德阳市重点科学技术研究项目(2007SG035-1)
- 作品数：5 被引量：9H指数：1
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- B7特异性siRNA对树突状细胞功能的影响
- 2008年
- 随着对抗原提呈细胞（APC）特别是树突状细胞（DC）的深入研究，发现DC不仅是最有效的APC，也是惟一能激活初始T淋巴细胞的APC。T细胞的有效活化不仅需要抗原特异性T细胞受体／CD3复合物与APC表面的MHC-抗原肽相结合，还需要APC表面的B7共刺激分子提供第二活化信号。
- 袁成良魏世刚刘定海刘利洪邹自英
- 关键词：树突状细胞T细胞受体抗原提呈细胞活化信号
- RNA干扰原理及应用研究进展被引量：7
- 2009年
- RNA干扰(RNAi)是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,指内源性或外源性与靶基因的转录产物mRNA有同源互补序列的双链RNA(dsRNA)在细胞内特异降解该mRNA,从而致使特异性的基因有效封闭的过程,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。RNAi作为一种简单快速、特异、高效、经济、效果可预测的技术,具有明显的优势,它比反义核酸技术优越,比基因敲除简单,具有良好的应用前景。RNAi主要用于基因功能的分析、信号传导通路的研究、新药物的研究和开发、病毒感染和肿瘤的治疗等。
- 袁成良金晓岚
- 关键词：RNA干扰SIRNA转录后基因沉默
- B7特异性siRNA对树突状细胞功能的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨体外合成的B7特异性小干扰RNA(siRNA)对树突状细胞(DC)功能的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达,用ELISPOT检测DC与淋巴细胞共培养后T细胞分泌IFN-γ,用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应和CTL特异性杀伤率。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(80.9±5.23)%;siR-NA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(74.7±4.63)%。经转染B7-1、B7-2分子特异性siRNA的DC激活后,T淋巴细胞分泌IFN-γ分别为(84.6±23.1)103U/L和(76.7±19.7)10.3U/L明显低于对照组(204.5±46.2)103U/L;各组DC刺激淋巴细胞增殖指数(PI)分别为1.73±0.32和1.53±0.25,也低于对照组4.23±0.74。CTL杀伤实验结果表明:对照组的特异性杀伤率为(76.4±7.6)%,siRNA1和siRNA2组的特异性杀伤率分别为(14.4±3.6)%和(18.6±4.7)%,低于对照组。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,并可降低DC激活T淋巴细胞增殖和CTL的细胞毒性,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受和治疗自身免疫性疾病提供了新思路和方法。
- 袁成良魏世刚刘定海刘利洪邹自英
- 关键词：小干扰RNA树突状细胞B7
- B7特异性RNA干扰对皮肤移植的影响
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰技术阻断B7/CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静脉将转染B7特异性siRNA的DC输入小鼠体内(DC转染组),同时设立同种异体移植对照组、同系移植对照组、环孢素A(CsA)治疗组(术后每日皮下注射CsA5 mg/kg)和未转染DC组(移植前输注未转染DC),观察各组移植皮瓣的存活时间和排斥反应情况,并用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应,术后1个月观察迟发性超敏反应情况。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(77.2±6.26)%;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(73.3±5.42)%。与同种异体移植对照组和未转染DC组比较,DC转染组移植皮瓣成活时间明显延长(P<0.01),组织排斥反应程度较轻,混合淋巴细胞反应和DTH反应显著降低(P<0.01)。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,以阻断B7/CD28共刺激通路,抑制小鼠皮肤移植排斥反应,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受提供了新方法。
- 袁成良邹自英魏世刚李永忠刘定海刘利洪
- 关键词：RNA干扰树突状细胞B7皮肤移植免疫抑制
- RNA干扰抑制树突状细胞CD80和CD86基因表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨体外合成的小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA(siRNA1、siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD80和CD86 mRNA的变化,用蛋白印迹检测CD80、CD86蛋白的表达。结果转染24、48、72h后,DC CD80 mRNA均有明显减少(P<0.01),抑制率分别为(50.0±3.63)%、(66.8±4.12)%和(76.6±4.87)%;CD86 mRNA均有显著降低(P<0.01),抑制率分别为(53.0±3.70)%(、60.5±3.92)%和(73.4±4.46)%,而单纯脂质转染和siRNAc转染对CD80、CD86 mRNA表达均无影响(P>0.05)。Western Blot结果显示转染48、72h后,siRNA1对CD80蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对CD86蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论 siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。
- 袁成良刘定海刘利洪邹自英魏世刚
- 关键词：小干扰RNA树突状细胞B7基因表达
