国家重点基础研究发展计划(2001CB510301)
- 作品数：19 被引量：64H指数：7
- 相关作者：孙开来金春莲刘丽英吉士俊王莉莉更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳市妇婴医院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 先天性马蹄内翻足与HoxA基因传递不平衡研究
- 2008年
- 目的探讨先天性马蹄内翻足（CCF）与HoxA基因是否存在相关性。方法在胚胎发育调控相关的HoxA基因染色体区域7p14—15内选择微卫星DNA标记D7S516和D7S1808，应用聚合酶链反应及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对54个CCF核心家系的162名成员进行基因型分析，并进行传递不平衡检验（TDT）。结果在D7S516位点上共检测到7个等位基因，TDT结果显示CCF与D7S516位点存在传递不平衡（X^2=20.3864，P〈0.01）。D7S1808位点上共检测到7个等位基因，但TDT结果显示CCF与D7S1808位点不存在传递不平衡（X^2=11．3196，P〉0.05）。结论人类CCF与HoxA基因有相关性，HoxA基因可能是CCF的另一个易感基因。
- 王宁青马瑞雪吉士俊金春莲
- 关键词：畸形足先天性传递不平衡检验
- 马蹄内翻足易感基因多位点遗传多态性分析
- 2010年
- 目的了解马蹄内翻足易感基因6q12-13区域内7个短串联重复序列（STR）位点的遗传多态性分布,获得相应位点的群体遗传学信息。方法 2006-2007年于沈阳军区第二零二医院选取常规体检的100名健康人,应用PCR扩增技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 ,对其染色体6q12-13区域内7个多态位点的多态性进行分析。结果 7个多态位点,509-8B2F/R位点检测到8个等位基因;D6S239位点、D6S1681位点、D6S280位点、D6S421位点各检测到6个;D6S313位点、D6S1036位点各检测到5个;基因型检测：D6S1036位点为12种,D6S239位点为18种,D6S1681位点为19种,D6S421位点为14种,509-8B2F/R位点为27种,D6S280位点为19种,D6S313位点为10种;7个多态位点的杂合度为77%~85%。结论马蹄内翻足易感基因6q12-13区域的7个STR位点均具有较高的多态性,是进行连锁或关联分析、基因诊断的理想位点。
- 刘丽英金春莲林长坤蒋丽孙开来
- 关键词：马蹄内翻足易感基因遗传多态性
- 软骨源性视黄酸敏感蛋白基因在先天性马蹄内翻足中的表达
- 2009年
- 目的探讨先天性马蹄内翻足肌肉组织中的软骨源性视黄酸敏感蛋白（cartilage-de—rivedretinoicacidsensitiveprotein，CD-RAP）基因的表达是否存在异常。方法留取25例先天性马蹄内翻足患儿行Mckay松解术时切除的足外展拇肌，5例正常对照组织标本来源于3例创伤、1例足月引产胎儿及1例尸检（均经本院的医学伦理委员会批准）。采用半定量RTPCR方法检测马蹄内翻足及正常外展拇肌中CDRAP基因mRNA的表达情况。结果半定量RT-PCR研究表明马蹄内翻足患儿足外展拇肌组织中CD-RAP基因与13-actin基因平均密度（ADV）比值为0．376±0．241，相应正常组织二者比值为0．067±0．033，两组间差异具有统计学意义（t=6．143，P〈0．001）。结论先天性马蹄内翻足患儿足外展拇肌组织中CDRAP基因表达水平明显高于正常对照组，表明先天性马蹄内翻足患儿足外展拇肌组织中的CDRAP基因表达上调，CD-RAP基因或其调节基因可能与先天性马蹄内翻足的发生有关。
- 李连永刘丽英赵群孙开来金春莲
- 关键词：马蹄足畸形基因表达逆转录聚合酶链反应
- COL9A1基因与先天性马蹄内翻足相关性的研究被引量：14
- 2007年
- 应用限制性片段长度多态性技术结合测序方法,分析了84个先天性马蹄内翻足核心家系COL9A1基因内2个SNP位点rs592121与rs1135056的基因型;应用ETDT软件统计分析各SNP位点基因型与先天性马蹄内翻足的相关性;应用TRANSMIT软件构建单倍型并统计分析单倍型频率是否存在差异;采用半定量RT-PCR方法检测25例马蹄内翻足患儿肌肉及肌腱组织COL9A1基因mRNA的表达。结果发现rs592121及rs1135056位点在先天性马蹄内翻足中均存在传递不平衡(P<0.05)。马蹄内翻足患儿组织中COL9A1基因表达水平高于正常组织(t=4.7500,P<0.05)。提示COL9A1基因可能是先天性马蹄内翻足重要的易感基因。
- 刘丽英金春莲曹东华赵宁林长坤孙开来
- 关键词：先天性马蹄内翻足单核苷酸多态反转录聚合酶链反应
- FHL1基因表达与先天性马蹄内翻足:15例患者及3名正常人的对比分析被引量：2
- 2010年
- 背景:前期研究表明,在马蹄内翻足患者肌肉组织中存在FHL1基因表达下调,并利用凝胶阻滞实验在体外初步验证了HOXD13和FHL1基因启动子区转录因子预测位点的结合作用,但凝胶阻滞实验结果不一定能真实地反映体内转录调控蛋白和DNA结合的状况。目的:应用Western-blot技术进一步验证先天性马蹄内翻足患者足部肌肉组织中FHL1,HOXD13基因蛋白质水平的表达,应用染色质免疫沉淀技术验证在胚胎足部发育时在体内HOXD13和预测结合位点的结合作用。方法:15份先天性马蹄内翻足患儿肌肉组织标本由中国医科大学附属第二临床医院小儿外科提供,3份同年龄组正常儿童足部肌肉组织由中国医科大学法医学院提供,1例孕13周流产胚胎由中国医科大学附属第二临床医院妇产科提供。所有标本使用均经患者及其家属知情并同意。应用Western-blot方法检测15例先天性马蹄内翻足患儿及3例同年龄组正常儿童足部肌肉组织HOXD13和FHL1表达情况;并用软件预测FHL1基因上游HOXD13的结合位点,染色质免疫沉淀实验验证胚胎发育时HOXD13和FHL1的相互作用,以不表达HOXD13蛋白的脑组织作为对照。结果与结论:与同期正常儿童足部肌肉组织相比,15例人先天性马蹄内翻足患儿肌肉组织中有7例存在FHL1基因蛋白质水平表达下调,而这7例患儿中有5例同时存在HOXD13基因蛋白质表达下调。沉淀的人胚胎足部组织染色质中有预测HOXD13结合位点的扩增,无对照位点的扩增,对照脑组织中无预测位点的扩增。结果进一步验证显示了先天性马蹄内翻足患儿足部肌肉组织中FHL1、HOXD13基因表达下调;人类胚胎肢体发育过程中HOXD13蛋白可以和FHL1启动子区的预测位点结合发挥其转录调节作用。提示在人胚胎足部发育时,HOXD13表达下调导致了FHL1表达水平的下调,进而影响了足部肌肉生长发育和分化导致马蹄内翻足畸形的发�
- 王莉莉辛娜孙开来
- 关键词：先天性马蹄内翻足FHL1转录调控
- 马蹄内翻足大鼠模型踝部骨骼、组织及脊髓蛋白质组学分析被引量：5
- 2007年
- 目的 应用全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）诱发Wistar大鼠马蹄内翻足模型为实验材料，应用蛋白质学技术探讨先天性马蹄内翻足发病机理。方法 按135mg／kg体重经口给予孕10天Wistar大鼠ATRA，孕21天剖检胎鼠，提取畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部组织（去除皮肤）及踝部骨骼总蛋白，双向电泳分离蛋白，考马斯亮蓝染色，PDQuest软件、质谱及生物信息学分析差异蛋白。应用半定量逆转录P（鼠检测马蹄内翻足畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织Map、col2a1、tnnt1和ngfr基因表达。应用免疫组化染色检测Xiap蛋白表达。应用TUNEL法进行脊髓、踝部骨骼细胞凋亡检测。结果 经双向电泳发现马蹄内翻足模型胎鼠多种蛋白质表达存在差异，质谱及生物信息学进一步分析发现Ⅱ型胶原蛋白等16种蛋白表达发生改变。逆转录PCR检测进一步证实xiap、col2a1在脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调，tnnt1在踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调，ngfr在以上组织表达无异常。免疫组化染色进一步证实Xiap蛋白表达下调。神经、骨骼细胞凋亡发生率是对照组细胞凋亡发生率的5．4和10倍。结论 马蹄内翻足大鼠模型踝部组织（去除皮肤）、踝部骨骼及脊髓多种蛋白质存在表达差异。Xiap、C0l2a1和sTnT与马蹄内翻足相关，Ngfr与马蹄内翻足无关。ATRA可以诱导脊髓、骨骼凋亡发生率升高，与Xiap表达下调有关，在马蹄内翻足发生过程中发挥重要作用。
- 李增刚纪虹富伟能赵彦艳金春莲吉士俊孙开来
- 关键词：先天性马蹄内翻足全反式维甲酸双向电泳
- 雌激素对大鼠L6GNR4细胞FhI1表达的影响
- 检测雌激素对大鼠 L6GNR4细胞中 Fh11基因表达的影响,探讨雌激素影响肌肉生长、发育的机制。大鼠成肌细胞系 L6GNR4购自上海中科院细胞室;17-β雌二醇、雌激素受体抑制剂他莫西酚购自 Sigma 公司;半定量 ...
- 王莉莉富伟能孙开来
- 关键词：17-Β雌二醇下调FHL1肌肉
- 文献传递
- 先天性马蹄内翻足的遗传学研究进展
- 2007年
- 先天性马蹄内翻足是一种常见的先天畸形，常聚集发生于家族中但不符合典型的孟德尔遗传方式。遗传流行病学研究和复合分离分析提示先天性马蹄内翻足的发生存在着遗传因素的作用，因此探讨马蹄内翻足发生的分子机制将为提高遗传咨询、治疗的水平以及更好的理解足部的发育提供理论基础。
- 王莉莉孙开来
- 关键词：先天性马蹄内翻足复杂疾病易感基因
- HOXD13、FHL1和先天性马蹄内翻足的相关研究被引量：7
- 2008年
- 为研究HOXD13、FHL1和先天性马蹄内翻足的关系,应用变性梯度凝胶电泳技术检测HOXD13基因在先天性马蹄内翻足个体中的突变,应用半定量RT-PCR及免疫组织化学技术检测HOXD13、FHL1在先天性马蹄内翻足患者肌肉组织中的表达;并用软件预测FHL1基因上游HOXD13的结合位点,凝胶阻滞试验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证HOXD13和FHL1的相互作用。结果84例先天性马蹄内翻足患者中未发现HOXD13基因编码区突变存在。与同期正常足部肌肉组织相比HOXD13(33.3%),FHL1(46.6%)在先天性马蹄内翻足患者肌肉组织中表达明显下调。EMSA结果表明,当HOXD13存在时出现特异的DNA阻滞条带。上述结果说明:HOXD13的编码区突变可能不是先天性马蹄内翻足发生的原因,而HOXD13和FHL1表达水平的改变可能与马蹄内翻足畸形的发生有关,HOXD13可能通过直接调控FHL1发挥作用。
- 王莉莉富伟能李增刚孙开来
- 关键词：先天性马蹄内翻足FHL1突变
- 小RNA的研究现状被引量：7
- 2006年
- 长期以来,人们认为RNA只是起到遗传信息“桥梁”的作用,从DNA获得遗传信息再转化成蛋白质。然而,近十几年的研究表明———小RNA在基因调控和生长发育等方面发挥着重要作用。小RNA主要包括两大类:siRNA和miRNA。它们的功能既有相似又有差异,siRNA主要参与RNA干涉,而miRNA形成核糖核蛋白复合体(miRNP)调控基因表达。本文从siRNA和miRNA的结构、功能以及与人类疾病关系等方面综述了小RNA的最新研究进展。
- 纪虹孙开来
- 关键词：SMALLRNASIRNAMIRNA基因表达调控
