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结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达被引量：1: 2010年; 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。; 吴玉敏谭继英王革刘万波胡丽娜祝秉东; 关键词：MTB8.4 HSPX 克隆

结核分枝杆菌培养滤液蛋白免疫学特性及应用研究进展: 2011年; 结核分枝杆菌培养滤液蛋白(CFP)是结核分枝杆菌培养上清中的分泌蛋白,在结核感染动物模型中能促进保护性免疫的产生,能刺激免疫细胞高效分泌IFN-γ等细胞因子。本文就其组成、生物学和免疫学特性及其在临床诊断和疫苗研制的应用前景做一综述。; 谢富佳梁正羽乔梅谭继英; 关键词：结核分枝杆菌疫苗研制

CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用被引量：4: 2011年; 目的用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评价检测CFP21蛋白在结核分枝杆菌感染中的诊断效果,同时,比较CFP21、CFP10和ESAT6的应用价值。方法取28例临床确诊结核患者和26例健康志愿者外周血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用CFP21、CFP10和ESAT6蛋白刺激,定量检测PBMC分泌的特异性γ干扰素(IFN-γ)水平,判断结核分枝杆菌感染情况。用ELISA检测血清抗结核抗体。结果 ELISA检测结核病患者血清结核抗体阳性率为57.1%;以CFP21、CFP10和ESAT6为抗原,用ELISPOT方法检测结核病患者IFN-γ阳性率分别为25.0%、39.3%和32.1%。结论应用CFP21蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法有潜在的临床应用价值,但CFP21作为抗原用于结核分枝杆菌感染诊断的敏感性低于CFP10和ESAT6。; 谢富佳谭继英乔梅梁正羽王世婷唐克峰祝秉东杨燕章国平; 关键词：结核病

结核分枝杆菌培养滤液蛋白21(CFP21)的基因克隆、表达及纯化被引量：1: 2011年; 目的构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白21(Culture filtrate protein 21,CFP21)原核表达载体,获得CFP21蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,PCR扩增cfp21基因,质粒PET28a(+)为表达载体,构建PET28a(+)/cfp21质粒,转化入大肠埃希菌DH5α中,抽提质粒,PCR扩增,测序,转化到大肠埃希菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,并用His Bind蛋白纯化试剂盒纯化CFP21。结果构建、表达和纯化了CFP21,分子量约为24kD,主要以包涵体形式存在。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,纯化得到CFP21蛋白,为CFP21的进一步研究奠定基础。; 谢富佳谭继英兰州大学结核病研究中心梁正羽乔梅祝秉东吴玉敏杨燕章国平; 关键词：结核分枝杆菌基因克隆蛋白表达纯化

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艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008zx100030135)