湖北省自然科学基金(2003ABA116)
- 作品数：11 被引量：115H指数：6
- 相关作者：杨艳燕袁琳冯建成沈轶石艳军更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达的比较研究被引量：14
- 2004年
- 实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达 ,并说明前肽 ( pro序列 )对纳豆激酶的活性表达必不可少。以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,采用PCR方法分别扩增编码信号肽、前肽及成熟肽的序列 ( pre pro NK)和编码前肽、成熟肽的序列 (pro NK) ,构建了大肠杆菌表达质粒 pTYB1 0 1 ,pTYB1 0 2 ,转化大肠杆菌ER2 5 66。在IPTG诱导下 ,分别在 1 5℃ ( 1 4h) ,3 0℃ ( 3h)和 3 7℃ ( 2h)培养。结果可见 ,pTYB1 0 2能表达有活性的纳豆激酶。SDS PAGE表明 ,1 5℃表达杂蛋白更少。薄层扫描显示表达的纳豆激酶占菌体总蛋白的 3 0 %以上。成功制备了表达纳豆激酶的工程菌。
- 许芳冯建成李洁石衍君阎达中杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶大肠杆菌活性丝氨酸蛋白酶心脑血管疾病
- 血管紧张素转换酶基因多态性与糖尿病的相关性研究被引量：1
- 2005年
- 为了研究血管紧张素转换酶(ACE)基因的插入(I)/缺失(D)多态性是否与糖尿病(DM)的易感性相关,对108例糖尿病患者和196例正常人进行了ACE基因多态性分析.发现DM患者基因型DD基因型频率为22%,χ2=4.7,P>0.05(其中,Ⅰ型糖尿病患者相应频率为21%,χ2=4.9,P>0.05;Ⅱ型糖尿病患者为23%,χ2=2.1,P>0.05),而对照组DD基因型频率为16%;DM患者D等位基因频率为38%,χ2=0.0048,P>0.05(其中,Ⅰ型糖尿病患者相应频率为34%,χ2=0.62,P>0.05;Ⅱ型糖尿病患者为41%,χ2=0.25,P>0.05),而对照组相应频率分别为38%.糖尿病患者与对照组之间ACE基因I/D多态性频率存在差异,但不显著.这一结果表明ACE基因的多态性与糖尿病的易感性可能无关.
- 石艳军沈轶姜泽群杨艳燕
- 关键词：糖尿病血管紧张素转换酶基因基因多态性
- 重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究被引量：6
- 2004年
- 将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶.首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10 h.然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶.冷冻干燥品在SDS-PAGE上呈一条蛋白质带.纯化倍数35倍,纯酶比活1147.54.该酶的最适反应条件是45℃,pH 8.0.酶活性在pH 6.0-11.0,55℃以下稳定.
- 许芳冯建成李洁石衍君杨艳燕
- 关键词：分离纯化大肠杆菌枯草芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶
- 纳豆激酶基因在毕赤酵母中的表达纯化及抗体制备被引量：14
- 2010年
- 目的实现纳豆激酶(NK)在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达,以纯化产物为抗原制备兔抗NK血清。为建立双抗夹心酶联免疫吸附反应法测定生物体内NK含量,进一步研究NK在体内代谢与功能奠定基础。方法将NK基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A中,鉴定后的重组质粒用SalⅠ酶切线性化后电转化到毕赤酵母宿主菌GS115中,甲醇诱导表达,经盐析和Millipore超滤膜过滤分离纯化表达产物。纤维蛋白法检测纯化产物的活性,并以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔制备兔抗NK血清。结果SDS-PAGE结果显示NK成功表达,其相对分子质量(Mr)约为27 000,纤维蛋白平板实验显示表达产物具有较好的纤溶活性。酶联免疫法测得多克隆抗体效价约为1∶8 000,Western blot结果显示在Mr27 000附近有1条特异带出现。结论NK在巴斯德毕赤酵母中实现了分泌表达,表达产物具有较好的纤溶活性和免疫原性。
- 蔡立涛徐祥王婷婷喻梅星杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶巴斯德毕赤酵母纤溶活性
- 纳豆激酶基因导入番茄的研究被引量：8
- 2006年
- 将来源于枯草芽孢杆菌的纳豆激酶(nattokinase,NK)基因转化到人类可以直接食用的,又非常喜爱的蔬菜—番茄中,得到在转录水平表达的转基因植株.通过根癌农杆菌EHA105介导,转化番茄的下胚轴,诱导愈伤组织形成及分化成幼苗,进而再生出完整植株.提取再生植株基因组DNA,通过PCR扩增检测,结果表明纳豆激酶基因已经成功整合到番茄植物基因组中.RT-PCR实验结果证明了纳豆激酶基因在转录水平上有表达.
- 袁琳刘红海王吟李晓翔杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶基因番茄根癌农杆菌
- 马疫链球菌SH-5生产透明质酸营养条件的研究被引量：4
- 2005年
- 对Streptococcus equiSH-5生产透明质酸的营养条件进行了研究,摇瓶发酵实验表明该菌株的适宜氮源为酵母膏和牛肉膏以2∶1组成的混合氮源,在碳氮比为2∶1时有利于透明质酸的合成和菌体的生长;通过正交实验摸索出营养培养基的最佳配比为葡萄糖5%,酵母粉6.67%,牛肉膏3.33%,MgSO4.7H2O 0.1%,MnSO4.4H2O 0.02%,NaHCO30.3%,Na2HPO40.5‰,尿嘧啶0.08‰;添加0.05‰异甘草素对产酸有利。
- 张容鹄冯建成金义鑫杨艳燕
- 关键词：透明质酸营养条件
- 透明质酸产生菌的紫外诱变及摇瓶条件的优化被引量：6
- 2005年
- 对马疫链球菌SH-0进行紫外诱变,筛选出溶血素和透明质酸酶双缺陷型突变菌株SH-2,使透明质酸产量提高5倍;突变株经5次传代,其产酸量及HA的相对分子质量保持稳定.经过发酵条件的优化,确定最佳摇瓶条件是初始pH7.6,发酵温度37℃,发酵时间44h.
- 冯建成崔贞华尹姣曾洁莉杨艳燕
- 关键词：透明质酸酶缺陷型溶血素突变菌株紫外诱变产酸量
- 食品蛋白质中血管紧张素转化酶抑制肽的研究被引量：31
- 2004年
- 血管紧张素转化酶Ⅰ (angiotensinIconvertingenzyme ,简称ACE)在人体血压调节过程中起重要的生理作用。源于食品蛋白质中的血管紧张素转化酶抑制肽 (angiotensinIconvertingenzymeinhibitorypeptides ,简称ACEIP)有明显的降血压作用 ,这些肽是通过抑制ACE的活性起降血压作用。文章中综述了来源于各种食品蛋白质的ACEIP的最新研究进展以及两种主要制备方法和评价方法 。
- 石艳军金义鑫袁琳丁小霞沈轶杨艳燕
- 关键词：血管紧张素转化酶降血压作用人体血压生理作用食品蛋白质
- 杆状病毒表达系统研究进展被引量：13
- 2005年
- 介绍了杆状病毒表达系统的构建策略,载体发展情况及其表达外源基因的影响因素。杆状病毒表达系统在基因工程、药物开发、疫苗生产等方面发挥了越来越重要的作用,其表达效率高,表达产物与天然产物有相似的结构和活性,且对人畜无害,为当今基因工程研究中最有发展前途的表达系统。
- 李雪菲袁琳胡海斌贺巍
- 关键词：杆状病毒表达系统杆状病毒载体外源基因
- 维生素D受体基因多态性与糖尿病的相关性被引量：19
- 2007年
- 目的研究维生素D受体(VDR)基因BsmⅠ酶切位点多态性是否与糖尿病(DM)的易感性相关。方法采用PCR-RFLP方法分型并用χ2检验比较各组间基因型及等位基因频率的分布。结果全部研究对象中共见BB、bb、Bb三种基因型。1型糖尿病(T1DM)BB基因型频率为2%,Bb基因型频率为47%,分别明显高于对照组的0.5%和9.2%,而2型糖尿病(T2DM)的BB基因型频率为0.6%,Bb基因型频率为10.8%,与对照组分别相似。结论VDR基因BsmI位点多态性与T2DM的易感性可能无关(P>0.05),但与T1DM的易感性密切相关(P<0.05)。
- 石艳军沈轶蔡立清胡峰杨艳燕
