国家自然科学基金(31270080)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 高渗工业菌株Candida glycerinogenes整合型表达载体的构建及验证被引量：2
- 2015年
- 构建应用于工业用产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)CGMCC NO.6830的整合型表达载体,建立一种可利用底物形成的渗透压调控表达外源基因的体系。以p UC19质粒为基本骨架,C.glycerinogenes CGMCC NO.6830的18S r DNA为整合位点,运用其3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子PCggpd启动外源基因表达,腐草霉素抗性基因ble作为重组酵母转化子筛选标记,获得应用于产甘油假丝酵母的稳定的表达型整合载体;以绿色荧光蛋白基因gfp作为报告基因考察该表达质粒的性能,实现了外源基因gfp的渗透压调控表达。
- 徐丹陆信曜诸葛斌张成宗红
- 关键词：产甘油假丝酵母绿色荧光蛋白
- 高效催化合成3-羟基丙酸的菌株特性被引量：3
- 2014年
- 3-羟基丙酸(3-HP)是一种具有重要经济价值的新兴平台化合物,可用来合成多种化工产品和特种生物降解材料.本研究以1,3-丙二醇(1,3-PDO)为底物全细胞催化合成3-HP.通过菌株筛选和ESI-MS验证共得到3株目的微生物,经鉴定比较,Acetobacter sp.催化合成3-HP性能最高,10 g L-1 1,3-PDO经7 h可生成11.65 g L-1的3-HP,摩尔转化率高达98.4%.对Acetobacter sp.底物催化特异性研究表明该菌株对其他相关醇类如乙二醇、戊醇、苯甲醇、苯乙醇等具有不同程度的催化能力,Acetobacter sp.对甘油仅具有微弱催化活性.研究表明Ca2+、Mg2+、Fe3+能够显著提高细胞催化合成3-HP的速率,向全细胞催化液中加入终浓度0.01 mol L-1的CaCl2,细胞催化活性提高了11.6%.同时考察了氧载体和表面活性剂、贮存温度、菌体重复利用对Acetobacter sp.催化活性的影响并获得了该菌株催化合成3-HP的特性.利用Acetobacter sp.细胞催化1,3-PDO,为3-HP的制备提供了一种新的可能.
- 吴金鑫宗红陆信曜诸葛斌方慧英宋健
- 关键词：ACETOBACTER1,3-丙二醇3-羟基丙酸
- 产甘油假丝酵母HOG1 MAPK同源基因CgHOG1的克隆及特征分析被引量：5
- 2013年
- 【目的】获得产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)耐高渗和过量合成甘油的关键调控基因—丝裂原活化蛋白激酶基因(CgHOG1),并考察其渗透压调节功能。【方法】运用简并PCR结合Self-Formed Adaptor PCR技术从产甘油假丝酵母基因组中克隆CgHOG1基因并进行生物信息学相关分析,将CgHOG1基因在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae W303-1A)hog1Δ缺失突变株中互补表达,考察菌株耐渗透压能力变化。【结果】所获得CgHOG1基因全长1164 bp,编码387个氨基酸序列(GenBank No.KC480066);氨基酸序列与来源于Ogataea parapolymorpha的Hog1p同源性最高,为86%;该基因在酿酒酵母hog1Δ缺失突变株中异源表达能够显著提高菌株的抗盐耐高渗和甘油合成能力。【结论】本文所获得的基因CgHOG1是一个具有耐高渗和过量合成甘油调控功能的新基因,研究结果为产甘油假丝酵母超高渗应答机制的研究及抗盐耐旱作物改造提供了新的基因。
- 王晨莹诸葛斌方慧英宗红宋健诸葛健
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶产甘油假丝酵母
- 安全酵母Candida glycerinogenesis食品级甘油合成关键基因的研究
- 2014年
- 为了研究酵母甘油合成关键酶基因在食品级甘油合成中的重要作用,以产甘油假丝酵母基因组为模板,设计引物,克隆获得甘油合成关键酶基因3-磷酸-甘油脱氢酶基因(CgGPD),并在大肠杆菌中通过tac启动子串联表达来自酿酒酵母的3-磷酸甘油酯酶基因(ScGPP2)。经IPTG诱导培养后,3-磷酸-甘油脱氢酶(CgGPD)的比酶活达到了60mU/mg。在30%的葡萄糖浓度下,经过48h的摇瓶发酵,可合成甘油2.52g/L。表明3-磷酸甘油酯酶在甘油合成过程中起了关键作用,过表达CgGPD基因有助于食品级甘油大量合成,从而降低下游分离纯化的难度,可从分子水平进一步提高甘油的产量。
- 刘小红陈文强诸葛斌宗红陆信曜方慧英宋健
- 关键词：甘油产甘油假丝酵母
- 渗透压对产甘油假丝酵母磷酸果糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的调控被引量：3
- 2017年
- 磷酸果糖激酶(PFK)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)分别是糖酵解途径(EMP)途径和磷酸戊糖途径(HMP)途径的关键酶,控制着流入两种途径的葡萄糖流量,对耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)高效合成甘油、抵抗渗透压胁迫非常重要.为考察渗透压对产甘油假丝酵母这两个关键酶的影响,首先克隆得到编码产甘油假丝酵母G6PDH的Cgzwf基因及编码PFK亚基的Cgpfk1和Cgpfk2,并通过生物信息学分析、酶活检测及基因互补实验验证它们的功能.渗透压胁迫发酵(添加50 g/L NaCl)结果显示,菌株生物量未受渗透压影响,但甘油积累量增加了2倍.与对照相比,盐胁迫激活PFK但弱化了G6PDH活性.此外,盐胁迫下PFK活性表现出更为明显的先降低后升高的趋势,而G6PDH活性的变化则与对照基本相似,表明盐胁迫下碳流可能存在EMP-HMP-EMP形式的不同程度偏转.转录水平检测发现,在发酵中的甘油积累过程盐胁迫对上述酶基因转录的影响并不明显,表明细胞可能通过酶活性调节而不是主要依赖于转录调节来调控两种关键酶以适应耐渗长期胁迫和甘油合成的需要.综上,产甘油假丝酵母以调节关键代谢酶活性的方式来实现碳硫偏转,高产甘油,从而适应外界渗透压力,这一结果可为阐明产甘油假丝酵母耐高渗和高产甘油机制提供新的信息,为未来代谢改造该菌株打下基础.
- 郑昌欣诸葛斌陆信曜宗红李静
- 关键词：产甘油假丝酵母渗透压
- 新型渗透压调控的工业酵母启动子被引量：5
- 2015年
- 【目的】筛选工业酵母Candida glycerinogenes渗透压调控性能优越的启动子,为工业酵母改造及转基因研究提供新途径。【方法】PCR扩增C.glycerinogenes新型系列启动子PCg PGI、PCg TPI、PCg ZWF、PCg STL1、PCg STL2、PCg STL3,利用生物信息学技术解析启动子序列中渗透压胁迫应答元件,构建包含gfp荧光蛋白报告基因和PCg PGI、PCg TPI、PCg ZWF、PCg STL1、PCg STL2、PCg STL3启动子的5.8S r DNA整合表达载体,通过荧光强度及mRNA转录的qRT-PCR测定结果检验各启动子活性强度及其受渗透压调控情况。【结果】启动子PCg STL3包含多个STRE渗透压胁迫应答元件,在工业酵母中受渗透压调控更敏感,启动强烈,转录水平高,gfp表达量大。【结论】PCg STL3是受渗透压调控能够实现外源基因可控表达的优良工业酵母启动子。
- 朱佳莉诸葛斌方慧英宗红陆信曜张成张炜极
- 关键词：产甘油假丝酵母绿色荧光蛋白
