浙江省“钱江人才计划”(2012R10081)
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 相关作者：罗永能高孟高丽美朱赟唐彩华更多>>
- 相关机构：浙江省医学科学院浙江普康生物技术股份有限公司更多>>
- 发文基金：浙江省“钱江人才计划”浙江省重大科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肠道病毒71型H3-TY株衣壳蛋白VP1~VP3的优势线性B细胞抗原决定簇预测与确定被引量：6
- 2014年
- 目的确定肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点。方法用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性,预测出包含潜在线性B细胞抗原决定簇位点的区段,并计算各区段上述指数的加权平均值。人工合成相应的多肽片段,用多肽-酶联免疫吸附检测（多肽-ELISA）检测其与明确感染EV71的临床病患儿童血清的阳性反应与否和程度。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求,共预测出15个可能的线性B细胞抗原决定簇位点。相应的人工合成多肽与感染EV71的临床病患儿童血清均呈现为阳性反应但程度不同,其中免疫显性最高的肽段为包含VP1氨基酸残基208-222位的VP1D。结论成功预测并用实验证实了EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点,有助于揭示EV71衣壳蛋白抗原特异性的分子基础。
- 高丽美高孟王静华唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒71型
- 肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证被引量：2
- 2013年
- 目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 （rVP1）经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体（单抗）和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义（t=2.646,P＜0.01）.结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.
- 朱赟李剑波高孟唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒感染衣壳蛋白原核表达
- 肠道病毒71型衣壳蛋白的抗原表位及其单克隆抗体被引量：3
- 2017年
- 肠道病毒71（EV71）是手足口病的主要致病原之一,可引发大部分重症病例和死亡病例,其衣壳蛋白VP1～VP4作为免疫原包含了能够诱导体液免疫（产生抗体）和细胞免疫的抗原表位.迄今为止已有多个免疫显性的线性或构象性B细胞抗原表位被确定,与之相关的单克隆抗体在EV71感染的早期诊断和单克隆抗体治疗方面也已显示一定程度的应用前景,同时也有少数T细胞抗原表位被确定.本文对上述研究情况进行综述.
- 蔡静罗永能
- 关键词：肠道病毒属抗原表位B细胞单克隆抗体
- 大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用被引量：6
- 2013年
- 目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗），并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH，腹腔内注射免疫大鼠数次后，取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6，体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体，用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度，并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系，分别有6株属于IgGl亚型，2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化，其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl，用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量，用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒，而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗，可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法，成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。
- 张锋高丽美朱赟高孟潘海桦陈卓吴海光罗永能
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体ELISA免疫荧光检测
