癌用药规律分析被引量：10
- 2015年
- 目的:探讨林丽珠教授治疗肺癌的用药规律。方法:收集在林丽珠教授门诊患者病历资料,运用频数分析方法,统计常用中药的应用频次。结果:收集的肺癌患者病历共61份,累计就诊394次,共用中药143味,用药频次4 977次。常用药物种类为补益药、化痰药、理气药、消肿散结药、祛瘀通络药,其中补益药和化痰药的使用频率分别为18.44%,19.55%,在各类药物中最高。用药频次较高的单味药依次为:茯苓、法半夏、土鳖虫、党参、僵蚕、桔梗、苦杏仁。结论:益气化痰法为林丽珠教授治疗肺癌的基本原则,益气以培土生金为主,化痰以理气化痰、清热化痰为主,辨证施治,疗效显著。
- 孙玲玲陶文慧
- 关键词：肺癌益气化痰法培土生金法理气化痰法清热化痰法
