广东省自然科学基金(7001196)
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
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- 相关机构：南方医科大学广东省人民医院中山大学附属第二医院更多>>
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- 诱导性多能干细胞
- 2008年
- 佘妙容李劲高贺艳杰
- 关键词：诱导性多能干细胞细胞治疗
- 冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡及其可能机制被引量：12
- 2010年
- 目的:探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的致凋亡作用及其可能的机制。方法:不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)作用于ARH-77细胞,MTT法检测ARH-77细胞的增殖,相差显微镜和Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测ARH-77细胞的早期凋亡及线粒体膜电位(Δψm)的变化,caspase8凋亡试剂盒检测ARH-77细胞caspase8的活化。结果:Ori对ARH-77细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。10μmol/LOri作用于ARH-77细胞24h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞术结果显示,经不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)处理后,细胞早期凋亡率分别为(15.07±0.78)%、(21.00±1.49)%和(27.45±2.47)%,均高于对照组的(5.27±1.46)%(P<0.01)。不同浓度Ori(2.5、5、10μmol/L)处理后,反映Δψm的绿色荧光细胞百分率分别为(26.80±0.75)%、(36.81±2.27)%和(49.48±1.10)%,均高于对照组的(16.96±0.50)%(P<0.01),提示ARH-77细胞凋亡有显著增加。同时,Ori处理可上调ARH-77细胞caspase8的活性(P<0.01)。结论:冬凌草甲素能明显诱导多发性骨髓瘤ARH-77细胞的凋亡,其机制可能与激活内、外源凋亡通路有关。
- 曲佳郭坤元吴秉毅宋朝阳佘妙容贺艳杰
- 关键词：冬凌草甲素多发性骨髓瘤凋亡CASPASE线粒体膜电位
- 热疗联合柔红霉素对CD34^＋CD38^-白血病细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察热疗联合柔红霉素(DNR)对CD34+CD38-急性髓白血病KG1a细胞增殖的抑制作用和对其凋亡的影响。方法免疫磁珠分离KG1a细胞中的CD34+CD38-细胞,以DNR作用48h后抑制50%CD34+CD38-细胞生长的药物浓度(IC50)作为后续实验的工作浓度。将CD34+CD38-细胞分为对照组、热疗组(40℃、42℃)、化疗组和热化疗组(40℃、42℃)。热疗、热化疗组在恒温水浴箱(40℃或42℃)中加热60min,化疗组、热化疗组以IC50浓度的DNR处理48h。MTT法检测DNR对CD34+CD38-KG1a细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及42℃条件下细胞内DNR平均荧光强度的变化;甲基纤维素培养体系分析42℃条件下细胞的克隆形成能力。结果KG1a细胞中分离出的CD34+CD38-细胞纯度达95%以上,DNR的IC50为0.40μg/ml。热疗组、化疗组、热化疗组CD34+CD38-细胞增殖均明显受抑,且抑制作用随温度升高而增强(P<0.05)。热疗组、化疗组及热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著增加,且随温度升高凋亡率增加(P<0.05),热化疗组较化疗组及相同温度热疗组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。42℃热化疗组细胞内的DNR荧光强度(6.74±0.58)明显高于对照组(0.26±0.05)及化疗组(2.08±0.14,P<0.05)。42℃热疗组、化疗组、42℃热化疗组细胞的集落形成率明显低于对照组,且42℃热化疗组明显低于42℃热疗组和化疗组(P<0.05)。结论热疗能增强DNR抑制CD34+CD38-KG1a细胞增殖的作用,使细胞凋亡增多。
- 王国征郭坤元孙明佘妙容胡亮杉李章球
- 关键词：柔红霉素肿瘤干细胞
- EGCG通过下调Bcl-2诱导KG1A白血病细胞凋亡被引量：3
- 2008年
- 目的研究EGCG对KG1A白血病细胞的作用,探讨其作用机制。方法使用人的白血病细胞株KG1A细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用annexin v染料标记细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡。RT-PCR检测KG1A细胞Bcl-2家族mRNA的表达。结果EGCG引起KG1A细胞活性的下降。EGCG诱导KG1A细胞凋亡,且呈时间依赖性。EGCG诱导凋亡与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。结论EGCG可以通过下调Bcl-2和BCl-xl诱导KG1A细胞凋亡。这些结果有助于提供新的有效联合方案,尤其是针对复发难治白血病的治疗。
- 佘妙容郭坤元陈锡林牛新清
- 关键词：白血病凋亡EGCGBCL-2
- 氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡被引量：7
- 2008年
- 目的研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变。方法使用人的白血病细胞株HL-60细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡。细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定。应用化学发光法测定超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathi-one,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量。免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达。结果手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性。手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD。手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质。手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡。结论细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用。手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡。
- 佘妙容郭坤元牛新清卢晓珣涂三芳
- 关键词：白血病凋亡手霉素线粒体超氧歧化酶
- 手霉素通过反应性氧基诱导甲状腺未分化癌KAT-4细胞凋亡
- 2008年
- 目的研究手霉素对甲状腺未分化癌KAT-4细胞的作用,探讨其作用机制。方法使用人的甲状腺未分化癌KAT-4细胞,MTT细胞毒性测定评价手霉素对KAT-4细胞的作用,使用annexin v和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡;细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定;采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)。结果手霉素降低KAT-4细胞活性,且呈剂量依赖性。手霉素诱导KAT-4细胞凋亡和反应性氧基(reactive oxygen species,ROS)产生包括NO和超氧阴离子增加和GSH降低。手霉素诱导细胞凋亡与ROS的增加有关,N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)可抑制ROS产生,保护KAT-4细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡。结论细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用。手霉素通过增加ROS产生诱导甲状腺癌细胞凋亡。
- 李劲高佘妙容黄湖辉宛霞
- 关键词：甲状腺未分化癌手霉素凋亡
- Bcl-2家族在冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的探讨部分Bcl-2家族成员基因表达变化在冬凌草甲素(Ori)诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT法和流式细胞术检测Ori作用后ARH-77细胞的活力和凋亡情况,相差显微镜观察细胞形态改变,RT-PCR法检测Bcl-2家族成员的基因表达变化。结果Ori能明显抑制ARH-77细胞的生长,且呈时间—剂量依赖性。10μmol/L Ori作用于ARH-77细胞24 h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡率随Ori作用时间的延长而逐渐增加(P<0.05)。Ori诱导ARH-77细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl、Bax mRNA水平改变有关(P<0.05)。结论Ori能通过调节ARH-77细胞Bcl-2家族成员的表达而诱导其发生凋亡。
- 曲佳郭坤元李玉华邓兰王志红佘妙容
- 关键词：冬凌草甲素多发性骨髓瘤细胞凋亡BAX
- 去甲基化KG1a细胞DNA对人外周血单个核细胞杀伤活性和T细胞受体VαβT细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCRVαβ)谱系的表达和克隆情况。方法:去甲基化试剂盒对KG1a细胞去甲基化处理,并提取其DNA。应用乳酸脱氢酶释放法检测DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性,应用RT-PCR方法扩增各组外周血T细胞的32个TCRVα亚家族和24个TCRVβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果:基因扫描显示去甲基化的KG1a细胞DNA可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,且在效靶比为20∶1时去甲基化的KG1a细胞DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去甲基化的KG1a细胞DNA可提高PBMC杀伤活性,且诱导T细胞呈克隆性增殖。
- 贾振薇郭坤元黄迎曲佳佘秒容
- 关键词：T细胞去甲基化基因扫描T细胞克隆
- 2-methoxyestradiol通过反应性氧基对U937白血病细胞的凋亡诱导作用
- 2008年
- 目的:探讨2-ME诱导U937白血病细胞凋亡的作用和机制。方法:实验分为白血病细胞株U937细胞含有等量DMSO RPMI 1640培养液的对照组、2-ME处理组、NAC处理组和2-ME+NAC处理组。MTT测定评价对U937细胞毒作用;采用Annexin V和NO染料标记细胞,流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡;DHE测定细胞内超氧阴离子。结果:不同浓度2-ME(0.25、0.50、1.00、和2.00μmol.L-1)处理U937细胞48 h后,U937细胞活性均较对照组明显减少(P<0.05),随着2-ME浓度的增高,U937细胞的生存率逐渐减低,呈剂量依赖性。2-ME(2.00μmol.L-1)处理U937细胞8、12、18和24 h后的细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05),随着处理时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高;而2-ME处理U937细胞1、3及6 h后的细胞凋亡率与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。2-ME(2.00μmol.L-1)处理U937细胞产生NO荧光值显著增加,超氧阴离子为1.21±0.02,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。2-ME处理U937细胞1 h时,细胞NO阳性率是46.74%±0.15%,与对照组(0.52%±0.21%)比较差异具有显著性(P<0.05);而细胞凋亡率(1.28%±0.07%)与对照组(1.59%±0.12%)比较差异无显著性(P>0.05);2-ME处理U937细胞3 h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),提示U937细胞NO的产生早于细胞凋亡。用NAC抑制反应性氧基(ROS)可保护U937细胞逃避2-ME的细胞毒作用和避免2-ME诱导的细胞凋亡。2-ME(2.00μmol.L-1)处理组U937细胞活性和细胞凋亡率分别是0.47%±0.02%和13.87%±0.69%,与对照组和2-ME+NAC处理组(0.82%±0.08%及2.98%±0.19%)比较差异均具有显著性(P<0.05)。结论:2-ME通过ROS诱导U937细胞凋亡,提示产生ROS的物质可能增强抗白血病作用。
- 佘妙容郭坤元牛新清卢晓涂三芳
- 关键词：白血病凋亡一氧化氮
- 苦参碱对白血病KG1a细胞增殖及凋亡的影响被引量：6
- 2008年
- 目的观察苦参碱对人急性髓白血病细胞株KG1a体外增殖抑制和凋亡的影响。方法CCK-8法和台盼蓝拒染色法检测苦参碱对KG1a细胞增殖抑制作用和细胞存活率;甲基纤维素培养体系分析细胞克隆形成能力;流式细胞仪法检测作用前后KG1a细胞的凋亡率及细胞周期变化。结果苦参碱能够抑制KG1a细胞增殖,随着药物浓度增大和作用时间延长,抑制率逐渐升高、存活率逐渐下降;作用后细胞克隆形成率明显低于对照组(P<0.05);各浓度药物组均能诱导KG1a细胞凋亡;苦参碱作用后细胞大部分被阻于G0/G1期。结论苦参碱能抑制KG1a细胞的增殖,改变其周期,诱导其凋亡。
- 王国征孙明郭坤元佘妙容周健李章球周雪云
- 关键词：苦参碱增殖抑制凋亡
