国家自然科学基金(31272524)
- 作品数：16 被引量：29H指数：3
- 相关作者：李士泽杨焕民孟宇李昌盛李静辉更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学弗吉尼亚理工大学杨凌职业技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 冷应激条件下猪睾丸细胞中RNA结合基序蛋白3过表达对Caspase 3表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨冷应激(32℃)条件下,猪睾丸(ST)细胞系中RNA结合基序蛋白3(RBM3)过表达时凋亡蛋白半胱天冬酶3(Caspase 3)表达量变化情况。方法:利用本实验室成功构建的携带绿色荧光蛋白(GFP)的RBM3过表达慢病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-RBM3和空病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-DEST分别感染ST细胞,作为过表达病毒(OEV)组和空载体病毒(EVV)组,此外还设立野生型细胞(WTC)组作对照,利用实时荧光定量RCR(qPCR)法和Western blot分析法检测各组中RBM3 mRNA和蛋白的表达情况。然后对各组细胞进行37℃以及32℃(2 h、4 h,8 h)的冷应激处理,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组Caspase 3表达量的变化。结果:OEV组RBM3基因和蛋白相对表达量高于EVV组和WTC组。在37℃以及32℃冷应激实验(2 h、4 h,8 h)中,OEV组Caspase 3表达量显著低于EVV组和WTC组。结论:冷应激ST细胞中RBM3过表达能够显著地降低Caspase 3的表达程度,为RBM3基因具有抵抗低温诱导ST细胞凋亡作用提供实验依据。
- 李云龙李俭李昌盛李静辉孟宇杨焕民李士泽
- 关键词：冷应激过表达半胱天冬酶3
- 雏鸡冷应激前后血清中差异蛋白质组学研究被引量：3
- 2017年
- 本试验旨在比较分析雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达差异,并对重点差异蛋白质进行鉴定。将30只雏鸡随机分为3组,分别为冷应激组、冷适应组和常温对照组,收集各组雏鸡的血液制备血清后进行双向凝胶电泳(2-DE),以获得血清蛋白质表达的2-DE图谱,对2-DE图谱进行差异分析(利用PDQuest 8.0软件),随后采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对差异表达蛋白质进行鉴定,并利用蛋白质印迹(Western blot)方法进行验证。结果显示:通过2-DE对常温对照组、冷应激组和冷适应组雏鸡血清进行分析,得到了比较完整的差异蛋白质数据,共找到差异蛋白质点23个。采用MALDI-TOF-MS技术分析其中几个重复性好且较为明显的蛋白质点,成功鉴定出4个差异蛋白质,其中2个为果糖二磷酸醛缩酶C(ALDOC),是参与葡萄糖、能量代谢通路供能的相关蛋白;随后,对差异蛋白质ALDOC进行Western blot验证,所得结果与2-DE的结果相一致。结果表明,雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达具有明显的差异,这些蛋白质的表达差异可能与冷应激有关。
- 杨玉英刘鹏贺军刘洋姚睿智史宏昭甄莉唐德江李士泽
- 关键词：双向电泳冷应激蛋白质组
- CIRP/AKT信号通路在冷暴露小鼠腓肠肌葡萄糖代谢中的作用
- 气候条件与畜牧业的发展密切相关,环境低温是阻碍畜牧业发展的重要因素之一,尤其在我国北方寒区,畜牧业养殖过程中极易受到寒冷刺激的影响,导致能量代谢异常,生长发育缓慢。冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是一种应激反应蛋白,可以...
- 刘鹏
- 关键词：腓肠肌C2C12AKT葡萄糖代谢
- 文献传递
- RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定被引量：1
- 2014年
- 构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P<0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.
- 李俭杨玉英李玉恒郭景茹计红郭丽李鹏杨焕民李士泽
- 关键词：冷休克蛋白慢病毒载体WESTERNBLOT
- 冷应激复温对ICR小鼠神经行为学的影响被引量：1
- 2023年
- 【目的】研究不同冷应激复温后对ICR小鼠的自发运动、探索行为、焦虑情绪和血液激素指标的影响。【方法】通过与28℃常温对照组相比,检测ICR小鼠4、10、16、22℃冷应激复温组于复温2、4、6、8、10、12 h后在旷场试验和高架十字迷宫试验中的运动变化,并通过ELISA检测各组在复温2及4 h后的血液激素指标变化。【结果】旷场试验结果显示,与28℃常温对照组相比,22℃冷刺激复温10 h时中央区域停留时间和运动时间显著减少(P<0.05);16℃冷刺激复温4和8 h时中央区域停留时间显著减少(P<0.05);10℃冷刺激复温4和10 h时中央区域停留时间显著减少(P<0.05),复温2 h中央区域运动距离显著增加(P<0.05);4℃冷刺激复温6 h时中央区域停留时间极显著减少(P<0.01),复温2 h中央区域运动距离极显著增加(P<0.01)。高架十字迷宫试验结果显示,与28℃常温对照组相比,22和4℃冷刺激复温4 h、16℃冷刺激复温10 h闭臂停留时间显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);10℃冷刺激复温组闭臂停留时间无显著变化(P>0.05)。与28℃常温对照组相比,皮质酮(CORT)在22℃冷刺激复温4 h时极显著升高(P<0.01),16℃冷刺激复温2和4 h时极显著升高(P<0.01);肾上腺素(EPI)在22℃冷刺激复温4 h时极显著升高(P<0.01),10℃冷刺激复温2和4 h时极显著升高(P<0.01)。【结论】冷应激结束后对ICR小鼠的自发运动、探索行为、焦虑情绪和血液激素指标存在持续影响,应减少以ICR小鼠为模型的试验环境温度变化,提高试验结果准确性。
- 史宏昭刘洋姚睿智刘鹏李士泽
- 关键词：ICR小鼠冷应激复温行为学
- O-GlcNAc对冷应激下小鼠骨骼肌卫星细胞Caspase-3的影响被引量：1
- 2017年
- O-连接的N-乙酰葡糖胺糖基化修饰(O-GlcNAcylation)是一种存在于蛋白质Ser/Thr上的翻译后修饰,主要是由OGlcNAc催化转移酶(简称OGT)和O-GlcNAc水解酶(简称OGA)调控的动态过程。其过程与磷酸化相似,在多种细胞过程中扮演着重要的信号转导通路角色,并与神经退行性疾病、Ⅱ型糖尿病、癌症等许多疾病的发病机理密切相关。主要是在低温应激下,通过抑制剂来调控OGT和OGA,间接调控小鼠骨骼肌卫星细胞内O-GlcNAc的含量,来探讨O-GlcNAc对骨骼肌卫星细胞凋亡的作用。实验分为正常对照组、OGA高表达组、OGT高表达组,经过常温(37℃)和亚低温(32℃)不同条件的处理,采用ELISA方法检测Casp-3指标的变化。结果显示:冷应激处理后,人为调控骨骼肌卫星细胞内O-GlcNAc的含量后,所检测的指标有明显差异(P<0.05)。结果说明:在低温应激条件下,O-GlcNAc降低会促进细胞凋亡,从而降低了小鼠骨骼肌卫星细胞的抗应激能力,对骨骼肌卫星细胞造成了一定的影响。
- 张雪SHI Hao李士泽李云龙刘鹏甄莉李鹏杨玉英
- 关键词：冷应激O-GLCNAC骨骼肌卫星细胞
- 冷刺激及复温对小鼠相关神经行为学的影响
- 作为寒区内对人、畜作用最广泛和不可避免的应激源之一,低温环境极易诱导机体产生冷应激,使机体的能量代谢、神经内分泌、行为和情绪发生一系列异常变化。而行为是机体为适应环境变化所作出的功能调节的一个重要部分,可以说,冷刺激下机...
- 刘洋
- 关键词：冷刺激复温神经行为学旷场试验高架十字迷宫
- 文献传递
- 冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)过表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 为构建携带冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRP)的过表达载体,首先从4℃条件下冷处理8 h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP基因的c DNA序列,然后扩增CIRP基因的编码区,将其克隆到真核表达载体p Lenti6/V5中,酶切鉴定并测序.将克隆成功的质粒转染HEK293T细胞,用Western blot检测CIRP的表达水平.成功扩增CIRP编码区,并将其克隆至载体p Lenti6/V5中;当将CIRP过表达载体转染HEK293T细胞后,Western blot检测结果显示CIRP蛋白表达水平明显增加(P<0.01).本研究成功构建了CIRP过表达载体,为进一步研究CIRP的作用机制提供了基础工具.
- 李静辉孟宇李玉恒李昌盛杨焕民李士泽
- 关键词：过表达质粒冷应激
- 亚低温状态下冷诱导RNA结合蛋白调节氧化还原系统对海马神经元的保护作用被引量：5
- 2015年
- 本文旨在探讨冷诱导RNA结合蛋白(cold inducible RNA-binding protein,CIRP)是否通过抑制氧自由基的生成而起到抑制神经元凋亡的作用。采用体外分离培养的原代大鼠海马神经元,随机分为5组:常温对照组(37℃)、空病毒感染组、CIRP过表达组、CIRP干扰组、亚低温32℃处理组。将后四组移入32℃含有5%CO2培养箱内培养。采用Annexin V-FITC/PI标记后用流式细胞术对海马神经元进行细胞凋亡检测、Western blot检测CIRP的表达,同时采用ELISA方法进行相关氧化还原指标(T-AOC,GSH-Px,SOD,MDA)检测。Western blot及流式凋亡检测结果显示:与常温对照组相比,单纯亚低温处理组及CIRP过表达组海马神经元中CIRP的表达量明显增加(P<0.01),神经元的凋亡率明显下降;而干扰CIRP的表达后,与单纯亚低温处理组相比,细胞凋亡的数目则明显增加(P<0.05)。相关氧化还原指标检测结果显示:亚低温32℃处理组、CIRP过表达组与常温对照组、CIRP干扰组、空病毒感染组相比均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。以上结果表明:亚低温处理通过上调CIRP的表达,抑制细胞内氧自由基的生成,从而直接或间接地抑制了氧自由基诱导的神经元凋亡,进而起到海马神经元的保护作用。
- 李静辉张雪孟宇李昌盛计红杨焕民李士泽
- 关键词：亚低温
- VC、VE及Gln复合营养素对大鼠抗冷应激血清生化指标及HSP70表达量的影响被引量：2
- 2014年
- 为探讨日粮中联合添加维生素C(VC)、维生素E(VE)及谷氨酰胺(Gln)复合营养素对大鼠抗冷应激血清生化指标及HSP70表达的影响,建立了大鼠低温应激模型.将30只清洁级雌性Wistar大鼠随机分为3组(N=10),即冷应激对照组、冷应激+复合营养素组(VC 600 mg/kg,VE 100 mg/kg,Gln 1000 mg/kg)和常温对照组.常温对照组在21℃±1℃下饲养,冷应激+复合营养素组,灌胃复合营养素一周后突然将环境温度降至11℃±1℃,应激24 h后采血.采用Elisa法检测血清中去甲肾上腺素(NE)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)的含量;采用实时定量PCR方法检测外周血淋巴细胞热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达量.结果显示:(1)24 h冷应激处理后,大鼠血清中NE水平明显增高,添加复合营养素对血清中NE的影响差异极显著(P<0.01);(2)24 h冷应激处理后,大鼠血清中氧化还原指标GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA显著下降,添加复合营养素对GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA的影响差异极显著(P<0.01);(3)24 h冷应激处理后,外周血淋巴细胞HSP70mRNA的表达量有大幅度升高,添加复合营养素的试验组,淋巴细胞HSP70 mRNA的转录量显著低于冷应激对照组(P<0.01).本研究表明,VC、VE及Gln复合营养素可以有效提高大鼠抗氧化能力,对大鼠抵抗低温应激具有较好的保护效果.
- 刘丛李俭李昌盛计红郭景茹李鹏杨焕民李士泽
- 关键词：复合营养素血清生化指标HSP70
