国家自然科学基金(31272508)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：吴金美张杨刘霁杨杰沈中元更多>>
- 相关机构：江苏科技大学中国农业科学院蚕业研究所更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 家蚕肽聚糖识别蛋白L1参与Imd信号通路被引量：1
- 2016年
- 【目的】肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRP)作为一个重要的模式识别受体,在家蚕Bombyx mori的先天免疫中发挥重要的作用。本研究主要探讨家蚕PGRP-L1基因的功能及其所参与的免疫信号通路。【方法】本实验通过RT-PCR扩增获得家蚕PGRP-L1基因。利用微生物诱导实验对5龄起蚕分别注射大肠杆菌Escherichia coli、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和PBS,12 h后取体壁和头部提取RNA,然后采用RT-PCR和凝胶电泳技术测定BmPGRP-L1基因的表达水平;利用RNA干涉实验向5龄起蚕注射PGRP-L1 dsRNA或PBS,6 h后再分别注射3种灭活的微生物或PBS,然后检测家蚕体壁及头部的免疫相关转录因子(Rel,Cactus和Relish)以及家蚕多个抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)基因(攻击素基因Attacin,Moricin和葛佬素基因Gloverin)的表达情况。【结果】微生物诱导实验显示,注射大肠杆菌的实验组比注射PBS的对照组Bm PGRP-L1基因转录水平显著上调,而注射酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的实验组Bm PGRP-L1转录水平没有变化。利用RNAi技术成功敲低Bm PGRP-1表达,对Bm PGRP-L1敲低的5龄起蚕注射灭活的微生物,敲低实验组relish因子表达低于正常对照组,相应地抗菌肽基因的表达也有不同程度的下调。【结论】结果提示,BmPGRP-L1基因参与家蚕对革兰氏阴性菌大肠杆菌的免疫响应;Bm PGRP-L1基因在家蚕的体壁和头中参与Imd信号通路。
- 张杨刘霁杨杰崔清清沈中元吴金美
- 关键词：家蚕先天免疫肽聚糖识别蛋白RNA干扰
- Abcg4基因在小鼠组织中的表达及其RNA干涉的研究
- 2013年
- 利用半定量RT-PCR的方法研究基因Abcg4在小鼠组织的表达情况,发现Abcg4基因在小鼠脑、眼睛和脾中表达,其中脑和眼睛中表达较高.为进一步研究Abcg4基因的功能,采用RNA干涉(RNAi)技术抑制脑中Abcg4基因的表达,通过体内实验了解其对Abcg4基因的沉默效率.设计合成针对Abcg4基因的小干扰RNA(siRNA),不同剂量siRNA注射小鼠侧脑室内,于小鼠注射后不同时相点,采用半定量RT-PCR法检测脑内Abcg4基因的表达量.结果表明,特定靶序列的siRNA注射剂量6μg,注射48 h时,对Abcg4基因的抑制效率可达85%.研究表明,脑注射siRNA可以显著抑制小鼠脑中Abcg4基因的表达.
- 王雪芳李锡海吴金美
- 关键词：RNAIRT-PCR侧脑室注射
