国家自然科学基金(31272526)
- 作品数：14 被引量：27H指数：3
- 相关作者：倪和民郭勇刘云海顾美超邢书涵更多>>
- 相关机构：北京农学院中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 程序化冷冻前后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎的Hba-α蛋白分布和差异表达被引量：3
- 2016年
- 目的利用程序化冷冻的方法,探究冷冻前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中Hba-α蛋白的分布和差异表达的变化,为今后开发和利用新型哺乳动物源抗冻蛋白提供理论依据。方法从妊娠d5小鼠体内获取孵化囊胚;从小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎,利用Confocal显微镜和Western Blot技术对程序化冷冻前、后的各组胚胎进行Hba-α蛋白的分布和表达检测。结果孵化囊胚和休眠胚胎在程序化冷冻前、后均有Hba-α蛋白的表达;孵化囊胚经程序化冷冻后Hba-α蛋白的表达与冷冻前相比差异无显著性(P>0.05);冷冻前休眠胚胎与程序化冷冻前后的孵化囊胚相比,Hba-α蛋白的表达量显著下调(P<0.05);冷冻后休眠胚胎Hba-α蛋白的表达量显著低于其他各组(P<0.05)。结论程序化冷冻处理对小鼠休眠胚胎Hba-α蛋白的表达影响明显大于孵化囊胚;Hba-α基因具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。
- 刘迪倪和民顾美超李征王力红盛熙晖齐晓龙王相国郭勇
- 关键词：小鼠
- 冻融后小鼠休眠胚胎超微结构的变化被引量：5
- 2014年
- 目的从亚细胞超微结构的角度揭示其抗冻能力优于正常孵化胚胎的原因。方法利用透射电子显微镜观察小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎在细胞连接和各细胞器形态与分布上的差异,以及冻融培养后的变化,并进行相关比较分析。结果通过亚细胞结构对比分析发现:冷冻前小鼠休眠胚胎为紧缩状,处于能量代谢较低的"基态",通过冻融后培养,细胞器结构恢复与正常孵化胚胎冷冻前相似;而正常孵化胚胎经过冻融后,线粒体数量减少,细胞核松散,异染色质增多。结论小鼠休眠胚胎与正常孵化胚胎冻融后相比,其细胞状态更有利于物质储存及能量代谢,表明小鼠休眠胚胎从亚细胞超微结构的角度比其正常孵化胚胎更具抗冻性。
- 顾美超卢天罡刘云海倪和民张劭俣翟椿东邢书涵郭勇
- 关键词：小鼠超微结构冻融
- 瘦素对牛体外胚胎早期发育阻滞的克服被引量：2
- 2014年
- 旨在研究瘦素(Leptin)对于牛早期体外胚胎发育阻滞的影响。本研究采用:(1)卵母细胞受精后在不含血清情况下加入不同浓度的Leptin(0、1、10、100ng·L-1 Leptin并以血清组为对照),观察胚胎的发育能力;(2)用RT-PCR方法对正常发育胚胎及阻滞胚胎的Leptin mRNA表达量进行检测;(3)用RT-PCR方法对添加外源性Leptin胚胎的L-R、STAT3mRNA表达量进行检测。结果表明:(1)在卵母细胞受精后加入10或100ng·L-1Leptin胚胎的卵裂率及囊胚率显著高于对照组(P<0.05);(2)正常发育胚胎的Leptin mRNA的表达量显著高于阻滞组(P<0.05);(3)添加外源性Leptin胚胎L-R、STAT3mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上表明:Leptin在牛早期胚胎发育过程中起到重要作用,Leptin和L-R表达量降低预示着胚胎发育停止,并通过JAK/STAT3途径发挥作用。
- 阎芃倪和民刘云海郭勇梁琳郑雪莹
- 关键词：LEPTIN发育阻滞
- 利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究
- 2016年
- 利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。
- 邢书涵李方舟曹玉桃顾美超倪和民刘云海郭勇
- 关键词：大尾寒羊脂质体转染重构胚
- Oct4基因在猪孤雌激活和体外受精早期胚胎中的表达特征
- 2013年
- 目的研究植入前胚胎发育重要基因Oct4在猪孤雌和体外受精胚胎中的表达特征。方法收集成熟卵母细胞、孤雌和体外受精2细胞、4细胞、8细胞胚胎和囊胚,做荧光即时定量PCR检测,以体外成熟的猪卵母细胞做对照分析相对表达量。结果孤雌组和体外受精组胚胎在8细胞期Oct4表达量均最高(P<0.05),在孤雌和体外受精组囊胚相对于其他时期Oct4表达量最低(P<0.05)。在同一时期孤雌和体外受精胚胎上Oct4表达并没有差异。结论多能性基因Oct4在卵裂发育时期表达量动态变化,孤雌胚胎在一定程度上可作为体外胚胎基因表达的模型,且不同的胚胎培养条件可能导致基因表达的差异。
- 王稳张凯任小侠朴学娇郑雪莹杨洪武刘云海倪和民郭勇
- 关键词：孤雌激活体外受精OCT4基因差异表达
- 程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究被引量：2
- 2017年
- 试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);休眠胚胎冷冻后C3mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调(P<0.05);冷冻前休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚(P<0.05);冷冻后休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚(P<0.05)。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。
- 刘迪倪和民顾美超卢文瑾盛熙晖齐晓龙王相国郭勇
- 关键词：小鼠囊胚
- 牛子宫内膜上皮细胞的体外培养及鉴定被引量：4
- 2018年
- 旨在改良牛子宫内膜细胞原代培养方法,并鉴定其特征。分别比较了单纯组织块培养法和先组织块培养后再消化纯化的方法对牛子宫内膜细胞进行培养以及纯化。经免疫荧光染色方法对两种方法获得的牛子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达鉴定。研究结果表明:先组织块培养后再消化纯化的方法获得的牛子宫内膜上皮细胞形态良好,纯度较高。因此,组织块培养后再消化纯化得到的牛子宫内膜上皮细胞是一种操作简单、高效的方法,用该方法得到的细胞可以在体外传至4~5代,此结果为牛繁殖生理及其机制模型的建立奠定基础。
- 詹同彤杨健蔡德霖王相国梁鸿斌谷传慧倪和民郭勇
- 关键词：子宫内膜上皮细胞组织块培养法纯化
- 程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎Hba-α蛋白分布和差异表达的研究
- 据报道,生存在南极零度以下极寒环境中的抗冻鱼(notothenioid fish),其血细胞数量显著减少,Hb的含量也明显降低。绝大多数南极抗冻鱼的Hb为单体形式,而不是脊椎动物Hb通常的四聚体结构,这暗示了低浓度的Hb...
- 刘迪倪和民顾美超王力红盛熙晖齐晓龙王相国郭勇
- 关键词：小鼠
- 文献传递
- 外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响
- 2013年
- 为了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10μg/mL FSH＋10μg/mL LH（对照组）和0、10、100、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明：对照组卵母细胞的生发泡破裂率（75.0%）和极体率（79.6%）均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组（P〈0.05）,而囊胚率各组之间均无显著差异（P〉0.05）。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。
- 杨菲姚学军闫芃梁琳郑雪莹邢书涵刘云海郭勇倪和民
- 关键词：孕酮卵母细胞体外成熟
- 小鼠输卵管中标记滞留细胞的定位研究被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在探讨小鼠输卵管中标记滞留细胞的存在与分布情况。C57乳鼠从出生后第3天开始,每隔1天分别在9:00和16:00皮下注射BrdU(5-溴-2-脱氧尿苷),8周后对输卵管取材进行冰冻切片和免疫荧光染色,用以检测BrdU标记滞留细胞的定位情况。结果显示:经过长周期的定位示踪,输卵管中有标记滞留细胞的存在,这些细胞自输卵管远端(壶腹部方向)至近端(峡部方向)呈现明显的梯度分布,并且其主要位于上皮组织中。以上结果表明,成年小鼠的远端输卵管上皮中很可能存在相应的前体细胞或干细胞。
- 乔静巧赵华山倪和民刘云海郭勇
- 关键词：标记滞留细胞免疫荧光染色输卵管小鼠
