国家重点基础研究发展计划(2010CB529903)
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 相关作者：陈金中王然薛京伦邬玲仟梁德生更多>>
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- 核糖体基因区打靶载体电转染肝细胞的孵育条件的优化
- 2010年
- 目的:提高核糖体基因区打靶载体的转染效率,优化其电转染肝细胞的孵育条件。方法:在其它电转染参数一致的前提下,设计了6组不同的孵育条件,通过分析转染后细胞活率以及48h后目的基因GFP的表达效率,来比较多组不同的孵育条件对电转染效率的影响。结果:6组条件中,转染前21℃,1min,转染后21℃,1min孵育,得到的转染效率最优,比其它的条件得到的转染效率高50%。结论:孵育条件的优化能提高为核糖体基因区靶向表达载体在体外电转染肝细胞的转染效率。
- 曹善仁刘慕君刘雄昊伍汇慧邬玲仟梁德生
- 关键词：电转染
- Sp100与HIV-1整合酶互作并抑制其介导的病毒整合(英文)
- 2013年
- Sp100是核颗粒ND10的组成蛋白,在哺乳动物细胞中广泛存在.Sp100参与多种细胞生理病理过程,如转录调控、细胞内抗病毒免疫等.利用酵母双杂交系统,我们发现了Sp100的互作蛋白HIV-1整合酶,免疫共沉淀实验进一步证实了Sp100与HIV-1整合酶的互作,细胞内荧光共定位实验也证实了二者在细胞内部分共定位.此外,突变体实验表明,Sp100的C端300～480氨基酸和HIV-1的催化结构域是两个蛋白质的互作区域.利用siRNA降低细胞内Sp100的表达量,可以增加HIV-1整合酶介导的病毒的整合,反之,细胞内过表达Sp100则会降低HIV-1整合酶介导的病毒的整合.这是首次发现Sp100可以和HIV-1整合酶发生相互作用,并进而抑制病毒的整合.我们发现了Sp100作为HIV-1整合酶互作蛋白的新功能,并扩展了细胞防御病毒感染的相关研究.
- 林云李智慧王然李文娟王晶晶季朝能薛京伦陈金中
- 关键词：SP100HIV-1整合酶慢病毒
- 一种新的Bax异构体Baxθ促进细胞凋亡(英文)
- 2014年
- Bcl-2蛋白家族由一类含有特征性的Bcl-2同源结构BH、且主要调控细胞死亡的蛋白组成．Bax是一个含有多个特征性BH结构域、促进凋亡的蛋白．克隆了一个全新的Bax异构体Baxθ其eDNA由外显子1，4，5，6组成．MTC表达谱分析显示Baxθ在人体各组织中广泛且不同强度的表达．将Baxθ ORF插入pEGFP-N1载体，转染HEK293细胞，观察到一个15ku的融合蛋白，提示Baxθ编码的蛋白是与Baxβ共用同一个C端，且使用一个全新的翻译起始位点．尽管Baxθ缺乏BH3结构域，但它在HEK293细胞中过表达时能促进细胞凋亡．截断体实验分析发现Baxθ第43～69位氨基酸残基可能与其促进细胞凋亡的活性有关．BH3结构域可能不是Bel-2蛋白家族诱导细胞凋亡的唯一功能区域．
- 许正新王瑧瑧王然谢林俊薛京伦陈金中
- 关键词：BAX异构体细胞凋亡
- Rep78与PML相互作用并抑制HSV-1的增殖（英文）
- 2015年
- AAV-2Rep78蛋白是涉及到病毒转录、复制和位点特异性整合的多功能蛋白,它同时还介导AAV-2与其协助病毒之间的相互作用.我们通过免疫共沉淀实验证明细胞内PML蛋白与Rep78蛋白存在相互作用,作用区域位于Rep78蛋白C末端545FPCRQCERM553位置,在细胞内短暂表达Rep78会加速PML蛋白的降解.分别使用含有ICP0的病毒株G207和ICP0突变的病毒株7134感染P5-Rep78转基因Vero细胞系,结果表明Rep78的表达会抑制G207的增殖但是对ICP0突变的7134病毒没有明显的抑制作用.结果表明Rep不仅可以介导定点整合,同时也是AAV协助病毒的负调控物.
- 宋玏笙王然卢韦谢林俊王浩薛京伦陈金中
- 关键词：REP蛋白
- 胎膜来源的间充质干细胞促进烧伤愈合的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用。方法:用胰酶消化法分离足月产胎膜细胞,加入Amino-MAXⅡ培养基进行培养。流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD73、CD14、CD45。分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮(ADM),以5×106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率。实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5×106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色。结果:胎膜分离的细胞以长梭形为主,表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29、CD73,极少表达造血细胞标志物CD14、CD45。不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别(P>0.05);相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多(P<0.05);再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富。结论:成功分离、培养了胎膜来源的间充质干细胞。胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩。
- 刘雄昊戴国胜冯劢赵凯吴奔杨俊林胡友金李卓薛金锋邬玲仟梁德生
- 关键词：胎膜间充质干细胞脱细胞异体真皮烧伤治疗皮肤组织工程
- Bim蛋白促凋亡活性必需核心元件的识别与研究(英文)
- 2012年
- 在之前的研究中,我们寻找并克隆到了一个新的Bim异构体Bimβ5,其转录从开放阅读框的第2个ATG起始,并编码一个包含BH3结构域的36个氨基酸的蛋白质.BH3结构域被认为是Bim蛋白及其他Bcl-2家族蛋白发挥作用的充分必要条件,因此有必要探寻其序列中对Bim蛋白功能起决定作用的核心区域.通过设计并构建基于Bimβ5的开放阅读框的一系列截断体,检测不同截断体的促凋亡能力,最终得到了Bim蛋白发挥功能所需的最短保守序列,即包含17个氨基酸的序列QELRRIGDEFNAYYARR,并将其命名为Bim核心元件.此外,通过对只包含Bim核心元件的截断体Bimβ5A3进行计算机分子建模,进一步揭示了Bim核心元件促凋亡的作用机理.Bim核心元件在介导Bak/Bax形成同源或异源二聚体时发挥着重要作用.
- 夏鹏王瑧瑧刘凌峰黄强陈金中
- 关键词：凋亡
- Cdh1介导的Sp100蛋白降解机制初探(英文)
- 2012年
- Cdh1是后期促进因子APC复合物的共激活因子之一,其蛋白在有丝分裂末期和G0/G1期激活APC复合物.Cdh1通过识别特异性的序列,在特定的细胞周期时刻为APC复合物呈递需要被降解的底物.Sp100作为PML-NBs结构重要组成蛋白,参与抗病毒,转录调控,细胞凋亡等重要的细胞活动.在本课题组前期研究工作中,发现了Sp100的蛋白序列上含有一个典型的D-box序列,即RxxL,暗示着Sp100能够被Cdh1识别,可能是APC复合物的底物.在本实验中,证明了Cdh1参与Sp100蛋白泛素化降解的途径,并且这个过程依赖于Sp100蛋白完整的D-box结构.这些发现不仅提供了一种新的内源的Sp100蛋白调控方式,并且为进一步研究Sp100以及其他PML-NBs蛋白的调节打下基础.
- 李可旼王然周彩红薛京伦季朝能陈金中
- 关键词：SP100CDH1降解
- Daxx与ΦBT1相互作用并抑制其重组活性(英文)
- 2013年
- 噬菌体整合酶ΦBT1因其具有可介导转基因位点特异性整合的能力而成为了基因治疗中一种有效的工具,它丰富了转基因载体的选择,并使得多位点特异性整合成为可能.为了能够更加安全有效地利用ΦBT1整合酶作为基因治疗载体,有必要了解ΦBT1整合酶与宿主细胞内蛋白质相互作用的情况.酵母配对实验与免疫共沉淀实验揭示了ΦBT1整合酶中4个氨基酸433RFAL436对整合酶与PML-NBs蛋白Daxx的结合起到了关键作用.通过进一步构建并利用ΦBT1整合酶哺乳动物细胞报告系统,证实过表达Daxx会抑制ΦBT1整合酶在293T细胞中的重组效率.以上结果表明,细胞内的蛋白质可以与ΦBT1整合酶发生相互作用并抑制其重组活性,对于改善ΦBT1整合酶介导的转基因操作以及选择ΦBT1整合酶靶细胞方面具有重要的参考意义.
- 王瑧瑧王然李文娟薛京伦陈金中
- 关键词：DAXX
- 利用尿液细胞诱导建立血友病A患者特异性多潜能干细胞被引量：1
- 2015年
- 目的通过逆转录病毒方法诱导建立两例血友病A（hemophiliaA，HA）患者特异性诱导多潜能干细胞（induciblepluripotentstemceils，iPSCs）并定向分化为内皮细胞，为HA的发病机制以及细胞和基因治疗研究提供理想的细胞来源。方法收集培养血友病A患者尿液细胞，使用携带Oct4、Sox2、c—Myc和Klf4等4种因子的逆转录病毒感染尿液细胞，诱导出HA患者特异性的诱导多潜能干细胞；通过形态学、干细胞多潜能表面标志物免疫荧光检测，成畸胎瘤实验鉴定iPSCs；iPSCs与0P9细胞共培养分化为内皮细胞。结果成功建立了HA患者特异性iPSCs，其形态与人胚胎干细胞相似，细胞表面标志物免疫荧光检测均符合干细胞基因表达特征，成畸胎瘤实验显示其可在体内随机分化为三胚层组织；将iPSCs定向分化为内皮细胞，细胞表面标志物CD144、CD31、vWF免疫荧光均为阳性。结论尿液细胞可以重编程得到血友病A患者特异性iPSCs，并能定向分化为内皮细胞，为血友病A研究提供细胞模型，也为后续基因修正后的细胞治疗提供了自体化的细胞来源。
- 胡志青胡旭昀庞佳伦王晓琳林彭思远李卓吴涌邬玲仟梁德生
- 关键词：血友病A内皮细胞
