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广西鹅γ干扰素基因的克隆与序列分析被引量：1: 2010年; 为进一步研究鹅干扰素(IFN)的分子生物学特性及抗病毒作用机理,提取经刀豆素(ConA)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增获得鹅IFN-γ基因,将其克隆至pMD18-T载体并进行序列测定分析。结果表明,克隆获得的广西鹅IFN-γ基因与GenBank上已公布的鹅IFN-γ基因核苷酸序列的同源性均高于99.2%、氨基酸同源性均高于98.2%;与其他动物的IFN-γ基因核苷酸及氨基酸序列比较,亲缘关系越远,同源性越低。; 胡丽萍胡晓静付薇徐贤坤何丹刘棋熊毅; 关键词：Γ干扰素克隆

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析被引量：4: 2009年; [目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因，并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物，对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1716和1662bp，与GPV—SFO2株的同源性均在97．3％左右，与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80．3％～97．5％，与Miyadera株的同源性仅84．8％。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）强毒株特征相符，属于APMV-1基因Ⅶ型。; 易春华潘杰付薇颜健华徐贤坤熊毅; 关键词：鹅副粘病毒 HN蛋白基因 F蛋白基因克隆

Cloning and Sequence Analysis of HN and F Protein Genes from a Strain of Goose Paramyxovirus被引量：2: 2009年; [ Objective] The study was to clone HN and F genes from GX1 strain of goose paramyxovirus and analyze their sequences. [ Method] According to the full nucleotide sequence of GPV-SF02 strain of goose paramyxovirus, two pairs of pdmers were designed to amplify the HN and F genes from GX1 strain of goose paramyxovirus isolated from diseased goose in Guangxi Zhuang Autonomous Region; the amplified products were ligated into pMD18-T vector and sequenced. [ Result ] HN and F genes of this strain tested were 1 716 and 1 662 bp in full nucleotide length, respectively; both showed the homologues of about 97.3% with GPV- SF02 strain, of 80.3% -97.5% with strains LaSota, F48E9 and JS, of just 84.8% with Miyadera strain. [ Conclusion] The results show that isolated strain BX1 matches to virulent APMV-1 strain, belonging to genotype Ⅶ of APMV-1 strain.; 易春华潘杰付薇颜健华徐贤坤熊毅; 关键词：CLONING

2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析被引量：4: 2008年; 将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。; 胡晓静潘杰陈进喜付薇徐贤坤何丹刘棋熊毅; 关键词：鹅细小病毒 VP2基因克隆

鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析被引量：1: 2011年; 采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸。经同源性和系统进化树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2和PB1与H9N2亚型欧亚谱系中的第2亚群代表株QA/HK/G1/97的核苷酸和氨基酸同源性在95%以上,亲缘关系较近。; 付薇覃芳芸马琳徐贤坤黄胜斌易春华孙翔翔何奇松蒋家霞熊毅; 关键词：禽流感病毒 H9N2亚型

广西野鸟H9N2亚型流感病毒的分离与鉴定被引量：3: 2011年; 【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制（NI）试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。; 黄胜斌蒋家霞何奇松付薇孙翔翔马琳熊毅; 关键词：野鸟 HA基因 NA基因

鹅副粘病毒病免疫程序探讨被引量：3: 2009年; 研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2～4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。; 许瑞胜潘杰龙剑明徐贤坤胡晓静冯淑萍何丹熊毅; 关键词：鹅副粘病毒病免疫效果免疫程序

鹅γ-干扰素基因真核表达载体的构建及在幼仓鼠肾细胞中的表达被引量：3: 2011年; 将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ,经测序鉴定后,在室温条件下,质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ浓度20μg/mL,体积400μL,幼仓鼠肾细胞(BHK-21)细胞密度1×106/mL,电穿孔仪参数设为电压425 V、电容25μF、连续脉冲2次转染BHK-21细胞,待细胞贴壁后经过浓度为600μg/mL的G418连续筛选14 d后,出现抗性细胞克隆,将阳性BHK-21细胞上清液进行Western-blot鉴定,检测结果证明鹅IFN-γ在BHK-21细胞中得到表达。; 胡晓静刘棋付薇徐贤坤熊毅; 关键词：Γ-干扰素基因电穿孔真核表达

5株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因的序列分析被引量：1: 2010年; 为了从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在广西的遗传变异情况,对5株不同年代的广西H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行克隆测序及同源性、遗传进化分析。结果表明,5株分离株均为低致病性AIV(LPAIV),HA、NA基因均属于欧亚谱系中的DK/HK/Y280/97(第I亚群),与我国代表株CK/BJ/1/94HA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.5%～95.9%,NA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.8%～95.8%。分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05HA基因第226位氨基酸由谷氨酰胺(Gln)突变为亮氨酸(Leu),具备人类流感病毒的受体特征,而在糖基化位点方面,除了CK/GX/6/00HA基因的第218位发生变异以外,5株分离株HA基因上其余各糖基化位点均未发生变异;分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05、QA/GX/B1/06NA基因均缺失第63、64、65位3个氨基酸,导致1个糖基化位点缺失,而CK/GX/6/00、WB/GX/A1/06NA基因则未发生缺失。; 刘科覃伦熊毅刘棋; 关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因 NA基因

鹅γ-干扰素的原核表达及抗病毒活性研究被引量：1: 2012年; 本研究采用RT-PCR方法从培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA中成功扩增到鹅IFN-γ基因。将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入原核表达载体pGEX-6P-1,得到重组质粒pGEX-6P-1-IFN-γ。重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后作SDS-PAGE分析,得到约43 ku融合表达蛋白特异条带。用GST亲和纯化柱对原核表达产物中目的蛋白进行纯化,得到1.2 mg/L的纯化蛋白。用100TCID50病毒量在鹅副黏病毒(GPMV)/鹅胚成纤维细胞系统上测定表达蛋白的抗病毒活性,观察不同处理组的细胞形态并用RT-PCR方法鉴定,发现表达蛋白稀释倍数小于104可抑制GPMV复制,按照Reed-Muench法计算表达的鹅IFN-γ抗病毒效价为2.0×103U/mL,表明表达蛋白具有良好的抗病毒活性。; 胡晓静刘棋付薇徐贤坤熊毅; 关键词：Γ-干扰素原核表达抗病毒活性

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