北京市自然科学基金(7052056)
- 作品数：21 被引量：47H指数：5
- 相关作者：李刚胡迎春霍艳英吴德昌米粲更多>>
- 相关机构：军事医学科学院重庆医科大学解放军第307医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 多效生长因子通过JNK信号通路负调控Schlafen2基因表达被引量：2
- 2008年
- 实验室前期研究发现,多效生长因子(pleiotrophin,PTN)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞中Schlafen2(Slfn2)基因高表达.为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路,应用Western印迹检测外源性PTN因子(终浓度50ng/μl)对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响;应用Northern印迹分别检测JNK和p38通路特异性抑制剂对Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的影响.结果发现,Ptn沉默细胞内JNK磷酸化水平高于对照细胞,外源性PTN处理后沉默细胞内JNK磷酸化水平下调;阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因转录,阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2转录水平没有明显影响.结果提示,Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达.
- 方玲胡迎春杨柳刘梦伊刘昕潘兴斌吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基因沉默
- Pten基因对小鼠胚胎成纤维细胞中Cu／Zn-SOD基因表达的调控被引量：2
- 2009年
- 目的研究Pten基因对抗氧化蛋白Cu/Zn-SOD基因表达的调控,初步探索其调控机制。方法运用North-ern blot比较Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中基础Cu/Zn-SOD mRNA表达差异,以及0.1mmol/LH2O2诱导后Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中Cu/Zn-SOD mRNA表达差异;运用Western blot分析PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用Pten-/- MEFs细胞不同时间(30min,1、2、6、24h)后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,磷酸化AKT及Cu/Zn-SOD蛋白表达变化;利用Northern blot分析LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min,1、2、6、24h后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,Cu/Zn-SOD mRNA表达变化。结果Pten-/- MEFs细胞中,基础Cu/Zn-SOD mRNA表达水平降低,H2O2诱导的Cu/Zn-SOD mRNA表达明显受到抑制;在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,AKT磷酸化水平明显降低,2h时基本没有表达;与此对应,在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA表达均增强,并持续增强至24h。结论小鼠胚胎成纤维细胞中,Pten基因可通过拮抗PI3K/AKT信号通路调控Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA的表达。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN超氧化物歧化酶AKT信号通路
- 乳腺癌组织中PTEN的表达及其临床意义被引量：7
- 2006年
- 目的研究肿瘤抑制基因PTEN在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化染色检测146例乳腺癌组织和10例乳腺癌癌旁正常组织PTEN蛋白的表达情况。结果10例乳腺癌癌旁正常组织均有PTEN表达,免疫组化染色较强PTEN表达于乳腺小叶腺泡上皮细胞及导管上皮细胞的胞质和胞核。146例乳腺癌组织的PTEN阳性表达率为57·5%(84/146)PTEN蛋白表达于癌细胞的胞质和胞核,PTEN表达与乳腺癌原发肿瘤的大小、病理分期以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)有关,PTEN高表达的乳腺癌患者2年生存情况明显优于低表达者(P<0·05),且ER、PTEN同时表达的乳腺癌患者2年无病生存率高于其中之一未表达或均未表达者(P<0·05)。结论乳腺癌组织中存在肿瘤抑制基因PTEN的表达缺失或减弱,可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。
- 张宏艳宋三泰江泽飞郑晓玲黄焰李刚
- 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学
- 多效生长因子(Pleiotrophin)基因沉默后的基因表达谱初步分析被引量：9
- 2007年
- 多效生长因子(pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性的生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能.我们前期研究发现,Ptn稳定沉默可以显著降低细胞的生长及成瘤能力.为进一步了解Ptn表达沉默后小鼠基因转录谱的变化,用小鼠表达谱芯片比较了对照及Ptn沉默细胞的基因表达差异.在检测的24000个基因中,Ptn沉默后上调2倍以上的基因有240个,下调2倍以上的基因有129个.值得引起注意的是,在Ptn沉默的MEFs细胞中,同DDK综合症相关的基因家族,schlafen(Slfn)家族的Slfn2、Slfn3、Slfn4以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族的Mmp3、Mmp10、Mmp13表达均显著上调;而可促进内皮细胞运动,参与血管发生的基因angiomotin(Amot)表达显著下调.通过研究,获得了一系列Ptn沉默后表达变化的基因信息.
- 霍艳英胡迎春周乔丹杨柳张博李刚吴德昌
- 关键词：多效生长因子基因沉默基质金属蛋白酶
- 针对Pleiotrophin基因的siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建
- 2005年
- 胡迎春刘敏丽霍艳英项晓琼李刚
- 关键词：基因表达
- 基因芯片技术分析siRNA抑制多效生长因子表达后Pten^(-/-)MEF241细胞基因表达谱的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化。方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组)。差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5。部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证。结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个。其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等。RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合。结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础。
- 胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：寡核苷酸序列分析基因表达逆转录聚合酶链反应
- Pten缺失小鼠胚胎成纤维细胞中活性氧和氧化损伤水平的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究Pten缺失后小鼠胚胎成纤维细胞抗氧化能力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、脂质以及DNA氧化损伤水平的变化。方法:采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力检测、ROS荧光发光分析、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测和.γ-H2AX免疫荧光染色技术,分别比较Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞SOD活力、ROS、MDA和γ-H2AX水平的差异。结果:Pten^(-/-)MEFs细胞中SOD活力明显减弱,ROS、MDA和γ-H2AX水平均显著增高。结论:Pten可能通过调控细胞抗氧化能力影响ROS水平,从而拮抗脂质和DNA氧化损伤以及由此产生的染色体不稳定性。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN活性氧染色体缺失脂质过氧化作用DNA氧化损伤成纤维细胞
- 多效生长因子对基质金属蛋白酶3,10的负调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究多效生长因子对基质金属蛋白酶(MMP)3、10的负调控作用。方法:用RT-PCR、Northern印迹比较对照与多效生长因子沉默细胞中MMP3、MMP10的表达;在多效生长因子沉默细胞培养液中加入50 ng/mL多效生长因子,检测MMP3、MMP10的表达。结果:多效生长因子缺失细胞中MMP3、MMP10高表达;而在其中添加多效生长因子之后,MMP3、MMP10的表达基本被完全抑制。结论:多效生长因子对MMP3、MMP10有负调控作用。
- 张博胡迎春杨柳李刚李晓兵吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基质金属蛋白酶负调控
- 过氧化氢以PTEN依赖方式介导细胞凋亡被引量：6
- 2007年
- PTEN是一个重要的抑癌基因.为了调查PTEN在H2O2对细胞凋亡诱导过程中的作用及机制,采用Western印迹方法,检测了在PTEN缺失细胞及对照细胞中H2O2对PI3K/AKT通路的影响;采用AnnexinⅤ-FITC标记结合流式检测H2O2对PTEN缺失细胞及对照细胞凋亡的诱导.结果表明,在PTEN功能正常的对照细胞中,H2O2短时间活化,长时间抑制PI3K/AKT通路,但PTEN缺失后,H2O2对PI3K/AKT通路的介导被阻断;0.1 mmol/L H2O2处理12 h及24 h可以诱导对照细胞的凋亡,但对PTEN缺失细胞没有明显影响.这一结果证明,PTEN通过参与H2O2对PI3K/AKT通路活性的调控影响H2O2介导的凋亡.
- 霍艳英付春玲苟巧胡迎春李刚吴德昌
- 关键词：PTENH2O2AKT凋亡
- PTEN再表达对细胞内抗氧化蛋白表达和DNA氧化损伤的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源体(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)再表达对细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达、活性氧(ROS)和DNA氧化损伤水平及细胞抗氧化能力的影响。方法采用Western blot法比较Pten-/-MEFs细胞(对照细胞)与PTEN再表达的Pten-/-MEFs细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达差异;采用化学/荧光发光法分析对照细胞与PTEN再表达细胞内基础ROS水平差异;采用中性单细胞凝胶电泳比较不同浓度(0、0.01、0.05、0.10mmol/L)H2O2处理后,对照细胞与PTEN再表达细胞内DNA双链断裂(DSBs)的变化。结果与对照细胞相比,PTEN再表达细胞中Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD蛋白的表达水平增高,细胞内基础ROS水平降低,DSBs减少,细胞抵抗外源性H2O2的能力增强。结论 PTEN可能通过对Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD等抗氧化蛋白的表达调控,增强细胞抗氧化能力,清除细胞内过量的ROS,从而保护细胞免受氧化压力导致的DNA氧化损伤,维持基因组稳定性。
- 周乔丹米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：再表达活性氧DNA氧化损伤
