江苏省自然科学基金(BK2010336)
- 作品数：12 被引量：18H指数：3
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- miR-200c对结肠癌SW620细胞5-FU化学敏感性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨结肠癌SW620细胞株中微小核糖核酸-200c(miR-200c)的表达对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的影响。方法实验分为miR-200c类似物转染SW620细胞株组(A组)、miR-200c类似物阴性对照转染组(B组)、miR-200c抑制物转染SW620细胞株组(C组)、miR-200c抑制物阴性对照转染组(D组)和空白对照组(E组)。采用RT-PCR、MTS及流式细胞术分别检测转染后细胞中miR-200c的表达、5-FU半数抑制浓度(IC50)及细胞凋亡;Western blot检测转染后细胞中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)的表达。结果与B组相比,A组转染24h后miR-200c的表达水平提高了(35.94±0.39)倍(P<0.05),5-FU的IC50提高[(1512.67±0.48)μg/ml vs.(926±0.70)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡的作用降低[(5.01±0.25)%vs.(8.07±0.16)%](P<0.05)。与D组相比,C组miR-200c的表达水平降低了(19.61±0.86)倍(P<0.05),5-FU的IC50降低[(740±0.60)μg/ml vs.(941±0.59)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡作用提高[(12.23±0.60)%vs.(8.22±0.18)%](P<0.05)。转染48h后,A组p-Akt的表达较B组升高(P<0.05),C组p-Akt表达较D组降低(P<0.05)。结论在结肠癌SW620细胞中,降低miR-200c的表达可提高结肠癌细胞对5-FU的化学敏感性,可能与miR-200c调控Akt的磷酸化有关。
- 孟凡鲁吴莺袁英雪贺明洁武健周红王文兵
- 关键词：结肠癌SW620细胞5-氟尿嘧啶化学敏感性
- miR-200c通过wnt/β-catenin信号途径抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和转移被引量：5
- 2014年
- 目的研究miR-200c通过wnt/β-catenin信号通路对结肠癌SW480细胞侵袭、迁移的影响。方法将SW480细胞分为类似物转染(A)组、抑制物转染(B)组、类似物阴性对照(C)组、抑制物阴性对照组(D)和空白(E)组。荧光定量PCR检测12h和24h转染效率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测转染后β-catenin和E-cadherin的表达。结果细胞划痕实验显示,A组12h和24h后伤痕宽度分别为(589.61±17.28)μm和(523.83±57.13)μm,C组分别为(465.33±16.60)μm和(393.99±7.53)μm,A组高于C组(P<0.05)。B组12h和24h后分别为(430.93±20.76)μm和(221.38±44.37)μm,D组分别为(485.64±16.65)μm和(441.22±22.40)μm,B组低于D组(P<0.05)。Transwell实验显示,与C组和D组相比,A组24h和48h通过8μm孔径的细胞数明显减少,B组明显增多(P<0.05)。A组β-catenin和E-cadherin的表达均升高,B组各蛋白表达下降(P<0.05)。结论 miR-200c可能通过wnt/β-catenin信号通路抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移。
- 武健吴莺孟凡鲁贺明洁袁英雪周红王文兵
- 关键词：MIR-200CWNTΒ-CATENIN信号通路结肠癌SW480细胞
- TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移
- 2013年
- 目的探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制。方法Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化;钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,1μmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达;MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化。结果Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值;EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P<0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用。结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移。
- 吴莺王静余小燕胡丽超武标周红
- 关键词：蛋白酶激活受体2钙信号细胞外信号调节激酶1
- 5-氮杂-2-脱氧胞苷提高结肠癌SW620细胞株对5-FU的化学敏感性
- 2013年
- 目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)可能增强结肠癌SW620细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的作用。方法分别用不含药物组(A组)、5-aza-CdR(B组)、5-FU(C组)以及5-aza-CdR联合5-FU(D组)作用人结肠癌SW620细胞株后,光镜下观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞的生长情况和流式细胞术检测细胞凋亡。结果 A、B、C、D组细胞存活率分别为100%、(65.85±0.95)%、(45.14±1.44)%、(30.18±0.89)%;B、C、D组细胞存活率均明显低于A组(P<0.05),D组低于B、C组(P<0.05)。A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(4.50±0.61)%、(16.80±0.57)%、(12.66±0.43)%、(42.07±0.85)%;与A组比较,B、C、D组引起细胞凋亡增加(P<0.05);与B组、C组比较,D组促进细胞凋亡作用更明显(P<0.05)。结论 5-aza-CdR在体外提高了结肠癌SW620细胞对5-FU的化学敏感性。
- 余小燕吴莺蒋双红王静徐岷周红
- 关键词：5-氮杂-2-脱氧胞苷结肠癌SW620细胞5-氟尿嘧啶
- 因子Ⅶa依赖组织因子激活PAR2/ERK/NF-κB抑制结肠癌SW620细胞caspase-3表达被引量：5
- 2012年
- 目的探讨凝血因子Ⅶa对结肠癌SW620细胞增殖能力以及表达凋亡分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的影响及其作用机制。方法用一定剂量的蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等刺激物处理SW620细胞,观察细胞生长情况;western blot和定量PCR分别检测细胞表达caspase-3蛋白质及mRNA水平;利用相关抗体、拮抗剂和抑制剂等观察因子Ⅶa对caspase-3表达的效应变化。结果 PAR2-AP(100μmol/L)及因子Ⅶa(10 nmol/L)能够明显促进SW620细胞的生长,减少细胞caspase-3蛋白质和mRNA的表达;抗组织因子(TF)抗体(а-TF)、PAR2拮抗剂(PAR2-аAP)、ERK1/2抑制剂U0126以及NF-κB抑制剂PDTC均能逆转因子Ⅶa对SW620细胞caspase-3表达的抑制效应,而p38MAPK抑制剂SB203580对caspase-3的表达无明显的干预作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经ERK1/2和NF-κB信号通路,抑制SW620细胞caspase-3表达,从而促进细胞的增殖与生长。
- 张先梅周红陈东东解鸿翔胡丽超武标吴莺
- 关键词：蛋白酶激活受体2
- EGCG对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制。方法用EGCG、因子Ⅶa等处理SW620细胞,应用流式细胞术、Transwell法分别检测细胞增殖周期及迁移能力;Western blotting检测细胞NF-κB抑制蛋白(IκB-α)、核NF-κB(p65/RelA)的蛋白水平变化。结果 EGCG(100 mg/L)能干预因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用;EGCG能抑制因子Ⅶa对IκB-α表达的下调作用及对核NF-κB(p65/RelA)表达的促进作用。结论 EGCG可能通过干预信号分子IκB-α和NF-κB(p65/RelA)的表达和调节作用,抑制因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用。
- 周芳周红吴莺郭东琳许国莹文海平
- 关键词：结肠肿瘤EGCG增殖迁移
- EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用
- 2011年
- 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用。方法用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法t、ranswell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达。结果与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TF mRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05)。结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用。
- 周芳周红吴莺王婷郭东琳许国莹文海平张先梅
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯蛋白酶激活受体2
- 核因子κB在凝血因子Ⅶa促进结肠癌SW620细胞增殖迁移中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨核因子KB（NF—κB）在促进结肠癌SW620细胞增殖迁移过程中的作用及其可能的机制。方法以凝血因子VIIa、NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）等处理结肠癌细胞株SW620，采用Westernblot法检测细胞核NF—κB（p65）、细胞浆NF-κB抑制蛋白（IκB-α）和凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶7（caspase-7）的蛋白表达变化；采用流式细胞术检测SW620细胞的细胞周期变化；采用Transwell法测定SW620细胞的迁移能力；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测白细胞介素8（IL-8）和组织因子（TF）mRNA的表达水平。结果凝血因子Ⅶa能够显著下调细胞浆中IκB-α的表达水平，并使细胞核内NF—κB的表达水平升高，单克隆抗TF和抗蛋白酶激活受体2（PAR2）抗体能够抑制凝血因子Ⅶa的这一作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞中TF、IL-8mRNA表达的促进作用和对caspase-7蛋白表达的下调作用。结论凝血因子Ⅶa与细胞表面TF结合形成TF／Ⅶa复合物，活化受体PAR2，经NF—κB通路上调IL-8、下调caspase-7的表达，促进SW620细胞的增殖与迁移。TF／Ⅶa／／PAR2／NF—κB通路还可进一步上调TF的表达，从而形成TF／Ⅶa／PAR2／NF—κB／TF正反馈通路。
- 郭东琳周红吴莺周芳张先梅许国莹文海平
- 关键词：结肠肿瘤蛋白酶激活受体2核因子ΚB
- 镇江地区胃肠病患者幽门螺杆菌vacA基因i、d区分型特点及临床关联被引量：1
- 2013年
- 目的:研究镇江地区胃肠病患者感染的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的主要毒力因子vacA基因i、d型的分布特点、cagA基因状态,以及与临床结果的相关性。方法:选取快速尿素酶试验和(或)组织学染色H.pylori阳性患者的胃窦活检黏膜,PCR法检测H.pylori cagA基因状态、vacA基因的s、m、i、d区分型。结果:179例H.pylori患者,2例为混合感染(1.1%,2/179),剔除后,i1、i2亚型分别为96.6%(171/177)、1.1%(2/177);d1、d2亚型分别为98.9%(175/177)、1.1%(2/177);cagA阳性率为97.7%(173/177);s1/m2/i1/d1型为优势基因型(56.5%,100/177),s1/m1/i1/d1型次之(38.4%,68/177)。s2/m2型与i2、d2型相关(P<0.05),s1、i1、s1/i1型及cagA阳性均与d1型相关(P均<0.05)。比较vacA基因的s、m、i、d分型及cagA基因状态在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌中的分布,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:镇江胃肠病患者感染的H.pylori菌株,96.6%表现为i1亚型、98.9%为d1亚型,vacA s1/m2/i1/d1/cagA(+)为优势基因型;幽门螺杆菌基因型之间存在关联;vacA基因型、cagA基因状态与胃肠疾病的分布无相关性。
- 蒋双红吴莺贺明洁余小燕王静蒋晓猛周红
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA基因
- PKCα参与凝血因子Ⅶa/TF激活PAR2促进SW620细胞迁移被引量：1
- 2012年
- 目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶激活受体2(PAR2),从而促进SW620细胞迁移以及可能的作用机制。方法用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa、PKC激动剂佛波醇酯(PMA)等刺激物处理SW620细胞,并用抑制抗体(抗TF、抗PAR2)、同型对照抗体(mopc-21)进行抑制试验。用western blot检测其PKCα与p-PKCα的表达,免疫荧光试验观察PKCα的分布情况;分别用PMA(100 nmol/L)、Ⅶa(10 nmol/L)及PKCα抑制剂(safingol,10μmol/L)处理SW620细胞,Transwell试验观察细胞迁移情况,定量PCR法检测其MMP-9 mRNA表达水平。结果PMA(100 nmol/L),因子Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2-AP(100μmol/L)能明显促进PKCα的磷酸化(F=289.9,P<0.05),而对PKCα的表达没有显著性影响(F=2.02,P>0.05);免疫荧光实验结果表明,PKCα自胞浆向核膜与核内发生转位;加入抗TF及抗PAR2抗体能够显著抑制因子Ⅶa对PKCα的激活,而同型对照抗体(mopc-21)没有此作用;Transwell试验与定量PCR结果表明,PKCα抑制剂明显阻断因子Ⅶa对细胞迁移及MMP-9表达的促进作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经信号分子PKCα介导,上调SW620细胞MMP-9表达,促进细胞的迁移。
- 武标周红张先梅胡丽超吴莺
- 关键词：蛋白激酶CΑ蛋白酶激活受体2细胞迁移
