国家自然科学基金(81071396)
- 作品数：6 被引量：54H指数：3
- 相关作者：蒋晓飞刘红魏取好艾芙琪田月如更多>>
- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院浙江省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市医学重点学科(专科)建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 整合子中氨基糖苷-3′′-腺苷酰基转移酶多克隆抗体的制备与初步应用被引量：3
- 2012年
- 目的制备氨基糖苷-3′′-腺苷酰基转移酶[AAD（3）]特异性抗血清，并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子（PcS、PcH2、PcHl、PcW、PcS。P2、PcH2．P2、Pertl．P2和PcW—P2）下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增aadA2基因，并克隆至表达载体pETl9b中，诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD（3′′）蛋白，免疫大耳白兔制备抗AAD（3′′）特异性抗血清。以制备的抗AAD（3）抗血清为一抗，用免疫印迹法（WB）检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平，用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JMl09的最低抑菌浓度（MIC）。结果成功构建重组的AAD（3′′）蛋白表达质粒pETl9b—aadA2，经测序确认转化大肠埃希菌BL21（DE3）获得1株高表达可溶性重组AAD（3′′）蛋白的工程菌株，发酵后用镍柱纯化获得纯度〉90％的重组AAD（3′′）蛋白，免疫大耳白兔获得效价〉l：100000的抗AAD（3′′）特异性抗血清。WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD（3′′）蛋白的表达水平，设定启动子Pcw下游AAD（3”）蛋白的相对表达水平为1，重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcHl、PcS—P2、PcH2一P2、PcHl一P2及PcW—P2下游AAD（3′′）蛋白相对表达水平依次为12．9±2．3、9．1±1．0、2．0-t-O．4、16．0±1．3、14．1±1．3、10．5±0．7、8．9±1．7，且不同可变区启动子下游AAD（3′′）蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义（F=32．421，P〈0．01）。微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PcH2、PcHl、PcS—P2、PcH2一P2、PcHl-P2、PcW、PcW．P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JMl09的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64mg／L，表明不同可变区启动子下游aadA2基因
- 魏取好胡庆丰吕火祥周永列蒋晓飞李敏吕元
- 关键词：整合子类
- 医院感染褪色沙雷菌的临床分布与耐药性分析被引量：1
- 2015年
- 目的了解患者医院感染褪色沙雷菌的临床分布特点及对常用抗菌药物的耐药性变化,指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2009年1月-2013年12月华山医院住院患者送检标本分离出的褪色沙雷菌434株,进行药敏试验及统计分析;使用世界卫生组织耐药监控网提供的Whonet 5.4软件进行耐药率分析。结果从临床送检标本中共检出434株褪色沙雷菌,主要分离自痰液、伤口、尿液和分泌物等标本;褪色沙雷菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南及厄他培南的敏感率分别为74.4%、82.5%、84.8%、90.2%及88.9%,而褪色沙雷菌对碳青霉烯类药物的耐药率逐年提升,并有继续升高的趋势。结论褪色沙雷菌对碳青霉烯类药物的耐药率呈上升趋势,因此,临床应做好医院感染的监控,及时对病原菌耐药性进行监测分析,依据药敏结果合理选用抗菌药物,减少耐药菌株的播散。
- 王蓓刘红邹雪蒋晓飞
- 关键词：耐药率医院感染
- 泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究被引量：14
- 2011年
- 目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR（ERIC-PCR）和多位点序列分型（MLST）.结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac（6＇）-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.
- 王艳艳刘红杜昕李刚魏取好陈晓耘蒋晓飞
- 关键词：泛耐药肺炎克雷伯菌多位点序列分型PCR
- 革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验被引量：17
- 2011年
- 目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株（96.9%）准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株（90.8%）准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.
- 田月如阮斐怡刘红艾芙琪马逸珉江叶蒋晓飞
- 关键词：联合法
- 高分辨率熔解曲线法检测临床常见KPC基因亚型被引量：3
- 2011年
- KPC是一种近年新出现的碳青霉烯酶,可以水解包括碳青霉烯类抗菌药物在内的所有β内酰胺类抗菌药物,且仅轻微或不被克拉维酸抑制,给临床治疗带来极大困难[1].目前已经公开报道的亚型有KPC-2至KPC-11,但临床中流行的主要是产KPC-2或KPC-3的肺炎克雷伯菌[2],
- 李刚赵燕魏取好王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：基因亚型熔解曲线法肺炎克雷伯菌抗菌药物碳青霉烯酶
- 医院感染阴沟肠杆菌的分布与耐药性分析被引量：16
- 2015年
- 目的分析2009-2013年医院住院患者感染阴沟肠杆菌的临床分布特点及其耐药性,指导临床合理用药。方法收集2009年1月1日-2013年12月31日医院不同病区住院患者送检标本中分离出的阴沟肠杆菌386株,其分离严格按照《全国临床检验操作规程》进行,细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2Compact细菌鉴定仪,采用CLSI推荐的纸片扩散法进行药敏试验,数据采用Whonet5.4软件进行分析。结果 386株阴沟肠杆菌主要分离自痰液、尿液、伤口,分别占49.5%、13.7%、9.1%;高干病房、手外科、中心ICU、感染科和胸外科分离的阴沟肠杆菌最多,分别占14.8%、7.8%、7.5%、7.5%和7.3%;阴沟肠杆菌对哌拉西林、头孢噻肟、头孢他啶、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率分别为52.1%、57.3%、42.5%、34.7%。结论阴沟肠杆菌主要引起呼吸道、尿路与伤口感染,阴沟肠杆菌耐药率高,应合理使用抗菌药物,控制阴沟肠杆菌引起的医院感染。
- 于莹璐王蓓田月如刘红艾芙琪蒋晓飞
- 关键词：阴沟肠杆菌耐药率
