广西壮族自治区科技攻关计划(0719004-3C)
- 作品数：7 被引量：39H指数：3
- 相关作者：陈泽祥李军杨威彭昊谢宇舟更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌O157∶H7实时定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157∶H7快速定量检测的实时定量PCR方法。该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍。方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157∶H7,对非大肠杆菌O157∶H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应。利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157∶H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。
- 李军谢宇舟禤雄标陈泽祥杨威马春霞胡帅彭昊许力干谢永平潘艳
- 关键词：实时定量PCR
- 大肠杆菌O_(157):H_7双重PCR快速检测试剂盒的研制
- 2012年
- 为了研制一种快速、准确诊断大肠杆菌O157:H7的PCR方法,试验根据GenBank收录的大肠杆菌O157:H7全基因组序列,设计并合成了2对可扩增rfbE(O157)和Flic(H7)基因片段的特异性引物,建立双重PCR快速检测大肠杆菌O157:H7的方法,并研制出检测试剂盒。结果表明:该检测试剂盒对大肠杆菌O157:H7能特异性地扩增出rfbE和Flic基因的目的片段;对大肠杆菌O157:H30、O157:H9、O157:H25、O157:H19只能扩增出rfbE而不能扩增出Flic基因的目的片段;对大肠杆菌DH5α、猪链球菌2型和副猪嗜血杆菌没有扩增出任何目的片段;细菌DNA的最低检测极限是50 pg;在-20℃条件下保存1,3,6,9,12个月后,其敏感性都没有发生改变,均能检测到50 pg的大肠杆菌O157:H7DNA模板。
- 李军彭昊禤雄标谢宇舟马春霞胡帅陈泽祥杨威许力干谢永平潘艳
- 关键词：大肠杆菌O157:H7双重PCR试剂盒
- 猪源大肠杆菌O157∶H7毒力差异株的转录组测序分析被引量：1
- 2017年
- 为了解大肠杆菌O157∶H7毒力差异株转录组差异,丰富O157∶H7转录组数据信息,本研究采用Illumina HiSeqTM2000平台对两株大肠杆菌O157∶H7毒力差异株进行高通量测序,测序数据采用测序评估、基因功能注释等生物信息学方法进行分析。结果发现,经过测序,两个菌株分别获得3 113 118和2 944 912条reads,比对到参考基因组上的reads分别占总reads的83.76%和78.97%。以中等毒力株为参考,在高毒力株中共获得941个差异表达基因,其中上调基因637个,下调基因304个。GO功能注释分析表明,差异表达基因主要与催化活性功能、黏附、转运活性、受体活性、酶调节活性、定位、生化调节、运动等诸多生理生化过程相关;KEGG富集分析发现共有425个基因注释到160个代谢通路中,其中新陈代谢、核糖体、鞭毛合成、嘧啶代谢、糖类代谢、细菌趋化等通路显著富集。此次通过大肠杆菌O157∶H7毒力差异株转录组研究对差异表达基因涉及的信号调控及可能的功能基因进行了探索,丰富了转录组信息,为进一步开展大肠杆菌O157∶H7毒力相关基因的研究及分子调控机制奠定了基础。
- 彭昊李军杨威陈泽祥潘艳冯世文曾芸
- 关键词：转录组
- 猪源大肠杆菌O157∶H7耐药表型和消毒剂抗性调查被引量：11
- 2012年
- 为了调查广西猪源大肠杆菌O157∶H7分离株的耐药表型和消毒剂抗性情况,本研究测定5株猪源大肠杆菌O157∶H7广西分离株的药物敏感性和消毒剂抗性,并应用PCR对5株细菌的耐氨基糖苷类抗生素基因:氨基糖苷磷酸转移酶基因aph(3)-Iia、乙酰转移酶基因aadA和aadB进行扩增。27种抗菌药物的敏感结果表明,5株菌株只对氟苯尼考、头孢曲松、头孢西丁和头孢噻肟敏感;对罗红霉素、多黏菌素B、利福平、林可霉素、阿莫西林、氨苄西林和头孢噻吩的耐药率为100%;对壮观霉素、链霉素、头孢拉定等药物的耐药率在20%～60%之间。在5株大肠杆菌O157∶H7广西分离株中,分别有1株、1株和3株菌株对23种、11种和9种抗菌药产生耐药性。PCR结果证实,5株细菌携带有耐氨基糖苷类抗生素基因,耐药基因的存在与其耐药表型有一定的相关性。消毒剂抗性结果显示,5株细菌对聚维酮碘溶液、新洁尔灭消毒液、稀戊二醛溶液、双季铵盐—碘消毒液、复方过氧乙酸具有抗性,只对二氯异氰尿酸钠粉敏感。研究结果对预防和控制广西大肠杆菌O157∶H7提供了数据。
- 李军谢宇舟冯世文彭昊陈泽祥禤雄标胡帅马春霞谢永平杨威曾芸
- 细菌对氟苯尼考的耐药机制研究被引量：12
- 2014年
- 氟苯尼考是一种治疗动物细菌性疾病的抗菌药物,在养殖业中的广泛使用已产生严重的耐药问题。文章对近十几年来国内外报道的关于细菌对氟苯尼考耐药机制研究进行归纳总结,论述了细菌对氟苯尼考产生耐药性及耐药性传播的机制,以期为临床上合理使用氟苯尼考提供参考。
- 冯世文曾芸李军杨威陈泽祥
- 关键词：细菌氟苯尼考耐药机制外排泵
- 广西畜禽大肠杆菌O157∶H7流行病学调查被引量：16
- 2011年
- 目的为了掌握广西畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学情况。方法应用细菌分离、生化特性鉴定、血清凝集反应和PCR鉴定等方法在2007-2010年广西200多个畜禽养殖场进行畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学调查。对采集的2 915份样本进行了大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定、致病性试验、药物敏感试验以及毒力基因检测。有5份样本经细菌培养特性、生化特性、血清凝集反应和PCR鉴定为大肠杆菌O157∶H7,样本细菌分离率为0.17%。小白鼠致病性试验显示分离菌株的毒力各有差别,对小白鼠的致死率在33.4%～100%之间。药敏结果表明分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、多粘菌素B、罗红霉素、利福平和林可霉素不敏感。毒力基因的检测结果表明,5株分离菌株携带的毒力基因略有差异,并与其致病性强弱有一定的相关性。结论大肠杆菌O157∶H7主要在猪群传播,具有一定的毒力,对常用抗生素耐药。
- 李军禤雄标谢宇舟谢永平彭昊陈泽祥胡帅马春霞杨威许力干潘艳
- 关键词：流行病学抗生素耐药
- 猪源大肠杆菌O_(157)∶H_7菌体蛋白双向电泳方法的建立被引量：3
- 2012年
- 为了建立大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白的双向电泳技术,获得背景清晰,蛋白点分辨率高,重复性好的双向电泳图谱。对双向电泳技术中的样品制备方法、上样量、染色等关键步骤进行了优化。最终选用冰浴超声(9s/间隔9s,200w)3min,再置4℃24h后离心提取蛋白样品,以上样量为0.5mg菌体蛋白在pH值4-7的24cm IPG胶条上进行电泳,最后用考马斯亮蓝G-250染色,获得了较好的双向电泳图谱,得到了850±20个蛋白质点,蛋白主要集中在pH值4.06-7.53之间,匹配率为95.3%。随机选取10个蛋白质点进行质谱鉴定,检出率100%,10个蛋白质除了一个蛋白质为假定蛋白以外,其他蛋白质分属于乙酰辅酶A合成、能量代谢、氨基酸代谢等代谢途径。建立的大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白双向电泳方法,为开展大肠杆菌O157∶H7强弱毒力菌株的差异蛋白质组学研究奠定了基础。
- 谢宇舟密克李军陈泽祥彭昊马春霞禤雄标胡帅许力干谢永平杨威闭炳芬潘艳
- 关键词：蛋白质组双向电泳
