山东省自然科学基金(ZR2010CL005)
- 作品数：9 被引量：50H指数：5
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- 九州虫草Zn^(2+)胁迫下金属硫蛋白的诱导产生规律及性质研究
- 2013年
- 目的探讨Zn2+胁迫下九州虫草Cordyceps kyusyuensis金属硫蛋白(MT)的产生及性质。方法以培养基中添加ZnSO4的方式,研究九州虫草在Zn2+胁迫下MT的产生规律。通过超声波细胞破碎、提取和凝胶柱色谱法对MT进行分离纯化,利用考马斯亮蓝法进行纯度鉴定。用电喷雾质谱法测定MT的相对分子质量,以Ellman’s方法测定巯基的量,以原子火焰吸收法测定Zn的量,以Ag饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT的量,用氨基酸自动分析仪对Zn-MT进行氨基酸组成分析。通过对羟基自由基(HO)、DPPH自由基(DPPH)和超氧阴离子自由基(O2)的清除率实验探讨九州虫草MT的抗氧化活性。结果菌丝体中Zn和MT的量随着培养基中Zn2+质量浓度(0~15 g/L)的增加而增加。在10 L发酵罐培养时,培养基中Zn2+质量浓度为15 g/L,培养时间为56 h,金属硫蛋白的量为14.335 mg/g菌丝体(湿质量)。对九州虫草的菌体蛋白通过2次凝胶柱色谱,冷冻干燥得到九州虫草MT,电喷雾质谱法测得其相对分子质量为6 750,每分子Zn-MT氨基酸总量为56个,含有20个半胱氨酸,含极少量的芳香族氨基酸,可结合6个Zn原子。九州虫草Zn-MT对于HO、DPPH、O2有较好的清除作用,清除效果依次为O2>DPPH>HO,其半数清除率质量浓度(IC50)分别为71.49、80.58、100.65 mg/L。结论通过紫外扫描图谱分析、蛋白柱色谱图谱分析、九州虫草Zn-MT理化性质以及抗氧化活性的测定,可以判断其与标准的兔肝MT非常相似,进一步可以确定通过九州虫草菌丝体液态发酵法可生产MT,以期为工业生产提供可靠的理论依据。
- 张琪程显好郭文娟刘凤红王朝霞
- 关键词：金属硫蛋白分离纯化氨基酸组成抗氧化活性
- 亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质被引量：1
- 2014年
- 【目的】探讨锌离子诱导亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii)菌丝体金属硫蛋白的产生及性质。【方法】亚香棒虫草菌丝体以18 g/L Zn2+在10 L发酵罐中诱导培养64 h后收集菌丝体,产率为每升发酵液收集12.2 g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过2次凝胶柱层析,冷冻干燥得到亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子数,用电喷雾质谱仪测得分子量,全自动氨基酸分析仪测氨基酸组成。通过对羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率试验探讨亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性。【结果】发酵终点金属硫蛋白产量为15.3 mg/g菌丝体湿重。金属硫蛋白的分子量为7 680 Da,每分子蛋白质含有18个巯基、结合4个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含60个氨基酸,其中含有15个半胱氨酸,且含有组氨酸和芳香族氨基酸。亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性稍强于谷胱甘肽,弱于动物金属硫蛋白。【结论】亚香棒虫草在Zn2+胁迫下能够大量合成金属硫蛋白,且其金属硫蛋白的性质与哺乳动物金属硫蛋白有相似性。
- 张琪程显好郭文娟刘凤红王朝霞
- 关键词：金属硫蛋白氨基酸组成抗氧化活性
- 真菌对重金属生物吸附机理的研究进展被引量：15
- 2012年
- 对真菌生物吸附重金属的吸附机理进行了综述。从是否消耗能量和吸附作用发生的位置2方面对吸附机理做出简单分类,依据吸附作用发生在吸附剂细胞的不同位置,分别从细胞表面、细胞外和细胞内3个方面对吸附机理展开探讨。同时指出了真菌吸附重金属机理研究中存在的问题,并对今后的研究方向提出展望。
- 朱萌李维焕程显好左言美
- 关键词：真菌生物吸附重金属
- 九州虫草菌丝体对Mn的耐性及富集被引量：5
- 2012年
- 重金属耐性真菌的研究是生物修复的重要研究内容。研究了九州虫草(Cordyceps kyusyuensis)对于Mn的耐性及富集。在液体培养基中添加不同浓度(0—60 g/L)的Mn离子,测定其菌丝生物量、菌丝Mn含量、菌丝抗氧化酶活性和过氧化水平以及菌体细胞离子交换量、Mn在细胞中的分布的变化情况。实验结果表明九州虫草菌丝生物量与Mn浓度呈显著负相关,Mn浓度60 g/L为九州虫草菌丝生长极限浓度。菌丝中Mn含量随培养基中Mn浓度的增大而显著升高,10 g/L Mn时,菌丝细胞中Mn积累量达到细胞干重的1.0013%。九州虫草菌丝中过氧化产物丙二醛(MDA)、可溶性蛋白(SP)含量、可溶性糖浓度与培养基中Mn浓度呈负相关,实验组与对照组差异显著。抗氧化酶(过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD))活性随着培养基中Mn浓度增大而显著升高,但变化趋势不同。九州虫草菌丝细胞不可溶性组分中Mn的量(91.51%—98.6%)显著高于可溶部分(1.40%—8.49%)。九州虫草菌丝细胞壁离子交换量(CEC)随着培养基中Mn浓度的升高变化不明显。说明在九州虫草菌丝对Mn的富集过程中,其细胞壁、细胞膜和细胞器对于Mn结合发挥了主要作用,细胞质中可溶性成分对Mn的结合发挥次要作用。在Mn的胁迫下,增强抗氧化酶系统的协同作用以清除大量自由基是细胞对锰耐性的重要机制。
- 罗毅程显好张聪聪李维焕于德洋
- 关键词：生物修复膜脂过氧化超积累
- 蜜环菌对锌的耐性和富集特性被引量：1
- 2011年
- 研究了锌对蜜环菌Armillaria mellea生长的影响,蜜环菌对于锌的耐性和富集特性,以及锌胁迫下蜜环菌的抗氧化酶的变化情况。结果表明,锌浓度45mg/L下对于蜜环菌菌体的生长有显著促进作用(P<0.05),锌浓度90mg/L以上时,蜜环菌菌体的生长受到抑制(P<0.05)。蜜环菌的子实体萌发和子实体生物量在锌的浓度为45mg/L以下时与对照组无显著性差异(P>0.05),锌的浓度超过90mg/L后子实体不能萌发。培养基锌含量在270mg/L以下时,皮壳状菌丝中锌的含量随培养基中锌浓度的增大而增大。培养基锌含量在135mg/L以下时,菌索中锌的含量随培养基中锌浓度的增大而增大。随着培养基中锌浓度的提高,菌丝和菌索POD、CAT、SOD活性都有增加,PPO的活性则是先升高后降低,而且菌丝与菌索之间抗氧化酶活力有显著差异(P<0.05)。
- 朱林程显好李维焕刘静图力古尔
- 关键词：蜜环菌子实体菌丝体抗氧化酶
- 锰离子胁迫对蛹虫草菌丝体内虫草素、腺苷含量的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探讨锰离子胁迫对蛹虫草菌丝体内虫草素、腺苷含量的影响。方法在液体培养基中添加不同浓度的锰离子（0～100g·L^-1），探讨其对蛹虫草菌丝生物量、菌丝体内锰积累量、菌丝体内抗氧化酶[（过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）]活性，以及对菌丝体内虫草素、腺苷含量产生的影响。结果在0～100g·L^-1锰离子的梯度范围内，蛹虫草菌丝生物量随处理锰浓度的增高而呈显著降低；菌丝体内锰的积累量随处理锰浓度的增高而显著升高；过氧化氢酶酶活、过氧化物酶酶活及超氧化物歧化酶酶活随着锰浓度的增高呈现先升高后降低的趋势。蛹虫草菌丝体内虫草素的含量随锰浓度的增高而显著升高。腺苷含量在锰浓度0-30g·L^-1内降幅显著，之后保持相对稳定。结论锰离子产生的氧化胁迫会导致菌丝体中虫草素合成的增多，而锰离子胁迫能抑制腺苷的产生。
- 左言美程显好朱萌李维焕
- 关键词：虫草素抗氧化酶氧化胁迫腺苷
- 锌富集对蛹虫草菌丝体内虫草素、腺苷含量的影响被引量：8
- 2013年
- 为了解蛹虫草菌丝体对锌的富集特性，研究锌富集对蛹虫草菌丝体内虫草素、腺苷含量的影响，通过在液体培养基中添加不同质量浓度的锌离子（0—35一g/L），探讨其对蛹虫草菌丝生物量、菌丝体内锌积累量，以及锌的富集对菌丝体内虫草素、腺苷含量产生的影响。结果表明：在0～35g／L锌离子的梯度范围内，蛹虫草菌丝生物量与锌质量浓度呈显著负相关，锌质量浓度35g/L为蛹虫草菌丝生长极限浓度。锌质量浓度40．0g／I及以上菌丝生长受到完全抑制。菌丝体内锌的积累量随锌质量浓度的增加而显著升高，锌质量浓度为35．0g/L时锌积累量可达到193．87mg／g（干重）。蛹虫草菌丝体内腺苷的含量随锌质量浓度的增加而降低，在锌质量浓度为5g/L时降幅显著，腺苷含量仅为对照组的17．24％，之后腺苷含量变化趋势趋于水平。腺苷含量的降低可能是因为锌的富集干扰了蛹虫草菌丝体内初生代谢的正常进行。虫草素的含量随锌质量浓度的增加而显著降低，可能是由于其直接前体腺苷含量的降低，或是zn离子的加入，使得某些被刺激的酶和基因通过转录因子影响了虫草素的合成。
- 左言美程显好朱萌李维焕
- 关键词：蛹虫草耐性虫草素腺苷
- 大型真菌重金属富集的研究进展被引量：17
- 2011年
- 大型真菌是一类重要的生物资源,在自然界物质循环和维持生态平衡中发挥着非常重要的作用。自从大型真菌富集重金属的富集特性被发现以来,国内外的相关研究陆续展开。从大型真菌的重金属富集作用和重金属超积累作用、大型真菌富集重金属的生理生化机制及大型真菌重金属富集特性的应用等方面,总结、评述了大型真菌重金属富集方面的研究进展。
- 于德洋程显好罗毅李维焕
- 关键词：大型真菌重金属生物富集超积累
- 蛹虫草金属硫蛋白分离纯化及性质研究被引量：3
- 2014年
- 研究探讨锌离子胁迫下蛹虫草Cordyceps militaris金属硫蛋白的产生及性质。蛹虫草菌丝体以15g/L Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到蛹虫草金属硫蛋白纯品。利用Bradford法进行蛋白质含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,发酵终点处金属硫蛋白含量为12.876mg/g菌丝体(湿重)。用电喷雾质谱法测得金属硫蛋白的分子量为7 390Da,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得每分子蛋白质含有14个巯基、结合5个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸。以上表明,研究中的蛹虫草金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异较大,但与酵母菌金属硫蛋白结构组成类似。
- 张琪程显好郭文娟刘凤红王朝霞
- 关键词：蛹虫草金属硫蛋白氨基酸组成
