新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200910102)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王炜王宁包慧芳杨慧周亚飞更多>>
- 相关机构：新疆农业科学院石河子大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目新疆维吾尔自治区重大科技专项新疆维吾尔自治区科技支疆项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 响应面法优化黄色短杆菌c-11产L-丝氨酸发酵培养基被引量：3
- 2011年
- 【目的】利用响应面法对黄色短杆菌c-11发酵培养基进行优化,以提高L-丝氨酸产率。【方法】先采用Plackett-Burman实验法对发酵培养基8个因素(蔗糖、酵母膏、硫酸铵、KH2PO4、MgSO4、生物素、VB1和碳酸钙)的效应进行评价,筛选出主要因素。之后采用最陡爬坡试验逼近主要因素(蔗糖、酵母膏和硫酸铵)的最大响应区域。在此基础上,采用Box-Behnken结合响应面法(RSM)确定主要因素的最佳水平,并通过二次方程回归分析。【结果】蔗糖浓度为83 g/L、酵母膏浓度为31 g/L和硫酸铵浓度为29 g/L时,此时模型稳定点预测值L-丝氨酸产量为22.27 g/L,验证值为22.65 g/L,预测值与验证值之间吻合较好。【结论】优化后的发酵培养基使c-11菌株的L-丝氨酸产量提高了28.11%。
- 杨慧包慧芳王宁王炜
- 关键词：L-丝氨酸黄色短杆菌
- 磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coli JM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中,构建重组表达载体并转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。【结果】通过PCR扩增得到约1100 bp的DNA片段,经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99.27%的同源性;对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的命名为pEC7-C;重组表达载体转化宿主菌,SDS-PAGE分析可见约41 kD与理论大小一致的目标蛋白条带。【结论】重组表达载体转化后E.coliBL21中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高,证明serC基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达,为进一步构建L-丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础。
- 赵忠润包慧芳王宁周亚飞杨慧王炜
- 关键词：基因克隆原核表达
- 谷氨酸棒状杆菌gdh基因在黄色短杆菌C-11中的克隆及表达
- 2011年
- 【目的】研究谷氨酸脱氢酶的表达对L-丝氨酸产率及发酵效率的影响。【方法】从谷氨酸棒杆菌模式菌株C.glutamicum ATCC39135中克隆出gdh基因,以大肠杆菌-黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7为基础,构建重组质粒pEC7G,并转化黄色短杆菌B.flavum C-11,获得重组菌株C-11G。【结果】重组菌株C-11G的GDH酶活力提高32.7%,产酸率为15.28 g/L,比原宿主菌提高了33.80%。【结论】成功构建重组菌株C-11G,所克隆的gdh基因有较高表达活性,并对L-丝氨酸产量的提高有促进作用。
- 王宁包慧芳杨慧王炜
- 关键词：谷氨酸脱氢酶电击转化
