湖北省自然科学基金(2003ABA147)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
- 相关作者：胡义珍曹阳熊新春陈博张海江更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济大学三峡大学第一临床医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组织型谷氨酰胺转移酶反义寡核苷酸对体外培养牛眼小梁细胞纤维连接蛋白、层粘连蛋白及Ⅳ胶原表达的影响被引量：1
- 2006年
- 目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissuetransglutaminase,tTG)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASODN)对牛眼小梁细胞(bovinetrabecularmeshworkcells,BTMC)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ胶原(collagen-Ⅳ,CA-Ⅳ)表达的影响。方法在脂质体介导下,将0.3μmol·L-1的tTG-ASODN转染BTMC,无血清DMEM培养基为空白对照组。24h后,制作细胞爬片,利用免疫组化SP染色法检测tTG-ASODN对BTMC表达FN、LN、CA-Ⅳ的影响。结果空白对照组和A-SODN转染组FN、LN和CA-Ⅳ免疫组化染色均为阳性。通过对细胞爬片进行图像统计学分析,与空白对照组相比,ASODN1和ASODN2组中FN、LN、CA-Ⅳ的表达均明显下降(P<0.01),而ASODN1和ASODN22组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论进一步证明了tTG可以促进BTMC表达细胞外基质。通过tTG-ASODN抑制BTMC表达FN、LN、CA-Ⅳ,从而有望从基因水平上防治原发性开角型青光眼。
- 陈博胡义珍曹阳
- 关键词：小梁细胞谷氨酰胺转移酶反义寡核苷酸
- tTG AS-ODN抑制培养的牛眼小梁细胞表达纤维连接蛋白的研究
- 2007年
- 目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)AS-ODN(AS-ODN)对体外培养牛眼小梁细胞(BTMCs)纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法设空白对照组、tTGAS-ODN1组和tTGAS-ODN2组。在脂质体介导下,将0.3μmol/L的tTGAS-ODN转染BTMCs,利用免疫组织化学SP染色法检测BTMCs表达FN情况,采用半定量RT-PCR和Westernblot方法检测表达的变化。结果免疫组织化学结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组灰度均值与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.91)。RT-PCR结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组FN/β-actin条带中心密度比与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.73)。Westernblot结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组FN/β-actin灰度比值与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.92)。结论tTG可以促进BTMCs表达ECM。通过tTGAS-ODN抑制BTMCs表达FN等细胞外基质(ECM),有望从基因水平上防治原发性开角型青光眼(POAG)。
- 陈博胡义珍曹阳
- 关键词：原发性开角型青光眼小梁细胞谷氨酰胺转移酶纤维连接蛋白
- 组织型谷氨酰胺转移酶在开角型青光眼患者房角组织的表达
- 2007年
- 目的探讨组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglu-taminase,tTG)在原发性开角型青光眼患者房角组织中的表达情况及其与闭角型青光眼患者和正常人眼房角组织中表达情况的比较。方法术中取青光眼患者房角组织,采用免疫组织化学染色方法观察开角型、闭角型青光眼患者及正常人房角组织内tTG的表达情况,用RT-PCR方法分析组织内tTG的表达水平。结果免疫组织化学及RT-PCR结果均显示,正常组与闭角型青光眼组房角tTG的表达差异并无显著性(分别为0.180±0.032,0.212±0.019,P>0.05),而正常组与开角型青光眼组、闭角型青光眼组与开角型青光眼组房角组织tTG的表达差异有极显著性(分别为0.180±0.032,0.325±0.052;0.212±0.019,0.325±0.052,P<0.01)。结论开角型青光眼房角组织tTG的表达增加,tTG的增加可能与开角型青光眼的发病有关。
- 陈慧胡义珍
- 关键词：组织型谷氨酰胺转移酶开角型青光眼小梁网
- 组织型谷氨酰胺转移酶在牛眼小梁细胞中的表达及意义被引量：3
- 2005年
- 胡义珍张海江熊新春曹阳
- 关键词：谷氨酰胺转移酶牛眼小梁细胞组织型原发开角型青光眼POAG
- tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达△被引量：7
- 2006年
- 目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性。方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化。结果ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695±0.0009、1.0662±0.0007,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.0185±0.0024、1.0167±0.0012;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异(P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN22组间无显著性差异(P>0.05)。结论tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用。
- 胡义珍张海江熊新春曹阳席祖莲
- 关键词：组织型谷氨酰胺转移酶反义寡核苷酸小梁细胞开角型青光眼
- tTG反义寡核苷酸对小梁细胞tTG表达的抑制作用
- 2007年
- 目的通过计算机程序模拟组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)基因的mRNA二级结构,优化硫代反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,A-SODN)药物设计,为有效抑制小梁细胞表达tTG提供新的途径。方法根据牛tTG mRNA的二级结构,选择环与茎结合区(280～300bp)和茎区(2720～2740bp)作为反义药物作用的靶点,分别合成ASODN1、ASODN2,用脂质体包埋后转染牛眼小梁细胞。通过半定量RT-PCR法检测转染后tTG mRNA表达的变化来评价tTG-ASODN的生物学效应。结果ASODN1、ASODN2对tTG mRNA的表达均有抑制作用,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.05),且tTG-A-SODN1抑制作用明显强于tTG-ASODN2(P<0.05)。结论选择环与茎连接的部位作为反义作用的靶点,其反义作用明显强于茎区。从机制上讲,可能是因为环与茎连接的部位的形成需要吸收能量,是整个tTG mRNA序列中最不稳定的区域,ASODN容易接近而发挥作用,提示通过tTG mRNA二级结构的模拟而选择ASODN是设计反义药物的新途径。
- 张海江胡义珍熊新春
- 关键词：组织型谷氨酰胺转移酶反义药物小梁细胞
- 增强型绿色荧光蛋白在体外培养的牛眼小梁细胞中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescence protein,EGFP)在体外培养的牛眼小梁细胞(bovinetrabecular meshwork cells,BTMCs)中的表达。方法将含有pEGFP-C1的菌株复苏,抽提pEGFP-C1并进行鉴定。选用阳离子脂质体Lipofectamine包埋pEGFP-C1转染BTMCs,以荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达情况。结果pEGFP-C1能有效地转染BTMCs,BTMCs可以很好地表达EGFP。结论外源性的EGFP能够在体外培养的BTMCs中有效地复制、转录和翻译。这种标记方法有利于从基因水平研究牛眼小梁细胞。
- 陈博胡义珍曹阳
- 关键词：绿色荧光蛋白质类小梁细胞转染
