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血管损伤反应对血管平滑肌合酶Ⅰ和转录释放因子表达的影响及机制被引量：1: 2017年; 目的探讨聚合酶Ⅰ和转录释放因子(polymeraseⅠand transcript release factor,PTRF or Cavin^(-1))在损伤血管后血管再狭窄病理过程的作用及分子机制。方法将200~220 g雄性Sprague Dawley大鼠采用数字表法随机分为假手术组和血管损伤组,血管损伤组制备颈动脉损伤动物模型。用苏木精伊红染色显示损伤后颈动脉的结构,免疫荧光、Western blotting检测损伤后血管的Cavin^(-1)蛋白表达,real-time RT-PCR方法检测损伤后血管的Cavin^(-1) mRNA表达,免疫组织化学、Western blotting、免疫共沉淀法检测颈动脉泛素化蛋白的表达。大鼠动脉平滑肌细胞实验分为(1)空白对照组(control,CTRL);(2)CHX组:用放线菌酮(cycloheximide,CHX,25μmol/L)预处理1 h;(3)CHX+MG组:用CHX预处理1 h后,接着用MG 132(蛋白酶体抑制剂,10μmol/L)处理24 h;(4)CHX+CQ组:用CHX预处理1 h后,接着用氯喹(chloroquin,CQ,10μmol/L)处理24 h。应用Western blotting检测细胞Cavin^(-1)蛋白浓度。结果动物模型中,球囊损伤后,血管壁明显增厚,Cavin^(-1)表达显著下降(P<0.05),Cavin^(-1) mRNA表达差异不明显,泛素化蛋白表达显著上调(P<0.05)。细胞实验中,应用CHX预处理可明显降低平滑肌细胞Cavin^(-1)的表达(P<0.05),而CHX+MG可以明显对抗CHX上述作用过程(P<0.05)。结论球囊损伤颈动脉后,血管的Cavin^(-1)蛋白表达下调,其机制可能与增加的泛素化-蛋白酶体降解途径有关。; 陈雪莹姚烨周高适陶诗婉陈兆煜谈智; 关键词：血管损伤平滑肌细胞泛素化血管再狭窄

Spinal Long-term Potentiation Underlies Chronic Pain: Spinal long-term potentiation（LTP） at C-fiber synapses induced by injury or electrical high frequency stimulat...; Li-Jun ZhouJiyun PengMadhuvika MuruganYong LiuUkpong B.EyoZhi TanXiao WeiXian-Guo LiuLong-Jun Wu; 关键词：MICROGLIA BDNF; 文献传递

一种手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良的小鼠原代海马小胶质细胞培养法: 2019年; 本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法,获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞,以用于小胶质细胞的相关研究。选取2~4周龄SPF级C57BL/6J小鼠,PBS灌注后取海马组织剪碎,使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离海马组织,获得单细胞悬液,再经去碎片试剂去除髓鞘等组织碎片。在4℃孵育CD11b免疫磁珠15 min后,细胞悬液经免疫磁珠细胞分选(magnetic activated cell sorting, MACS)两次过柱提高小胶质细胞纯度。将分选后细胞离心重悬,种在多聚赖氨酸包被后的24孔培养板中,用完全培养基或TIC培养液(以TGF-β、IL-34和胆固醇为主要营养成分的无血清培养基)培养4 d后进行其他检测。结果显示:(1)使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离可得到含有(56.03±2.10)%活细胞的单细胞悬液;(2)与免疫抗体包被筛选法(immunopanning)相比,经过MACS两步分选后,可得到更多且纯度高达(86.20±0.68)%的小胶质细胞;(3)使用TIC培养液培养4 d后,可获得分枝状、形态类似静息状态的原代小胶质细胞;(4) q RT-PCR检测显示,与完全培养基培养相比,TIC培养液培养的小胶质细胞在4 d和7 d后TNF-α、IL-1β及CCL2 m RNA表达水平更接近急性分离后的小胶质细胞。上述结果提示,采用手动解离海马组织,经MACS两步分选及TIC培养后,可以获得高纯度、高活性且接近在体静息状态的小胶质细胞。; 许雅南周利君揭英桃麦春林张珺林震嘉谈智; 关键词：小胶质细胞海马磁珠分选原代培养

α7nAChR激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制被引量：2: 2016年; 【目的】探讨α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 n Ach R）激动剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制。【方法】培养出生2~3d大鼠心肌成纤维细胞（CF）,取传代2~4代细胞,分为1空白对照组（control）;2模型组（AngⅡ10-7 mol/L）;3ACh预处理组：ACh＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;4α7n ACh R激动剂组：α7n ACh R激动剂＋AngⅡ组（PNU-282987 5×10-6 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;5α7n ACh R拮抗剂组：ACh＋甲基牛扁碱柠檬酸盐（MLA）＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L＋MLA 1×10-6 mol/L）。干预24 h后,应用CCK-8试剂盒检测CF的增殖能力,western blot检测胶原蛋白Ι、α-SMA、α7烟碱乙酰胆碱受体（α7n ACh R）、核中p65蛋白表达;Real-time PCR检测α7n ACh R的m RNA表达。【结果】AngⅡ干预24h,CF增殖显著提高,胶原蛋白Ι、α-SMA、核中p65蛋白的表达明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低;Ach、α7n ACh R激动剂预处理后抑制CF增殖,胶原蛋白Ι、α-SMA和核中p65蛋白的表达降低,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达升高;Ach＋MLA预处理,CF增殖再次提高,胶原蛋白Ι、纤维化因子α-SMA、核中p65蛋白的表达再次明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低。【结论】α7n ACh R激动剂抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,其机制可能与NF-κB信号通路有关。; 符宇谈智吴涛耿登峰; 关键词：心肌成纤维细胞胆碱能抗炎通路

ACh对COCl2化学缺氧诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及其分子机制被引量：4: 2016年; 【目的】探讨乙酰胆碱(Ach)对抗氯化钴(CoCl_2)诱导H9C2心肌细胞缺氧损伤的作用及其分子机制。【方法】应用600μmol/L CoCl_2处理H9C2心肌细胞12 h以建立缺氧损伤细胞模型,应用ACh 10^(-3) mol/L预处理8 h建立心肌细胞保护模型,实验分为1空白对照组(control);2损伤模型组(CoCl_2600μmol/L);3 ACh预处理组(ACh 10^(-3) mol/L+CoCl_2600μmol/L);4ɑ7胆碱能受体(ɑ7n ACh R)拮抗剂组:ACh+甲基牛扁碱柠檬酸盐(MLA)+CoCl_2组(ACh 10^(-3) mol/L+CoCl_2600μmol/L+MLA 10-6mol/L)。应用CCK-8试剂盒检测细胞存活率。双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(ROS)水平。JC-1荧光显微镜照相法检测细胞线粒体膜电位水平改变。Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的形态及数量的变化。Fluo4-AM荧光显微镜照相法测定细胞胞质内钙离子水平的改变。Western Blot检测Drp1、caspase-3蛋白水平。【结果】600μmol/L CoCl_2处理显著损伤H9C2心肌细胞,线粒体膜电位丢失,ROS生成、细胞凋亡率、胞内钙离子显著增加(P<0.001),明显上调Drp1、caspase-3表达水平(P<0.001);应用ACh预处理可明显提高H9C2心肌细胞存活率(P<0.001),ROS水平下降,线粒体膜电位丢失减少(P<0.001),细胞凋亡率、胞内钙离子明显下降(P<0.001),显著抑制CoCl_2对Drp1、caspase-3表达的上调作用(P<0.01);ACh+MLA预处理可对抗ACh上述作用过程。【结论】ACh具有保护缺氧H9C2心肌细胞的作用,其机制可能与通过激动ɑ7nAChR抑制钙离子-Drp1通路有关。; 吴涛耿登峰符宇高佳佳谈智; 关键词：H9C2心肌细胞心肌缺氧

改良的Trizol法提取小鼠皮肤RNA技术被引量：2: 2020年; [目的]由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶,采用经典Trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足.因此,本研究旨在通过改良的Trizol法实现高质量的皮肤RNA提取.[方法]采用不同处理方式(Tri:Trizol包埋;Pro:RNA样本保护液包埋;Cry:先冷冻液氮再冷冻-80℃冰箱;LNG:液氮研磨;Cut:采用剪刀剪碎组织)提取的小鼠正常皮肤RNA为实验组;脊髓组织作为参照组,并以咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型皮肤组织作为保真性验证组.我们采用紫外分光光度法、琼脂凝胶电泳法、定量逆转录PCR法(qRT-PCR)等方法来检测经典Trizol法(1-Tri,Nor)和改良Trizol法(2-Tri,LNG-Tri,Tri-Cut,Pro)提取的RNA浓度、纯度和完整性以及IL-1βmRNA表达的差异性情况.[结果]①与脊髓组织相比,经典Trizol法(1-Tri)获得的正常皮肤组织总RNA量要低,DNA污染和5S RNA条带明显,IL-1βmRNA相对表达偏高,说明经典Trizol法在皮肤组织中提取RNA存在局限性,需要进行改良.②在不同小鼠皮肤样本处理组中,改良的2-Tri法和LNG-Tri法获得的RNA浓度更高,同时RNA降解、DNA污染更低,IL-1βmRNA表达更接近正常水平.更重要的是,在小鼠银屑病模型中,2-Tri法提取的RNA样本能真实反映出正常皮肤与银屑病变皮肤之间IL-1βmRNA的变化趋势.[结论]改良的2-Tri或LNG-Tri法分离的总RNA质量好,能可靠地反映生理或病理条件下的mRNA表达模式.; 林震嘉张辉揭英桃熊媖唐源谈智刘先国周利君; 关键词：RNA提取小鼠皮肤 TRIZOL 银屑病

Caveolae-caveolin-1-PTRF／cavin-1系统与血管平滑肌细胞迁移：一种可能的机制被引量：4: 2013年; 动脉粥样硬化性疾病（如冠状动脉粥样硬化和脑动脉粥样硬化）仍是全球范围内引起死亡的主要原因[1]。在动脉粥样硬化的演变过程中,血管壁首先表现为动脉内膜的增厚,内膜增厚可以由于年龄和应对逐渐升高的血压导致内膜损伤而产生[2]。; 陈兆煜袁乔谈智; 关键词：血管平滑肌细胞小凹蛋白1

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国家自然科学基金(81270377)

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