国家自然科学基金(31272539)
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 相关作者：王选年孙国鹏银梅岳锋杨媛更多>>
- 相关机构：新乡学院河南科技学院郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- PD-1/PD-L1在病毒类畜禽免疫抑制疾病中的研究进展
- 2021年
- 程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1或CD279)是一种免疫抑制受体,其与配体PD-L1通过相互作用介导PD-1/PD-L1信号通路的激活,可导致T细胞免疫功能耗竭,表现为免疫调节相关细胞因子的表达异常、效应T细胞增殖、分化能力降低等,进而对机体免疫功能发挥负向调节作用。文章基于畜禽免疫抑制类疾病相关领域内的现有研究结果,分别对PD-1/PD-Ls在疾病不同阶段的表达、分布、表达模式以及二者的异常表达对T淋巴细胞增殖、效应细胞分化和免疫调节相关细胞因子的分泌等细胞免疫抑制效应影响等方面进行总结,探讨并分析PD-1/PD-Ls通路与畜禽免疫抑制类疾病发生、发展的关系和相关的分子机制,以期为进一步研究畜禽免疫抑制类疾病致病机制等提供参考,也为开发以PD-1/PD-L1为靶点的治疗和预防畜禽免疫抑制疾病的新型药物或疫苗提供理论基础和依据。
- 陈威孙国鹏何海汛李丹蒋力维王选年
- 关键词：PD-1PD-L1免疫抑制畜禽疾病
- 猪白细胞介素17A基因的克隆与鉴定被引量：5
- 2017年
- 猪白细胞介素17A(IL-17A)是猪白介素17家族的重要成员,在猪体内发挥重要作用的细胞因子。本研究将猪的外周血单核细胞分离后,用Con A刺激22 h后提取细胞的总RNA,RT-PCR方法扩增出猪IL-17A基因,将其PCR产物回收纯化克隆至p MD-18T载体上,转化至大肠杆菌DH5α,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组克隆质粒。结果显示,筛选的重组克隆质粒为阳性克隆质粒,基因片段为目的基因。克隆获得的猪IL-17A基因的序列与Gen Bank上公布的猪IL-17A基因序列同源性高,为99.4%。本研究成功克隆了IL-17A基因,有助于研究其在猪病毒性疾病中的作用。
- 何勇朱艳平岳锋李鹏孙国鹏张艳芳邢瑞林李润芷杨健杨川王选年
- 关键词：基因克隆
- 鸡PD-1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD-1)胞外区的生物学活性,根据GenBank中的鸡PD-1基因序列,经生物信息学比对分析,设计鸡PD-1胞外区特异性克隆引物,扩增目的基因,连接原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,并对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示,成功克隆了鸡PD-1胞外区基因;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,37℃、0.1mmol/L IPTG诱导4h时,PD-1胞外区融合蛋白表达量最高,以包涵体形式存在;流式细胞术分析结果表明,PD-1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。
- 李博文孙国鹏王爱国岳锋张艳芳朱艳平银梅杨媛郭东光王选年
- 关键词：胞外区克隆原核表达生物学活性
- 鸡新城疫病毒(NDV-XX08)单克隆抗体的制备与鉴定
- 2016年
- 本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验（HJ）进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1：160和1：3.2×10~4。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡[gG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性。HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。
- 银梅孔令芸张秋雨丰兰竹周洁岳锋王选年
- 关键词：新城疫病毒单克隆抗体
- 猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达
- 2015年
- 为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。
- 杨媛朱艳平岳锋孙国鹏张艳芳银梅王选年
- 关键词：胞外区克隆原核表达
- CHIFNs对鸡CD4~+、CD8~+ T淋巴细胞PD-1及其配体PD-L1表达的影响
- 本研究旨在获得ChIFNs调节鸡CD4~+、CD8~+T淋巴细胞表面免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-L1的表达模式;明确ChIFNs介导的STATs信号通路对PD-1及PD-L1转录调控的分子机制。通过流式细胞术分选...
- 王玲玲； 孙国鹏； 徐若楠； 闫占鹏； 邢瑞林； 王亚平； 任鹏举； 何海汛； 王选年；
- 关键词：PD-1PD-L1
- 文献传递
- 巢式PCR克隆猪T细胞表面抑制性受体PD-1全长基因
- 2017年
- 为了获得猪T细胞表面抑制性受体PD-1的全长基因,本研究根据猪T细胞表面抑制性受体PD-1的c DNA序列,设计合成2对引物P1/P2、P3/P4,并在P1和P2的5'端分别引入Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点。应用巢式PCR技术从感染猪瘟病毒(CSFV)石门株的猪外周血单个核细胞中,扩增获得了大小为866 bp的基因片段。将扩增的目的基因回收、纯化,克隆至p MD-18 T克隆载体,转化宿主菌DH5α。菌液PCR和质粒PCR选择可疑阳性重克隆质粒,抽提质粒,然后用Eco RⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定,最后进行基因序列测定。结果表明,成功构建猪PD-1全长基因的重组质粒(p MD-PD1)。
- 朱艳平何勇岳锋李鹏韩爽孙国鹏张艳芳李润芷杨健邢瑞林王选年
- 关键词：PD-1巢式PCR
- 鸡PD-1单克隆抗体的制备及生物学功能研究被引量：2
- 2018年
- 试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PDL1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting鉴定抗体的免疫学特性,利用间接免疫荧光技术及流式细胞术检测筛选单抗与鸡PBMCs的结合情况,应用该单抗与IBDV感染7d后的鸡PBMC细胞作用,利用实时荧光定量PCR技术检测IL-2、IL-6和IFN-γ等细胞因子的表达情况。结果显示,试验获得1株特异、稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为PD-1-D05。该单克隆抗体的亚型属于IgG1,杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为1∶211和1∶2.048×105。ELISA和Western blotting检测结果表明,PD-1-D05单抗能与免疫原发生特异性反应,与pET-28a(+)、Rosetta菌株蛋白提取液上清及无关蛋白无交叉反应。间接免疫荧光及流式细胞术检测结果显示,PD-1-D05单克隆抗体能与鸡PBMC特异性结合,且IBDV感染7d后的PBMC经单抗处理后,IL-2表达量显著升高(P<0.05),IFN-γ转录水平显著下降(P<0.05),IL-6表达水平较IBDV攻毒组细胞虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结果表明,试验成功筛选并制备了能够稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的细胞株,所获得的PD-1单克隆抗体具有良好的免疫学特性,该单抗能够特异性识别鸡PD-1分子并与鸡PBMC细胞特异结合,并在一定程度上恢复由于IBDV感染导致的PD-1/PD-L1信号通路激活引发的免疫调节相关细胞因子IL-2、IFN-γ的异常表达。
- 王玲玲孙国鹏徐若楠何海汛闫占鹏王亚平邢瑞林任鹏举李鹏张艳芳朱艳平岳锋王选年
- 关键词：PD-1单克隆抗体生物学功能
- 高等学校进化生物学课程改革研究被引量：2
- 2016年
- 经过多年的教学和探索进化生物学课程已经有了很大的改变,它直接影响着现代生命科学教育的发展方向。介绍了进化生物学课程的特点和教学思路以及课程改革,借以帮助进化生物学教育工作者进行这一方面的改革研究,以供同行们借鉴和参考。
- 段艳红王选年
- 关键词：进化生物学课程
- PD-1基因的表达调控分子机制研究进展被引量：3
- 2020年
- 程序性死亡因子-1(PD-1)作为调节或平衡机体外周和中枢免疫功能的重要分子,其在不同的抗原刺激、炎症环境、细胞种类及分化阶段的表达受复杂、多样的分子机制调控。为深入理解PD-1表达调控的分子机制,本文分别从顺式作用元件、转录调控因子及相关信号通路、表观遗传因素、转录后调控等几个方面,将已有关于PD-1表达调控分子机制的相关研究进展进行综述,以期为更精确、有效的免疫检查点疗法或治疗方案的设计提供新的信息和思路。
- 徐若楠孙国鹏何海汛王选年(指导)
- 关键词：PD-1顺式作用元件转录调控因子转录后调控
